Способ получения производных пуринов или их солей

 

Изобретение касается пуринов, в частности способов получения производных пуринов формулы C(O)-NH-C(NH<SB POS="POST">2</SB>)=N - C=C - N = CH- N - CH<SB POS="POST">2</SB>-O-CH[CH<SB POS="POST">2</SB>-O-C(O)R]<SB POS="POST">2</SB>, где R-C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">6</SB>-алкил, адамантил, или их солей, обладающих биологической активностью, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых более активных и более растворимых в плазме веществ указанного класса. Синтез ведут ацилированием 9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанина ангидридом соответствыующей карбоновой кислоты или соответствующей карбоновой кислоты в смеси с дициклогексилкарбодиимидом. Целевой продукт выделяют в свободном виде или в виде соли. Новые соединения обладают более высокой активностью против вируса HSV-2 [штамм G], чем известное соединение, и лучшей растворимостью в плазме соединений, где R-C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">6</SB>-алкил, при токсичности ЛД<SB POS="POST">50</SB>*983320-4544 мг/кг. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

09) (11) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

0ПИСАНИК ИЗ0БРКТКНИя Г» ".:- :-" .""

Н llATEHTV

1 (21) 3549200/23-04 (22) 31.01.83 (31) 344703 (32) 01.02.82 (33) US . (46) 15 01.90. Бюл. NÐ 2 (71) Синтекс (Ю.С.A.) Инк, (US) (72) Жюльен Пьер Енри Верхейден и Джон Чарльз Иартин (ц;) (53) 54?.857.7.04 (088.8) (56) Вейганд-Хильгетаг. Современные методы эксперимента в органической химии. - И.: Химия, 1968, с. 349.

Патент СИА )1 4199574, кл. 424-200, опублик. 1979. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ

ПУРИНОВ ИЛИ ИХ СОЛЕЙ .(57) Изобретение касается пуринов, в частности способов получения про. изводных пуринов формулы 6(0)Изобретение относится,к способам получения производых пуринов - новых биологически активных соединений, которые могут быть применены в медицине.

Цель изобретения - способ получения новых производных пурина практически нетоксичных, обладающих более высокой противовирусной активностью и растворимостью в плазме.

Пример 1. 9-(1,3-Диацетилокси-2-пропоксиметил)гуанин., Смесь 3,00 г 9-(1,3-диокси-2"про, поксиметил)гуанина, 300 мг 4-диметиламинопиридина и 100 мл ангидрида уксусной кислоты интенсивно переме(51) 5 С 07 в 473/02, 473/18//A 61 к 31/52

NH-С(ИН,) = N-(=6-И=СН+СНк О-СВАН -О-С(0)К), где К вЂ” С,-С алкил, адамантил, или их солей, обладающих биологической активностью, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых более активных и более растворимых в плазме веществ укаэанного класса. Синтез ведут ацилированием 9-(1,3-диокси-2пропоксиметил) гуанина ангидридом соответствующей карбдновой кислоты или соответствующей карбоновой кислоты в смеси с дициклогексилкарбодиимидом.

Целевой продукт выделяют в свободном виде или в виде соли. Новые соединения обладают более высокой активностью против вируса HSV-2 (штамм Cj, чем известное соединение, и лучшей растворимостью в плазме соединений, где R = C -Сь-алкил, при токсичности

ЛД о 3320-4544 мг/кг. 3 табл. шивают в течение 3 сут при комнатной температуре. Ангидрид уксусной кислоты затем удаляют .выпариванием при пониженном давлением, а остаток перекристаллизовывают из метанола, получают 3,62 г {выход 913) 9-{1,3-диацетилокси-2-пропоксиметил)гуанина,, т.пл. 237-239 С.

Пример 2, 9-(1,3-(2,2-Диметилпропаноилокси)-2-пропоксиме" тил)гуанин.

Смесь 1,306 г. 9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанина, . 150 мг 4-диметиламинопиридина, 50 мл ангидрида

2,2-диметилпропановой кислоты и 75 мл сухого ДМФ интенсивно перемешивают

1537138 в течение 2 сут. ДИФ затем удаляют выпариванием при пониженном давлении, а к остатку добавляют 200 мл этилового эфира. После охлаждения смеси до

ООC отфильтровывают осадок, который перекристаллизовывают из метанола.

Получают 1,83 г (выход 84/) 9-(1,3ди-(2,2-диметилпропаноилокси)-2-пропоксиметил)гуанина, т.пл. 230-232 С.

Аналогично при использовании адамантанкарбоновой кислоты получают

2-амино-9- {1,3-ди-(1-адамантилкарбок, си) -2-пропоксиметил1-пурин, т.пл.

283-285 С.

Пример 3. 9-(1,3-ди-п-гексадеканоилокси-2-пропоксиметил)гуанин.

К 50 мг 9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанина в 5 мл N,N-диметилформамида добавляют 290 мг дициклогексикарбодиимида и.300 мг и-гексадеканойной кислоты. Полученный раствор перемешивают при 50 С в течение 50 ч.

Соединение осаждают в ледяной воде.

Воду три раза экстрагируют метиленхлоридом, Собранные метиленхлоридные экстракты концентрируют и очищают на препаративных силикагалевых пластинках, проявленных в смеси метанола и метиленхлорида (1: 9) . Получают 140 мг (970 9-(1,3-ди-п-гексадеканоилокси-

2-пропоксиметил)гуанина, т.пл. 150154 С.

Пример 4. Двукратный c техиометрический избыток 33-ного хлористого водорода в метаноле добавляют к растворуЗ5

1,0 г 9-(1,3-ди-п-октаноилокси-2-пропоксиметил) гуанина в 20 мл метанола. . Затем добавляют диэтиловый эфир до завершения осаждения. Полученный пр» дукт фильтруют, промывают диэтилов эфиром, высушивают на воздухе и пер. кристаллизовывают с получением. гидрохлорида 9-(1,3-ди-п-октаноилокси-2пропоксиметил)гуанина, Аналогично, все предлaãàåìûe ñîåдинения, ймеющиеся в виде свободного основания, можно превращать в соответствующие соли с кислотамй путем обработки соответствующей кислотой, например, хлористоводородной, бромистоводородной, серной, фосфорной, уксусной,пропионовой, гликолевой, пировиноградной, щавелевой, малоновой, янтарной, яблочной, малеиновой, фу" маровой, винной, лимонной„ бензойной,,55 коричной, миндальной, метансульфоновой, этансульфоновой, р-толуолсул фоновой и др, Пример 5. 1,0 г гидрохлорида 9-(1,3-ди-п-октаноилокси-2-пропоксиметил)гуанина, взвешенного в

50 мл диэтиловового эфира, перемешивают с двукратным стехиометрическим избытком разбавленного водного раствора карбоната калия до полного растворения соли. Затем отделяют органический слой, промывают его два раза водой, высушивают его сульфатом магния и выпаривают.

Получают 9-(1,3-ди- -октаноилокси-2-пропоксиметил)гуанин" в виде свободного основания.

Пример 6, Предназначенный для заражения штамм G вируса Herpes

simplex 2 выращивали в клеточных культурах НЕр-2. Вирус в течение 1 ч адсорбировали, а на клетки помещали свежую среду. Клетки инкубировали о при 35 .С до заражения всех клеток.

Клеточную взвесь замораживали при о

-70 С, а затем ее оттаивали и центрировали для удаления клеточных остатков. Жидкость над клетками распределяли по порциям и хранили ее в замороженном при -70 С состоянии до ее употребления. Разбавлением10 этой жидкости получали 593-ную инфекцио.:-:ную дозу клеточной культуры (CCIDs ) с НЕр-2; разбавлением 10 при тесте на иммунитет у мышей получали 5И-ную летальность (.С zp) .

Мышам-самкам Swiss webster (20 мышей в группе) весом 15-17 г вводили внутрибрюшинным путем 0,2 мл ЕМЕМ, содержащего вирусы в количестве

10LCgp/мышь. Мыши, зараженные вирусами в количестве 10 + 10 LC p, служат контролем вирулентности.

Испытуемые соединения вводили че- рез 6 ч после заражения мышей. Мышам| вводили соединения в солевом растворе (подкожно) в количестве 20 мг/кг.

20 мышам из одной группы, служащей контролем, вводили только солевой раствор (подкожно). Введение препаратов повторяли через 24, 48, 72 и

96 ч после заражения мышей.

В указанном испытании предлагаемые соединения проявляли противовирусное действие.

Результаты приведены в табл.1.

Противовирусное действие орально введенных препаратов у мышей, зараженных вирусом HSV-2, приведено в табл.1.

О х

СН20СН CH20CR

11

О

Средняя выживаемость *, сут., через 21 сут после заражения***

Оральная доза*, мг/кг

С/0/R

$QTg****

Предлагаемое соединение

11 7 + 2,8

8,6 + 1,0*

Диацетилокси

Дипропаноилокси

Дибутаноилокси

Дигексаноилокси

8 6 + 1,0

8,6 и 1,0

12,1 + 1„5

13,6 4. 4,3

20, 20

13,4 + 5,6

8,6+ 1,0

5 1537 l

Пример 7. Испытание на ост-рую токсичность у мышей.

Мышам-самцам swiss-ИеЬэ ег (simousen) весом 25 г (по 5 особей в группе) подкожно вводили соединения, приведенные в табл.2. Испытуемое вещество, как указано в таблице, вводили лишь на первый день опыта. Затем в течение

21 сут мышей проверяли на смертность. 10

rl р и м е р 8. Растворимость предлагаемых соединений. Мышей самцов весом 25-30 r помещали со свободным доступом к корму и воде в клетки.

Накануне дачи медикамента и в течение 3 ч после введения препарата животных не кормили.

Испытуемую единичную дозу каждо- 20

ro соединения вводили орально. Все оральные дозы взвешивали в носителе, состоящем из, натрийкарбоксиметилцеллюлозы (0,53), хлористого натрия (0,93). Tween 80 (0,44), бенэилового 25 спирта (0,9ь) и воды (97,33) ° Каждое соединение вводят в объеме дозы, эквивалентной 30 мг/кг предлагаемого соединения.

Плазменная концентрация каждого соединения в пересчете на предлагаемое соединение в качестве эталона приведена в табл.3.

Проведенные испытания показали, что соединения, получаемые предлагае35 мым способом обладают более высокой активностью против вируса HSV-2

38 (штамм С) при внутрибрюшинном введении, при этом растворимость в плазме предлагаемых производных (R — алкил С,-С ) выше, чем растворимость известного соединения сравнения. Соединения могут быть отнесены к категории практически нетоксичных.

Формула изобретения

Способ получения производных пуринов общей формулы

НХ 1 О

СН2ОСНС 1<0<8

П где R — С,-С -алкил, адамантил, или их солей, отличающийся тем, что азотсодержащее гетероциклические производные формулы

HN, g) НР СН2ОН

СН20СНСН20Н подвергают ацилированию ангидридом соответствующей карбоновой кислоты или соответствующей карбоновой кислоты в смеси с дициклогексилкарбодиимидом и целевой продукт выделяют в свободном виде или в виде соли.

Таблица 1

1537138

Продолжение табл. 1

Оральная доза*, мг/кг

С/0/R

S S V*9<**

Предлагаемое соединение

12,5 «+ 4,4

8,3 + 0,9

8,3+ 0,9

8,3+ 0,9

1",7 «+ 2,2

11,1 4- 2,3

* Введение осуществляли ежедневно в течение 4 сут (первый раз через 24 ч после заражения).

** Увеличение выживаемости по сравнению с контрольными мышами обработанными только SSV, во всех случаях

- оказалось статистически показательным.

*** Заражение вирусами HSV-2 (штамма С) путем внутрибрюшного введения.

**** Средство, содействующее суспендированию (SSV). **** Известное соединение.

Т а б л и ц а 2

С/0/R

Количество мышей

Количество погибших особей

Введение

Доза, мг/кг

ЛД501 мг/кг

Контроль

Ди-2,2-диметилпропаноилокси

То же

5 Подкожно 0

То же

«11, l1» «l l»

3320.

) 3320

11»

«l l»

Ди-1-адамантилкарбонилокси

То же

568

1136

2272

4544

>4544

5

11

5

»»l I «« 0

0

»11

Ди-и-деканоилокси

То же

497

994

1988

3976

)3976

5

«I I» 0

«I I»

l I»

Ди-2;2-диметилпропаноилокси

Ди-1-адамантилокси

Водород*****

Средняя выжи ваемост ь**, сут, через 21 сут после заражения*** о,„

HN x) О н, м сн,оса

СН20СНСН ОСЯ

Растворимость с/о/к

Составитель В.Волкова

Техред Л.Олийнык Корректор З.Лончакова

Редактор Л.Пчолинская

Заказ 117 Тираж 322 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина;101

r °

Водород

Диацетил

Дипропионил Дибутирил

1531138 10

Таблица 3

1,23

1,48

1,15