Способ получения производных гуанина в виде рацематов или @ ( @ ) изомеров

 

Изобретение касается производных гуанина, в частности соединений общей формулы I NH-C(0) / H2N-C N-C- N-CH -chr,-chr -CH20H, где R,Н при или R Н при R,OH, в виде рацематов или R(+) изомеров, которые как обладающие антивирусной активностью могут быть использованы в медицине. Для вьивления физиологической активности получены новые производные гуанина - соединения I. Синтез ведут кислым гидролизом соответствующего гуанина, в котором при N имеется другой радикал - Rg - метил- 1,3-диоксан; 1,2,0-изопропштиден-1 ,2-диоксибутан; R(+)-1,2,0-изопропилиден-1 ,2-диоксибутан; а при С -атоме находится галоид. Вьщеление ведут в виде рацемата или R(+) изомера. В сравнении с известным 9-

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3480213/23-04 (22) 20,08.82 (23) 22.!2.81 (31) 800 9040-0 (32) 22. 12.80 (33) SE (46) 23 ° 11 ° 86. Бюл. !!< 43 (71) Астра Лэкемедель Актиеболаг (SE) (72) Курт-Эрик Хагберг, Карпь-НильсГуннар Иохансон, Сусанна Мариа Илона Ковац и Геран Бертиль Штейнинг (sE) (53) 547.857,7(088.8) (56) Патент США !!< 4 199574, кл. А 61 К 31/52, опублик. 1980.

Вейганд-Хильгетаг. Методы эксперимента в органической химии. — М.:

Химия, 1968, с. 316. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ

ГУАНИНА В ВИДЕ РАЦЕМАТОВ ИЛИ R (+)

ИЗОМЕРОВ (57) Изобретение касается производных гуанина, в частности соединений общей формулы

80 1272991 A 3 (51)4 С 07 D 473/18 A" 64Ê 52

NH-C(O) -С-N=CH и,(Н N-C=N-C N-СН -CHR -CHR -СН ОН

2 2 f 2 где R<=H при R =OH или R =H при

R< =ОН, в виде рацематов или R(+) иэомеров, которые как обладающие антивирусной активностью могут быть использованы в медицине. Для выявления физиологической активности получены новые производные гуанина — соединения I.

Синтез ведут кислым гидролизом соответствующего гуанина, в котором при

М

N имеется другой радикал — R9 — метил-1,3-диоксан, 1, 2, 0-изопропилиден-1,2-диоксибутан, R(+)-1,2,0-иэопропилиден-1,2-диоксибутан; а при х<

С -атоме находится галоид. Выделение ведут в виде рацемата или R(+) изомера. В сравнении с известным9-(2-оксиэтоксиметил)гуанином, антивирусная активность соединений (Е) выше, токсичность их составляет

290 мкг/кг вшивого веса против 45 мг/кг (при нежелательных побочных эффектах) . 4 табл.

1272991

Т а б л и ц а 1

Смертность„Ж спустя время после заражения, дн

Исследуемое соединение

8 10 11 13 14

30

20

10 10

10 20

По примеру 2

40

70

Известное

Изобретение относится к способу получения новых биологически активных соединений — производных гуанина, обладающих антивирусной активностью, которые могут найти примене- 5 ние в медицине.

Цель изобретения — создание способа получения новых производных гуанина, обладающих более высокой антивирусной активностью и низкой 10 токсичностью.

Пример 1. Получение 9-(2,4-диоксибутил)-гуанина.

40 мг 4-(2-амино-6-хлорпурин-9-ил)-метил-1,3-диоксана растворяют в 5 мл 1 м хлористоводородной кислоты и нагревают с обратным холодильником в течение 4 ч. Раствор подщелачивают разбавленной гидроокисью аммония и упаривают досуха при пони- 20 женном давлении. Остаток растворяют в воде и очищают жидкостной хроматографией под давлением с применением смеси метанола с водой (1:3) в качестве элюента. Получают 14 мг белого кристаллического продукта с о т.пл. 226-228 С (разложение).

УФ-спектр (0,01 моль/л хлористоводородной кислоты) A „ „, нм: 227, 254 (Е = 10700), Пример 2. Получение R-(+)—

-9-(3,4-диоксибутил)-гуанина.

100 мг (0,33 моль) R (+)-4 †(2-амино-6-хлорпурин-9-ил)-изопропилиденбутан-1,2-gHoaa растворяют в 11мл

1 М хлористоводородной кислоты и нагревают с обратным холодильником в течение 1 ч. Раствор концентрируют в вакууме и остаток растворя:ют в

5 мл воды и подщелачивают водной 40 гидроокисью аммония. Получаемый в результате упаривания твердый оста— ток перекристаллизовывают из воды.

Получают 40 мг (517) целевого продук— та в виде белых иголок, с т,пл.262264 С °

УФ-спектр (0,01 моль/л хлористоводородной кислоты Я, нм: 277, 253.

Мв = + 30,8 (с = 0,25; вода).

ПМР†спек (0 0, внутренний стандарт трет-бутанол, Гсн, = 1,33 ч/млн, ч/млн: 1, 75-2, 15 (м, 2Н); 3,40-3, 70 (м, ЗН), 4, 15 (АВ„8, 2Н), 7, 77 (с, 1Н) .

Пример 3. Повторяют пример

2, однако в качестве. исходного соединения нспользуют 4-(2-амино-6-хлорпурин-9-ил) -изопропилиденбутан-1,2-диол.. Получают 9-(3,4-диоксибутил)-гуанин, т. пл. 260-261 С (разл.).

Выход 557. теоретического.

УФ-спектр (0,01 моль/л хлористоводородной кислоты) Э,, нм: 277, 253 (Я = 11500) .

Масс-спектр: 11,2 3 (внутр.):

239 (М, О, 13), 222 (О, 19), 221(0, 1 1)

152 (0,43); 151 (О, 56), 44 (1,0) .

Проведены биологические испытания производных гуанина, полученных предлагаемым способом.

0 п ы т 1.Мьлпей весом 15 г заражают внутрибрюшинно 10 единицами пузырькового лишая типа 2„ Мышей подразделяют на дне группы по 10 мышей в каждой. Через 1 ч после заражения мышам одной группы орально дают соединение примера 2 в дозе 15 мг/кг веса тела два раза в день в течение 10 дней.

Зараженных мышей другой группы обрабатывают тем же образом с использованием известного соединения — 9†(2-оксиэтоксиметил)-гуанина в той же дозе.

По окончании опыта определяют смертность. Результаты опытов даны в табл. 1, !

272991

Таблица 3

Тимиди н микм

KTyg p микм

Соединение примера 3

Известное соединение

Таблица 2

-- 25

ОтносительЗначение

К;, микм

Исследуемое соединение

1,8

0,5 ная скорость фосфорилирования, 7 30

2,8

2,3

3,9

4,4

100

11,0

14,0

0,4 (км) 100

Тимидин

Пример

Пример 3

19

75

1ю5

Известное—

9-(2-оксиэтоксиметил)гуанин

173

По данным табл, 1 видно, что новые производные гуанина обладают лучшей антивирусной активностью по сравнению с известным производным гуанина. 5

0 п ы т 2. С целью проявления антивирусной активности при наличии заражений пузырьковым лишаем производные гуанина должны предварительно переводиться в соответствующие lO монофосфаты под действием тимидиновой киназы пузырькового лишая.

Чувствительность производных гуанина к действию тимидиновой кинаэы пузырькового лишая типа I из кле- 15 ток Веро, а также относительная скорость фосфорилирования определяют в соответствии с методом А.Ларссона.

При этом чувствительность тем выше, чем ниже значение К, . 20

Результаты опыта сведены в табл.2.

Данные табл. 2 свидетельствуют о том, что новые производные проявляют лучшую чувствительность к действию тимидиновой киназы (и тем самым лучшую антивирусную активность), чем известное соединение.

Кроме тoro, при использовании соединения примера 3 наблюдается более высокая относительная скорость 55 фосфорилирования, что важно в том случае, если можно ожидать соревнование с естественным тимидином во время переведения в монофосфат в зараженных клетках.

О п ш т 3. Степень. соревнования между тимидином и соединениями с антивирусной активностью определяют в зараженных пузырьковым лишаем типа

I клетках согласно методу Ларссона, при котором определяют концентрацию производного гуанина, обеспечивающую

50Х-ное торможение образования пятна лишая, в зависимости от концентрации добавляемого тимидина (концентрация

КТ„) .

Результаты опыта сведены в табл.3.

100 микм тимидина

Соотношение для

0 микм тимицина предлагаемого соединения 6,1, а для известного соединения — 28.

Данные табл. 3 свидетельствуют о том, что по мере повышения количества добавляемого тимидина антивирусная активность известного соединенИя . снижается больше, чем антивирусная активность предлагаемого соединения.

Результаты опыта 3 полностью подтверждают сделанное в опыте 2 заключение о зависимости степени антивирусной активности от наличия тимидина.

О п ы т 4. С целью определения токсичности известное соединение и новые производные гуанина согласно примерам 1-3 орально дают собакам.

Результаты опыта даны в табл.4.

1272991

Таблица 4

Исследуемое соединение

Доза исследуемого соединения, мг/кг/день

Примеры 1-3

Известное соединение

Не давалось е

Диаррея, потеря веса

Не давалась

140

H ет о трица тел ь ных эффектов

290

Формула изобретения

Способ получения производных гуанина общей формулы

О

HN — N — СН СН вЂ” СНСН ОН

2 М i

R1 R2

Н

Н Х

N R3

Составитель В.Волкова

Техред И.Попович Корректор О.Луговая

Редактор И. Николайчук

Заказ á353/59 Тираж 379 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Сравнение данных табл. 4 свидетельствует о том, что новые соединения не являются токсичными в дозах до 290 мг/кг, тогда как известное соединение уже в дозе 45 мг/кг вызывает нежелательный побочный эффект.

Таким образом, производные гуанина, полученные предлагаемым способом, где R — водород при R< гидроксил

R — водород при R гидроксил в виде рацематов или R (+)иэомеров, отличающийся тем, что соединение общей формулы

Х малотоксичны в сравнении с 9-(2-оксиэтоксиметил)гуанином и обладают более высокой антивирусной активностью. где Х вЂ” галоид, R - метил-1,3-диоксан; 1,2,0-изопропилиден-1,2-диоксибутан;

R (+) — 1,2,0-изопропилиден— 1,2-диоксибутан, подвергают гидролиэу в кислой среде и целевой продукт вы— деляют в виде рацемата или

К(+ иэомера.