Способ выделения возбудителя бруцеллеза вида brucella меliтеnsis из патологического материала

 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для выделения возбудителя бруцеллеза вида MELITENSIS из загрязненных посевов. Целью изобретения является увеличение накопления бактериальной массы за счет повышения селективности. В приготовленный по общепринятой рецептуре печеночный глюкозо-глицериновый агар или эритрит-агар сухой серийного производства вносят один из трех вариантов селективной добавки, ингредиенты селективной добавки вносят при следующем соотношении компонентов, г/л: оксациллина натриевая соль 0,025-0,1

полимиксина М сульфат 25000-100000 ед

невиграмон 0,0125-0,05, или вносят полимиксина М сульфат 25000-100000 ед

метициллина натриевая соль 0,125-0,5

кристаллвиолет 0,0013-0,0017, или вносят полимиксина М сульфат 25000-100000 ед

оксациллина натриевая соль 0,025-0,1

кристаллвиолет (или геницианвиолет) 0,0013-0,0017. На предложенных средах формируются колонии возбудителя бруцеллеза из малых посевных доз. Применение антибиотиков отечественного производства в качестве селективного фактора без изменения технологии выделения бруцелл увеличивает возможности лабораторной службы. Применение селективных сред исключает необходимость засева исследуемого материала на большое количество косяков с последующими пересевами для очистки возбудителя BR.MELITENSIS от обильной посторонней микрофлоры. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)4 С 12 0 1/04, С ° 12 N 1/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Пример 1. Среду готовят следующим образом.

В приготовленный по общепринятой ре-,В цептуре печеночный глюкозо-глицериновый, агар или зритрит-агар сухой серийного производства, проверенные референтными штаммами бруцелл и пригодные по своим качествам, вносят один иэ трех вариантов селективной добавки. ИнгреГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (? 1) 4299046/28-13 (22) 17. 08. 87 (46) 15.11.89. Бюл. Р 42 (71) Среднеазиатский научно-исследовательский противочумный институт (72) Б.И.Бекетов, Н.П.Медведенко, К.У.Утегенов, B.Ф.Калита, У..А.Сигимбеков и К,Н.Бекзатов (53) 576.8 (088.8) (56) Лабораторные исследования в ветеринарии,/Под ред. В.Я.Антонова и II.Í.Áëèíîâà, М.:Колос, 1971, с. 49-61.

Наставление по диагностике бруцеллеза животных. М.: Агропромиэдат, 1985, с 7-13. (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ

БРУЦЕЛЛЕЗА ВИДА.BRUCELLA MELITENSTS

ИЗ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА (57) Изобретение относится к микро биологии и может быть использовано для выделения возбудителя бруцеллеза вида

melitensis из загрязненных посевов.

Целью изобретения является увеличе-,. ние накопления бактериальной массы за счет повышения селективности. В приготовленный .по общепринятой рецептуре печеночный глюкозо-глицериновый

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для выделения возбудителя бруцеллеза вида шеНйепзы из индивидуальных проб молока и внутренних органов абортиро ванных плодов.

Цель .изобретения — увеличение накопления бактериальной массы за счет повышения селективности..SU 1521762 А 1

2 агар или зритрит-агар сухой серийного производства вносят один из трех вариантов селективной добавки, ингре- диенты селективной добавки вносят при следующем соотношении компонентов, г/л: оксациплина натриевая соль

0,025-0, 1 полимиксина И сульфат

25000-100000 ед, невиграмон 0,01250,05, или вносят полимиксина M сульфат 25000-100000 ед, метициллина натриевая соль 0,125-0,5; кристаллвиолет 0,0013-0,0017, или вносят полимиксина М сульфат 25000-100000 ед, оксациллина натрневая соль 0,025-0,1, кристаллвиолет (или геницианвиолет)

0,0013-0,0017. На предложенных средах формируются колонии возбудителя бру- циллеза из малых посевных доз. Приме- у кение антибиотиков отечественного производства .в качестве селективно.го фактора без изменения технологии выделения бруцелл увеличивает возможности лабораторной службы. Примене- ®, ние селективных сред исключает необ- р ходимость засева исследуемого мате» риала на большое количество косяков с последующими пересевами для очистки возбудителя Br. melitensis от обильной посторонней микрофлоры. 1 табл. © (Я

1521762 диенты селективной добавки в растворенном виде в физиологическом растворе или дистиллированной воде вносят при перемешивании в расплавленный и остуженный до 45,-50 С агар при слеО «5 дующем количественном соотношении компонентов, г/л:

Оксициллина натриевая соль 0,05

Полимиксина М сульфат, ед 50000.

Невиграмона 0,025 или

Полимиксина М сульфат, ед 50000

Метициллина натриевая соль 0.25

Кристаллвиолет 0.0013-,5

0,0017 (или в разведении 1:6000001:800000) или

Оксациллина натриевая соль 0,05

Полимиксина М сульфат, ед 50000

Кристаллвиолет или генци- .. анвиолет 0,00130,0017 (или в разведении I:6000001:800000).

Индивидуальные пробы из свежевыделенного молока овец или другого дойного животного берут в объеме

4-5 мл. При невозможности высева не" посредственно после доставки высев молока проводят через 16-18 ч при хранении молока при 4 С. Материал засевают на отдельные чашки Петри или про бирки (косяк) с селективной средой пипеткой в объеме О,1 мл. Органы абор" тированных плодов засевают методом отпечатка среза на отдельные чашки

Петри или пробирки со скошенным селективным агаром. Взвесь органов или содержимое желудка засевают в .объеме

0,1 мл в отдельные чашки Петри или пробирки со скошенным селективным агаром.

Посевы инкубируют при 37 С в течение 7-12 сут с ежедневным контролем роста после двусуточной инкубации.

Возбудитель бруцеллеза на селективных питательных средах обычно вырастает в течение 3-7 сут.

Бруцеллы вырастают на селективной среде в виде колоний с ровными краями, выпуклые, прозрачные с голубоватым оттенком (при добавлении краски) 5> и гладкой поверхностью, гомогеныы, иногда с нежной зернистостью в центре колонии. С возрастом нежные и прозрачные колонии бруцелл постепенно теряют голубизну и мутнеют. Колонии бруцелл по размеру и:темпу роста несколь- ко отстают по сравнению сростом наобщепринятых плотных питательных средах. При хранении культур на селективной среде до 1-1,5 мес признаков диссоциации не отмечается.

Испытано 2488 индивидуальных проб овечьего молокаи выделен 41 штамм

Sr. melitensis. Из них 1552 пробы были доставлены из благополучных по бруцеллезу овцеводческих хозяйств и выделены 25 штаммов бруцелл вида

melitensis На контрольной среде, т,е. общепринятой печеночной глюкозо-глицериновой среде, выделен только один штамм Br.melitensis.

Из 126 исследованных внутренних органов абортированного плода мелкого рогатого скота на селективной среде выделены 76 штаммов Brucella melitensis, на контрольной среде — только

63 штамма. бруцелл. От четырех абортированных плодов крупного рогатого скота выделена одна культура Brucella

ahortus,а от пяти абортированных плодов свиней бруцеллы не выделены.

На предлагаемых селективных питательных средах дополнительно выделены 14 штаммов бруцеллеза (18.4Ж). Сравнительные данные приведены в таблице, Результаты бактериологического исследования молока овец и внутренних органов абортированных плодов мелкого рогатого скота приведены в таблице.

На предлагаемых селективных питательных средах формируются колонии возбудителя бруцеллЕза из малых посевных доз. Применение антибиотиков отечественного производства в качестве селективного фактора без изменения технологии выделения бруцелл в значи- . тельной степени увеличивает возможность лабораторной службы.

Приготовление предлагаемых селективных сред не представляет трудностей и не требует специальной подго-, товки практических работников.

Внесение селективных добавок в значительной степени экономит среды и сокращает время исследования.

Формула изобретения

Способ выделения возбудителя бруцеллеза вида Brucella melitensis иэ патологического материала, включающий посев исследуемого материала на пита20

Исследуемый материал

Выделено культур на средах прото Предлагаемая

1 2 3 Всего

Молоко из благополучных хозяйств

Молоко из неблагополучных хозяйств

Внутренние органы абортплодов: мелкого роготого скота крупный рогатый скот

1552

0 25 24 25, 25

1 16 16 16 16

936

126 62 33 18 41 76

4 О 1 1 1 1

Составитель П.Игнатов

Редактор Н.Киштулинец Техред Л.Олийнык Корректор Т.Малец

Заказ 6892/24 Тираж 501 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

5 1521762 6 тельную среду, содержащую печеночно- виолета при следующем соотношении глицериновый или эритрит-агар и селек- компонентов, г/л: тивную добавку, культивирование с пос- Полимиксина М сульфат, ледующим выделением чистой культуры, ед 25000-100000 отличающийся тем, что, с

Метициллина натриевая целью увеличения накопления бактерисоль О, 125-0,5 алькой массы, в качестве -селективной Кристаллвиолет 0,0013-0,0017 добавки используют смесь полимиксина или смесь оксациллина натриевой соли, М сульфата оксициллина натриевой со- 10 полимиксина М сульфата и/или кристаллУ ли и невиграмона при следующем соот- виолета и генцианвиолета при следующем ношении компонентов, г/л: соотношении компонентов, г/л:

Оксациллина натриевая соль 0,025-0,1 Оксициллина натриевая

Полимиксина М сульфат, 5 соль 0,025-0,1 ед 25000-100000 Полимиксина М сульфат, Невиграмон 0,0125-0,05 ед 2500-100000 нли смесь полимексина М сульфата, ме- Кристаллвиолет или тициллина натриевой соли и кристалл- генцианвиолет 1,0013-0,0017