Способ получения иммуногенных вакцинных штаммов чумного микроба

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Целью изобретения является упрощение и ускорение способа получения иммуногенных вакцинных штаммов чумного микроба. Способ заключается в однократной инкубации клеток вакционного штамма JERSINA PESTIS EV 76 в свежей нормальной сыворотке крови человека. Для этого J.PESTIS засевают в количестве 1.10<SP POS="POST">7</SP>-1.10<SP POS="POST">8</SP> микробных клеток в 1 мл цельной сыворотки крови человека и инкубируют в течение 16-24 ч при 37°С. Затем суспензией бактерий в соответствующих значениях КОЕ/мл вакцинируют животных. Способ позволяет получить иммуногенные чумные штаммы в 10 раз быстрее по сравнению с прототипом. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ÄÄSUÄÄ1520098

А1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К A BTOPCH0MV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4364105/30-13 (22) 18. 01. 88 (46) 07.11.89. Бюл. К 41 (71) Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (72) А.Н.Кравцов, Л.А.Тинкер, В.В.Рыжкова, В.А.Зурабян, В.П.Зюзина и В.И.Тынянова (53) 576.8.093.1(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Р 1249939, кл. С 12 Q 1/00, 1984. (54) CIIOCOS II0JI HHR ИММУЙОГЕННЫК

ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ ЧУМНОГО МИКРОБА (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии. Целью изобретения является упрощение и ускореИзобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к способам получения иммуногенных вакцинных штаммов чумного микроба in

vitro.

Цель изобретения — упрощение и ускорение способа получения иммуногенных вакцинных штаммов чумного микроба.

Пример 1. Суточную агаровую культуру I.pestis EV 76, выращенную при 37 С, засевают в цельную нормальную свежую сыворотку крови человека в количестве 1-10 м.кл./мл,. инкубируют при 37 С в течение 16 ч, после чего разводят физиологическим раствором до соответствующих КОЕ/мл и вакцинируют животных.

Иммуногенность субкультур I.pestis EV 76 определяют на белых мышах (51)4 С 12 Q 1/00, С 12 М 1/00, А 61 К, 39/102

2 ние способа получения иммуногенных . вакцинных штаммов чумного микроба.

Способ заключается в однократной ннкубации клеток вакционного штамма

Iersinia pestis EV 76 в свежей нормальной сыворотке крови человека.

Для этого I.pestis засевают в количестве 1 10 — 1 -10 микробных клеток в 1 мл цельной сыворотки крови человека и инкубируют в течение 1624 ч при 37. С. Затем суспензией бактерий в соответствующих значениях

КОЕ/мл вакцинируют животных. Предлагаемый способ позволяет получить иммуногенные чумные штаммы в 10 раз быстрее по сравнению с известным. табл. весом 18-20 г по критерию ImDso Я количество микробных клеток, способных предохранить через 21 сут 50% взятых в опыт животных от 200 вирулентного штамма.

Иммуногенность субкультур Т.рes- 4Р

tis ЕЧ 76, инкубированных в сыворотке крови человека, по сравнению с исходной культурой повысилась в

25, 1 раз.

Пример 2. Аналогично примеру 1 вносят в сыворотку культуру в количестве 1 ° 10 м.кл./мп, время инкубации 18 ч, Иммуногенность инку- ) бированной в сыворотке субкультуры по сравнению с исходной повышается в 29, 1 раза.

Пример 3. Аналогично примеру

2 инкубацию субкультуры в сыворотке проводят 24 ч. Иммуногенность инкуби1520098 лагаемый способ не имеет ограничений в количестве исследуемых культур, прост в исполнении и легко воспроизводим.

Формула изобретения

Субкультуры

I.pestis EV 76

Посевная доза в сыворотку, м.кл/мп

Время инкубации в сыворотке, ч

5о м.кл.

ImD min

5о м. кл. шО о x ° м. кл.

104000

40740 19200

Исходная

Инкубированная в нормальной сыворотке крови человека

По примеру 1

1 10

1 ° 10

1 108

16

18

1622

1380

724

627

616

3526

3090

Составитель А.Горбатов

Редактор И.Дербак Техред M.Õoäàín÷ Корректор Э.Лончакова

Заказ 6723/29 Тираж 501 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 101 рованной в сыворотке субкультуры по сравнению с исходной повысилась в

29,5 раз.

Иммуногенность субкультур I. pest is EV 76, исходной и однократно ин5 кубированных в нормальной свежей сыворотке крови человека приведена в таблице.

Таким образом, использование пред-1 лагаемого способа позволяет просто и быстро получать иммуногенные вакцинные штаммы I.pestis EV 76, причем

25-29-кратное увеличение иммуногенности вакцины достигается эа 16-24 ч, 1 в то время как известный способ пассирования культур в монослое макрофагов дает 25-кратное увеличение иммуногенности через 200-240 ч. ПредСпособ получения иммуногенных вфкцинных штаммов чумного микроба путем посева микроорганизмов на культуральную среду с последующей инкубацней, отличающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, в качестве культуральной среды используют нормальную сыворотку крови человека посев осуществля7 Р ют в дозе 10 -10 м.клеток/мп, а инкубацию проводят в течение 16-24 ч.