Способ диагностики латентной формы хронического вирусного гепатита в у носителей нв @ -антигена

 

Изобретение относится к медицине, а именно к гепатологии, и касается инфекционных заболеваний. Целью изобретения является повышение точности диагностики. Для этого у больного берут 4 мл крови, получают осадок эритроцитов, из которых готовят 20%-ный лизат. Затем в эритроцитах крови определяют активность α - глицерофосфатдегидрогеназы и количество гемоглобина. При значении активности 6963,3 мкМоль/г гемоглобина и более, диагностируют латентную форму хронического вирусного гепатита В. Изобретение позволяет повысить точность диагностики с 70-74 до 96 %. 1 табл.

CQO3 СОВЕТСКИХ.

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ .РЕСПУБЛИК (5!)4 С 01. N 33/68

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ.

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4078361/28-14 (22) 13. 06. 86 (46) 15. 08. 89. Бюл. N- 30 (71) Ростовский .медицинский. институт (72) Л. Д. Левина и И. А. Безуглова (53) 616. 07(088.8) (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЛАТЕНТНОЙ

ФОРМЫ ХРОНИЧЕСКОГО ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА В У НОСИТЕЛЕИ НВ -АНТИГЕНА (57) Изобретение относится к медици-.. не, а именно к гепатологии, и касается инфекционных .заболеваний. Целью

Изобретение относится к медицине, а именно к гепатологии и инфекционных болезням.

Способ осуществляют следующим образом.

У пациента, поступающего в стационар для уточнения диагноза в связи с обнаружением в крови НВ -антигена, берут 4 мл крови в пробирку (центрифужную), содержащую 0,04 мп раствора гепарина (1 мл гепарина — 5000 ЕД разводят в 9 мл физиологического раствора) .

-Для отмывания эритроцитов в пробирку добавляют 4 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия, осторожно перемешивают и центрифугируют 15 мин при

1500 об/мин. Удаляют надосадочную жидкость и 2-3 мм верхнего слоя осадка эритроцитов. После этого эритроциты еще дважды отмывают центрифугированием в 0,9%-ном растворе хлористого натрия. Уплотнение отмытого осадка производят центрифугированием 30 мин при

„„SU„„1500940 А 1

2 изобретения является повышение точности диагностики. Для этого у больного берут 4 мл крови, получают осадок эритроцитов, из которых готовят 20%ный лизат. Затем в эритроцитах крови определяют активность d-глицерофосфатдегидрогеназы и количество гемоглобина. При значении активности . 6963,3 мкмоль/г гемоглобина и более диагностируют латентную форму хронического вирусного гепатита В. Изобретение позволяет повысить точность диагностики с 70-74- до 96%. 1, табл, 3000 об/мин. Ив осадка готовят 207 га- Q) молизат, для чего О, 1 мп плотного осадка эритроцитов растворяют в 2 мп дистиллированной воды. В этом гемоли-... зате и определяют в ходе дальнейших реакций активность А-ГФДГ, а также 0 концентрацию гемоглобина. (Последний Ql показатель необходим,цля расчета по > формуле активности d-глицерофосфатде- (, гидрогеназы) . 1 ф ь ь

Перед определением активности фермента готовят субстратную смесь сле,дующего состава: 3,25 мг глицерофосфа- та натрия, О, 75 мг сернокислой магнезии, 4 мг АТФ растворяют в 9 .мл 1/15 M раствора фосфатного буфера рН 7,4. К

0,2 мп гемолизата добавляют 2,25 мл субстратной смеси и 1 мл 0,1% раствора нитросинего тетразолия. Смесь инкубируют в термостате при 37 С 60 мин.

После этого пробирки помещают в холо1 дипьник и завершают определение фермента на следующий день.

Ух 5 нь мкМоль

3 15009

После этого, ". е. в первый же день исследования, определяют концентрацию гемоглобина (Нв) в эритроцитах (в 207. гемолизате) по методу, описанному

И. С. Лугановой и М. Н. Блиновым.

На второй день исследования, вынутые из холодильника, пробирки с раствором центрифугируют 15 мин. при

1500 об/мин, удаляют надосадочную жид-10 кость, а к осадку добавляют 5 мп аце.тона для экстрагирования образовавшегося формазана, периодически помешивая раствор тонкой стеклянной палочкой. Через 60 мин. раствор центрифу-. 15 гируют.l,5 мин. при 1500 об/мин. Над осадочную жидкость переносят в 10 им кювету спектрофотометра СФ 26, Величину оптической плотности надосадочной жидкости, содержащей. формазан, иэ-20 меряют при длине волны 570 нм против аналогичной кюветы с раствором ацетона. По калибровочной кривой переводят полученную величину оптической плотности в количество формаэана в микро25 граммах.

Расчет активности o(-глицерофосфатдегидрогеназы в эритроцитах производят по формуле: где у — количество формазана в микрограммах; 35

НЬ вЂ” количество гемоглобина в эритроцитах в граммах, При значении активности 6963,3 мкМоль/г «»

1НЬ диагнос тируют латентную форму хрони- ..

: ческого вирусного гепатита В, 40

Значение определения активности

o(-глицерофосфатдегидрогенаэы в эритроцитах для оценки возможного латентного поражения печени у носителей

- НВ -антигена приведено в таблице. 45

Из таблицы следует, что верхний предел активности о(-глицерофосфатдегидрогенаэы у здоровых лиц составляет

6963,2 мкмоль/г НЬ. 50

Конкретные примеры выполнения способа.

Пример 1. Пациент А. С., 29 лет. Носительство НВ -антигена быS ло выявлено 6 лет назад при плановом 55 обследовании как донора на областной станции переливания крови. Постоянно находится на диспансерном наблюдении„ продолжает оставаться носителем НВ .—

40 4 антигена. Субъективных и клинических признаков гепатита нет. Биохимические показатели крови (содержание общего билирубина, активность АлАТ, тимоловая проба) нормальные. Активность »(,— глицерофосфатдегидрогеназы нормальная — 6589,1 мкМоль/г Ilb (верхняя граница нормы — 6963,2 мкМоль/г НЬ).

При гистологическом исследовании пунк-, тата печени признаков воспалительных изменений в ткани не обнаружено.

Пример 2. Пациент Н. С., 43 лет. Впервые носительство НВэ-антигена выявлено 4 года назад. При стационарном и предь»дущих диспансерных обследованиях клинических проявлений гепатита не обнаружено. Жалоб не предъявляет. Биохимические показатели крови без отклонений от нормы.

Однако исследование 0-глицерофосфатдегидрогеназы в эритроцитах крови показало 6964,4 мк/Моль/r Hb, что превьш»ает верхнюю . границу нормы (6963,2 мкМоль/г НЬ) .

Поставлен диагноз: латентный хронический персистирующий гепатит В.

Диагноз подтвержден пункционной биопсией печени.

Пример 3. Пациентка И. E., 44 лет поступила с диагнозом "хроническое носительство НВ -антигенап для уточнения диагноза и определения состояния печени.

НВ -антиген бып впервые обнаружен при обследовании в качестве безвозмездного донора по областной станции переливания крови. После этого анти. — . ген в крови обнаруживали повторно еще дважды. При поступлении в стационар жалоб не предъявляет, считает себя здоровой. Заболевание вирусным гепатитом в прошлом отрицает. Печень не увеличена. Билирубин крови общий—

7 MKMQJIb/JI, прямои — 0,2 MKMoJIb/JI, активность АпАТ также нормальная—

0,3 мкмоль/л. Активность Ы- ГФДГ эритроцитов резко повышена

11693,5 мкмоль/г Hb»

При пункционной биопсии печени был выявлен хронический персистирующий гепатит.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет с высокой степенью точности, проверенной морфологическими исследованиями, выявлять латентный хро-. нический гепатит В.

Показанием. для применения данного.. способа в клинической практике являСтатистический Здоровые люди

Носители НВз-антигена показатель отсутствие морфологических изменений при пункционной биопсии латентный хронический персистирующий гепатит, подтв ержденный пункционной биопсией

6440, 9+174,2

6057,5-6824,3

8463,4+351,5

7718,2-9208,6

6846,5+ 116,7

6729,8-6963,2

Среднее 1m

Доверительный интервал

Число наблюдений

До стов ерность P

35

Р, >0,05

< 0,05

2-з (0,05

Составитель С. Федоров

Редактор T. Парфенова Техред JI Олийнык Корректор С qepIIH

Заказ 4859/39 Тираж 789 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãoðoä, ул. Гагарина, 101

5 1500940 6 ется обнаружение в крови НВ -антигена биохимических лабораториях практичесу лиц без явных клинических признаков ки лечебных учреждений. гепатита. Точность способа — 967., когда как

По сравнению с прототипом, предпа- точность диагностики в прототипе со5 гаемый способ имеет следующие преиму- ставляет 70-74%. ществ а:

1) при высокой точности, подтверж- Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я денной морфологическими исследованиями, лишен травматичности; 10 Способ диагностики латентной формы

2) отсутствуют какие бы то ни было хронического вирусного гепатита В у осложнения, а следовательно, и проти- носителей Н — антигена путем биохимивопоказания; ческого анализа крови, о т л и ч а—

3) не требуется специальной подго- ю шийся тем, что, с целью повытовки больного; 15 шения точности способа, в эритроцитах

4) методика исследования техничес- крови определяют активность î -глицеки проста, легко воспроизводима, не рофосфатдегидрогеназы и при ее значетребует сложного лабораторного обору- нии 6963,3 мкмоль/г гемоглобина и бодования и дефицитных реактивов, что лее, диагностируют латентную форму делает ее доступной для выполнения в 20 хронического вирусного гепатита В.