Штамм культивируемых клеток человека,используемый для выявления антител к вирусу кори

 

Изобретение относится к области медицины и касается способа усовершенствования диагностики кори и проведения серологических исследований. Целью изобретения является штамм культивируемых клеток человека, непользование которого в качестве субстрата способствует ускорению и стандартизации метода иммунофлюоресценции для выявления антител к вирусу кори. Штамм ВСКК(П) 79 Д представляет собой клетки НЕр-2, хронически инт фицированные вирусом кори, штамм Л- 16. Использование данного .субстрата позволяет сократить время приготовления вирусосодержащего препарата с 5-7 до 2-3 дней. Предлагаемый субстрат может быть использован для выявления противокоревых антител в сьшоротках больных и вакцинированных. 2 табл. (Л

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СООИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

«511 4 С 12 N 5/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ, К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4211989/28-13 (22) 16.03.87 (46) 30. 10.88. Бюл. Ф 40 (71) Московский научно-исследовательский институт вирусных препаратов (72) Н.Н.Богомолова, И.Б.Коптяева, С.С.Унанов и Н.В.Юминова (53) 578.085.23 (088.8) (56) Иммунологическая диагностика вирусных инфекций/Под ред. Т.В,Перадзе, П.Халанен. М.: Медицина, 1985, с. 41, 67-68, 11, 261. (54) ШТАММ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК

ЧЕЛОВЕКА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ

АНТИТЕЛ К ВИРУСУ КОРИ (57) Изобретение относится к области медицины и касается способа усовер„„Я0„„1433978 A1 шенствоваьия диагностики кори и проведения серологических исследований.

Целью изобретения является штамм культивируемых клеток человека, использование которого в качестве субстрата способствует ускорению и стандартизации метода иммунофлюоресценции для выявления антител к вирусу кори. Штамм ВСКК(П) 79 Д представляет собой клетки НЕр-2, хронически инфицированные вирусом кори, штамм Л16. Использование данного субстрата позволяет сократить время приготовления вирусосодержащего препарата с

5-7 до 2-3 дней. Предлагаемый субстрат может быть использован для выяв- Я ления противокоревых антител в сыворотках больных и вакцинированных.

2 табл.

С:

1433

978

1 2 !

Изобретение относится к медицине, 1 в частности к вирусологии, и касается субстрата для. диагностики кори и проведения серологических исследований.

Цель изобретения — создание штамма культивируемых клеток человека, хронически инфицированных вирусом кори.

Штамм используется в качестве субстрата при использовании метода флю- fQ оресцирующих антител (МФА) для выявления антител к вирусу кори.

Штамм депонирован в специализированной коллекции перевиваемых клеток при Институте цитологии АН СССР под номером ВСКК(П) 79Д.

Штамм ВСКК(П) 79Д получен путем заражения клеток НЕр-2 вирусом кори, штамм Ленинград-16 — при множественности инфекции 0,001.ТЦД /клетка.

Единичные клетки, выкившие;.после первичного заражения дали начало хронически инфицированной культуре. Использование клеток ВСКК(П) 79Д

Культуральные свойства, 25 позволяет стандартизировать и ускаТип роста смешанный, перевивка рить получение результатов по опре1-2 раза в неделю в среде 199 с 107. делению антител к вирусу кори в сысыворотки крупного рогатого скота воротках больных и вакцинированных, при температуре 36 С,, монослой сни, мают 0,27.-ным раствором версена. @ о р м у л а и з о б р е т е н и я

Вирусологическая характеристика.

В цитоплазме 90-95% клеток хронически инфицированной культуры МФА определяется антиген вируса кори в, диде мелких и крупных гранул. Хранят в замороженном состоянии в присутст- 35 вии среды 199 с 107 сыворотки круп-, ного рогатого скота и 10% глицерина.

Пример. Использование штамма ВСКК(П) 79Д.

Клетки ВСКК(П) 79Д культивируют в 40 среде 199 с добавлением 10% сыворотОпыт Количество клеток, содержащих ки крупного рогатого скота в 1-литроантиген вируса кори, 7 вом матрасе. Клетки пересевают каждые

4-6 дней в соотношении 1:3. Культура постоянно имеет 90-95% клеток, содер- 45 жащих вирусоспецифический антиген, и клетки в любое время после пересеВСКК(П) 79Д

1 ва могут быть использованы для приго товления препаратов для МФА.. С этой

1 95 целью клетки с поверхности матраса 50 снимают механически и суспендируют 2 98 в среде 199 таким образом, чтобы концентрация клеточной суспензии

6 3 9Г составляла 1, 5-2,0 10 клеток/мл.

Из полученной суспензии готовят маз- 55

32 9б ки, нанося на предметное стекло по

3,0-4,0 10 клеток. Мазки фиксируют

4 в холодном ацетоне в течение 15 мин.

Препараты хранят до использования при минус 20 С.

Культура клеток ВСКК(П) 79Д на всех пассажных уровнях характеризуется высоким процентом клеток, содержащих вирусоспецифический антиген (табл. 1) °

МФА с применением в качестве антигенсодержащего субстрата клеток

ВСКК(П) 79Д пригоден для определения активности. антител к вирусу кори в сыворотках больных и вакцинированных (табл. 2).

С помощью этого метода обследовано 44 больных и вакцинированных. Показана более высокая чувствительность МФА с использованием предлагаемого. субстрата по сравнению в РТГА.

Штамм культивируемых клеток человека ВСКК(П) Р 79Д, используемый для выявления антител к вирусу кори.

Та блица

Количество клеток, содержащих антиген вируса кори в первично и хронически инфицированных клетках

Первично ин- Хронически инфицированные фицированные

30

1433978

Таблица 2

Результаты исследования сывороток переболевших корью и привитых коревой вакциной методом флюоресцирующих антител при использовании в качестве антигенахронически зараженных клеток (П) 79 Д и в РТГА

Средний геометрический титр (в 1о8 ) Титр антител (в реакциях) Число Возраст обсле1 дованных

МФА РТГА

МФА РТГА

4-6 лет 36,8 24,0 5,20

3-7 лет 71,72 35,02 6,16

4,58

5,13

10

Старше

20 лет

5,26

38,4

4,38

20,8

Всего:

48,97 26,60 5,61 4,73

Составитель И.Тареева

Редактор М.Петрова Техред М.Ходанич

Корректор С.Черни

Заказ 5517/28 Тираж 520 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4