Штамм культивируемых клеток человека для выявления антител к вирусу кори

 

Изобретение относится к области медицины и касается способа усовершенствования диагностики кори и проведения серологических исследований, птамма перевиваемых клеток человека , используемого для выявления антител к вирусу кори в метода им гунофлуоресцении (МФА). Штамм клеток ВСКК (П)81Д представляет собой хронически инфицированньй вирусом кори штамм Л-16. Использование данного штамма в качестве субстрата в МФА позволяет сократить время приготов-у ления вирусеодержащего препарата. Предлагаемый субстрат может быть использован для выявления противокоревых антител в сыворотках больных и вакцинированных. 3 табл. С S (Л

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) А1 (511 4 С 12 N 5/00

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ /,., Н А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4210487/31-13 (22) 16. 03.87 (46) 07. 10.88. Бюл. К 37 (71) Московский научно-исследовательский институт. вирусных препаратов (72) Н.Н. Богомолова, И.Б, Коптяева, С.С. Унанов и Н, В .Юминова (53) 578. 085. 23 (088.8) (56) Иммунологическая диагностика вирусных инфекций./ Под ред. Т.В.Перадзе и П .Халонен. М,: Медицина, 1985ь с. 67-68, 91, 261. (54) ШТАММ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА ДДЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ КОРИ (57) Изобретение относится к области медицины и касается способа усовершенствования диагностики кори и проведения серологических исследований, штамма перевиваемых . клеток человека, используемого для выявления антител к вирусу кори в методе иммунофлуоресцении (МФА). Штамм клеток

ВСКК (П)8 1Д представляет собой хронически инфицированный вирусом кори штамм Л-16. Использование данного штамма в качестве субстрата в МФА позволяет сократить время приготов-. ления вируссодержащего препарата.

Предлагаемый субстрат. может быть использован для выявления противокоревых антител в сыворотках больных и вакцинированных ° 3 табл.

1428765

Изобретение относится к медицине, в частности к вирусологии, и касается субстрата для диагностики кори и проведения серологических исследова5 ний.

Цель изобретения —. штамм перевиваемых клеток BCKJ<(JJ) 8 tjl,, исполь-, зуемый для выявления антител к вирусу кори н методе флюоресцирующих антител (МФА) .

Штамм депонирован в специализированной коллекции перевиваемых клеток при Институте цитологии AH СССР под номером ВСКК(П)81Д. 15

Штамм ВСКК(П) 81Д получен путем одкратного заражения клеток Л-41 вирусом, продуцируемым культурой хронических инфицированных клеток ВСКК(П)

8 1Д. 20

Культуральные свойства. Тип роста смешенный, перевивка 1-2 раза в неделю в среде 199 с 10 сыворотки крупного рогатого скота при температуре 36 С, монослой снимают 0,2 .-ным 25 раствором версена.

Вирусологическая характеристика.

В цитоплазме 90-95% клеток хронически инфицированной культуры ВСКК(П)8 1Д

МФА определяется антиген вируса кори 30 в виде мелких и крупных гранул. Хранят в замороженном состоянии в присутствии среды 199 с 10 сыворотки крупного рогатого скота и 10 глицерина.

Пример. Клетки ВСКК(П)81Д культивируют в среде 199 с добавлением 10 сыворотки крупного рогатого скота в 1-литровых матрасах. Клетки пересевают каждые 4-6 дней в соотношении. 1:3, Начиная с 2-3-го пассажа зараженной культуры количество антигенсодержащих клеток стабилизи— руется на уровне 90-95, и клетки используют для приготовления препа- 45 ратов для МФА, С этой целью клетки с поверхности матраса снимают механически и суспендируют в среде 199 таким образом, чтобы концентрация клеточной суспенэии составляла (1,52,0)х10 клеток/мл. Иэ полученной суспензии готовят мазки нанося на предметное стекло по (3,0-4,0)x1Q

Формула изобретения

Штамм культивируемых клеток человека ВСКК(П)8 1Д для выявления антител к вирусу кори °

Таблица

Опыт

Количество клеток, содержащих антиген вируса кори, .

Первично инфици- Хронически инрованные фицированные

ВСКК(П)81Д

45

30

36

29 клеток, Мазки фиксируют в холодном ацетоне в течение 15 мин. Препараты

d хранят до использования при -20 С н течение года, Культура ВСКК(П)81Д на всех пассажных уровнях характеризуется высоким процентом клеток, содержащих вирусспецифический антиген (табл. 1) .

МФА с применением в качестве антигенсодержащего субстрата клеток ВСКК (П)81Д пригоден для определения активности антител к вирусу кори в сыворотках больных и вакцинированных (табл. 2 и 3) .

C помощью этого метода обследовано 25 больных и 30 вакцинированных.

Выявлена специфичность МФА с исполь.зованием клеток ВСКК(П)8 1Д для обнаружения антител к вирусу кори. Показана более высокая чувствительность

МФА с использованием предлагаемого субстрата по сравнению с реакцией торможения гемагглютинации.

Использование клеток ВСКК(П)8 1Д позволяет стандартизировать и ускорить получение результатов по определению антител к вирусу кори в сыворотках больных и вакцинированных.

1428765

Табли цa2

Средний геометрический титр

Титр антител в реакциях

Число емя вакцини взятия

РТГА

МФА рованных ови

РТГА

МФА

4,68

1:60,8

4,43

5,04

1:33

1: 17,6

4,14

4,85

1: 28,8

1: 16

1:32

4,95

1: 16

1: 30,86

Таблица 3 ний геометрический титр

Титр интител в реакциях

Вр емя взятия

Число обсл еРТГА

МФА дованкрови после

РТГА ных начала заболевания

5,85

4,28

Число . обследованных с корь—

4 чел. 1 мес 0

Составитель И.Тареева

Редактор В.Петраш Техред М.Ходанич Корректор М.Васильева

Заказ 5098/28 Тираж 520 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 неподтвержденным

1диагнозом на осле рививи, r, 1 мес 1: 153,6

1 г 1:96

2 r 1:78,22

1: 25,6

1: 21,5

1:57,6 7,26

1:19 43 6 58

1: 25,78 4,69