Способ качественного обнаружения трипсина

 

Изобретение относится к области производства эндокринногферментных препаратов и может быть использовано при качественном обнаружении трипси-;:. на. Цель изобретения - /;ускорение процесса. Обнаружение трипсина проводят путем нагревания раствора испытуемого образца в присутствии 50%-ного раствора гидроксида калия, а затем в реакционную массу добавляют растворы парафенилендиамина и железоаммониевых квасцов. 7 ИЛ.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

Ai (19) (11) (5)) 4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Ю

° Ю

° Ю с

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 4033367/28-13 (22) 03.03.86 (46) 15,07.88. Бюл. М 26 (71) Азербайджанский государственный медицинский институт им. Н, Нариманова (72) А. Ф. Алекперов (53) 577.15(088.8) (56) Торчинский Ю. Н.,Сера в белках.

М., 1977, с. 82.

Государственная Фармакопея СССР, 10е изд, М., 1968, с. 714. (54) С110СОБ КАЧЕСТВЕННОГО ОБНАРУЖЕНИЯ

ТРИПСИНА (57) Изобретение относится к области производства зндокринно-ферментных препаратов и может быть использовано при качественном обнаружении трипси".:.

l на. Цель изобретения -,::ускорение процесса. Обнаружение трипсина прово- дят путем нагревания раствора испытуемого образца в присутствии 50Х-ного раствора гидроксида калия, а затем в реакционную массу добавляют растворы парафенилендиамина и железоаммониевых квасцов. 7 ил, 1409932

Изобретение относится к производству эндокрионно-ферментных препаратов и может быть использовано при качественном обнаружении трипсина.

Цель. изобретения — ускорение процесса.

На фиг. 1-7 приведены зависимости, поясняющие предлагаемый способ.

Способ заключается в том, что раствор трипсина нагревают в, присуто ствии гидроксида калия при 100 С в течение 1 мин. После охлаждения и добавления растворов парафенилендиамина и желеэоаммониевых квасцов воз- 15 никает красно-фиолетовое окрашнвание.

Возникновение фиолетового окрашивания связано с образованием основного тиаэинового красителя - окисленной формы 3,7-диаминопроизводного 20 (фиолетового Лаута). Синтез красителя, индуцируемый окислительным каталитическим действием ионов трехва "::. лентного железа, осуществляется с участием парафенилендиамина и серо- 25 водорода, отщепляемого из трипсина в процессе его щелочного гидролиза.

Структура хромофора, которая может быть представлена в виде двух мезомерно-стабилизированных предельных формул — орто- и паразиноидной— приведена в суммарном уравнении синтеза красителя:

2; * HC!+Ha8+6F - SF +НН +БН +

Я И

Парахииоидная

Ортохиноидная

Фиолетовое Лаута

Образовавшийся краситель имеет максимум поглощения при 600 нм (фиг. 1, кривая а). Из фиг. 2 и 3 следует, что нагревание раствора, содержащего 0,05 мг/мл трипсина, при

100 С (фиг. 2) в течение 1 мин .(фиг. 3) в присутствии 1 мл 50Х-ного раствора гидроксида калия способствует максимальному разрыву дисульфидных связей,в его молекуле с образованием сульфида, который при взаимодей55 ствии с парафенилендиамином в при» сутствии железоаммониевых квасцов приводит к синтезу фиолетового Лаута (фиг. !,-кривая б).

Иэ фнг. 4 и 5 видно, что нагревание раствора трипсина в присутствии

1 мл 50 -ного раствора гндроксида калия способствует достижению цели. При добавлении к гидролизуемым растворам трипсина 1 мл раствора парафенилендиамина (этот раствор приготовлен растворением 0,5 r порошка парафенилендиамина в смеси 50 мл воды и

100 мл концентрированной серной кислоты) и 1 мл 5Х-ного раствора железоаммониевых квасцов получаются стабильно окрашенные растворы красно-фиолетового цвета (фиг. 6 и 7).

Способ обнаружения трипсина заключается в том что в колбу на 25 ип помещают раствор 0,05 r трипсина-, в

1 мл воды, туда же добавляют 1 мл

50Х-ного раствора гидроксида калия

0 и нагревают в течение 1 мин при 100 С.

В охлажденную смесь добавляют 1 мл раствора 0,5 г парафенилендиамина в смеси 50 мп воды и 100 мл концентрированной серной кислоты, 1 мп 5Х-ного раствора железоаммониевых квасцов.

Затем раствор доводят водой до метки, возникает красно-фиолетовая окраска, Предел обнаружения: 0,01 мг трипсина.

П р и м.е р 1. В колбу на 25 мл помещают 0,05 г трипсина в 1 мп воды, далее нагревают щелочью, добавляют

0,5 мп раствора парафенилендиамина, 1 мл 5Х-ного раствора железоаммониевых квасцов. Объем раствора доводят водой до метки; возникает слабая красно-фиолетовая окраска. Это объясняется малым количеством добавляемого раствора парафенилендиамина.

Пример ы 2 и 3. В колбу на 25 мл помещают раствор 0,05 г трипсина в I мл воды, далее раствор нагревают щелочью, добавляют 1 мл или 1,5 мл раствора парафенилендиамина, 1 мп 5Х-ного раствора железоаммониевых квасцов. Объем раствора доводят водой до метки; возникает краснофиолетовая окраска. Оптические ппотности растворов с добавками 1 мл или

1,5 мл раствора парафенилендиамина иМеют одинаковое значение, Формула изобретения

Способ качественного обнаружения трипсина, предусматривающий приготовление исследуемой пробы фермента, термическую обработку и оценку результатов взаимодействия„ .о т л ич а ю шийся тем, что, с целью

1409932

У,2

7И g им фиг 1

И 40 бО 80 1Ж Я7

Темтратура, Г

Фиг 2

1 ускорения процесса, в исследуемую пробу вводят 50Х-ный раствор гидроксида калия, термическую обработку ведут на водяной бане при 100 С в тече5 ние 1. мин, полученную смесь охлаждают, добавляют растворы парафеннлен..диамина и келезоаммониевык квасцов, а оценку результатов ведут по изменению окраски до появления красно-фном летового окрашивания, 1, 409932 10

ФР

% JYdAf,1 419932

1ЛЕ мл

075

05

Я7 а мм

0,5 0,75 70

Рост8ор гтрофенилендиомииа, мп

Фиаб

1409932

Рй ГР мл %ратРор шемиц(д

Составитель Л. Борисова

Редактор И. Касарда Техред M.Дидык Корректор А, Тяско

Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Заказ 3474/40

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4