Способ изоэлектрического фокусирования амфолитов
Изобретение относится к способу изоэлектрического фокусирования амфолитов и может быть использовано в хрома ографической технике для разделения белковых смесей. Изобретение позволяет увеличить разделяющ по способность с одновременным обессоливанием (разделение амфолитов на фракции, отличающиеся по рН на 1-2). Эффект достигается использованием в качестве твердой фазы катионитов в водородной форме и анионитов в гидроксильной форме и десорбцией амфолитов с катионитов раствором щелочи и с анионитов раствором кислоты. 1 ил.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН
„„ЯО„„ З88792
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 4004396/23-05 (22) 19.11.85 (46) 15.04.88. Бюл. Р 14 (71) Институт химии АН ЭССР (72) А.П.Мурель, С.В.Вильде и М.С.Панк (53) 661.183.123(088.8) (56) Рили В., Уомт Г. Ионообменная хроматография в аналитической химии.
М.: Мир, 1973, с. 220-223.
Ь.А.Е.Sluterman, О.Elgersma, Chromatofocusing: isoelectrit focusing
on ionexchaugl columns. I. Chromatogr. 1978, v, 150, р. 17-30. (54) СПОСОБ ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКОГО ФОКУСИРОВАНИЯ АМФОЛИТОВ (51)4 G 01 N 30/02, С 08 J 5/20 (57) Изобретение относится к способу изозлектрического фокусирования амфолитов и может быть использовано в хрома гографической технике для разделения белковых смесей. Изобретение позволяет увеличить разделяющую способность с одновременным обессоливанием (разделение амфолитов на фрак ции, отличающиеся по рН на 1-2).
Эффект достигается использованием в качестве твердой фазы катионитов в водородной форме и анионитов в гидроксильной форме и десорбцией амфолитов с катионитов раствором щелочи и с анионитов раствором кислоты.
1 ил.
1388792
Изобретение относится к биохимии, а именно к способам разделения белковых смесей, и может найти применение в производстве узких фракций ам5 фолитов носителей, аминокислот и для разделения петидов и белков по их ,изоэлектрическим точкам.
Целью изобретения является увеличение разделяющей способности и упро- Ið щение технологии разделения.
На чертеже изображены диаграммы оптического поглощения и рН фракций.
Пример 1. В колонку объемом
l0 мл с катионообменной смолой Агаро- 15 зой 4В, содержащей 10 мкмоль/мл $0 — групп в протонированной форме, вносят 50 мл раствора, содержащего 0,1 амфолитов-носителей (для изоэлектрического фокусирования в диапазоне 20 рН 4-7), представляющих собой смесь полиаминополикарбоновых кислот с изоэлектрическими точками, лежащими в диапазоне рН 3,5-10,0, 0,5 мг яично го белка и затем вытесняют фракции 25
6 мМ раствором NH Пример 2. В 17-миллиметровую колонку с катионообменной смолой SPСефадекс С-25 в протонированной форме, емкость по Na ионам 2,5 ммоль/г 30 сухой смолы (полисахарид с сульфопропильными фрагментами), вносят 5 мл раствора, содержащего 5 . амфолитовносителей диапазона рН 4-9 и I NaC1. Вытесняют 10 мМ раствором КОН и в диапазоне рН 4-9 собирают 10 фракций по 7 мл каждая. Фракции свободны от солей, имеют электропроводность ниже 1000 Ом и при изоэлектрическом фокусировании создают градиенты рН в диа-g0 пазоне 1-2 единиц рН. Пример 3. В 9-миллиметровую колонку с анионообменной смолой Сепарон FIFNAQ в ОН -форме, емкость по С1 ионам 300 мкмоль/мл (сферический по4 лигликольмеТакрилатный гель с четвертичными аммониевыми группами) вносят 5 мл раствора, содержащего 0,5 ммоль лизина, серина и глутаминовой кислоты. Вытеснение проводят 100 мМ НС1, собирая фракции по 1 мл. Лизин присутствует во фракциях 1-4, серин во фракциях 4-9 и глутаминовая кислота во фракциях 9-13. Пример 4. На колонку, содержащую 9 мл анионообменной смолы Сепарон НЕМАЯ, находящейся в ОН -форме, наносят 5 мл раствора, содержащего по 0,5 ммоль глутаминовой кислоты, серина и гидрохлорида лизина. Проводят втеснение 0,1 М раствором НС1, при этом лизин находится в эффлюенте с 6,0 до 12,7 мл, серии с 10,6 до 24,8 мл, глутаминовая кислота с 24,1 до 29,8 мл. Пример 5 (сравнительный). Опыт осуществляют аналогично описанному в примере 4, но нанесенную пробу далее элюируют раствором глутаминовой кислоты и лизина (по 0,75 мМ каждый). Лизин находится с 5 по 60 мл эффлюента, серии с 15 по 28 мп и глутаминовая кислота с 26 по 60 мл. Из результатов видно, что по известному способу лишь первая часть лизина может быть получена в чистом виде, все остальные компоненты постоянно присутствуют в смеси. П р.и м е р 6 (сравнительный). Опыт осуществляют аналогично описанному в примере 4, но в качестве сорбента используют анионит в СН СОО— форме. Зффлюент содержит кроме смеси амфолитов (лизина, глутаминовой кислоты и серина) и ионы элюента. Формула изобретения Способ изоэлектрического фокусирования амфолитов путем сорбции на ионообменных смолах в колонке с последующей десорбцией и отбором фракций амфолитов, о т л и ч а ю щ и й— с я тем, что, с целью увеличения, разделяющей способности и одновременного обессоливания, в качестве ионообменных смол используют катиониты в водородной форме или аниониты в гидроксильной форме и десорбцию амфолитов осуществляют водным раствором кислоты при использовании в качестве сорбента анионита или основания — при использовании катионита. 388792 Составитель В.Мкртычан Редактор Т.Парфенова Техред М.Ходанич Корректор О.Кундрик Заказ 1575/46 Тираж 847 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4