Питательная среда для культивирования legionella рnеuморнilа

 

Изобретение относится к медицин- -ской микробиологии. Цель изобретенияповышение выхода биомассы и сокращение времени культивирования. Для приготов-- ления питательной среды для культивирования Legionella pneumophila в 1 л дистиллированной воды растворяют сернокислотный гидролизат рыбной кормовой муки 8-10 г, однозамещенный фосфорнокислый калий 0,8-1,2 г, двузамещенный фосфорнокислый калий 0,7-1,0 г, нагревают до кипения и кипятят 2-3 мин стерилизуют при 15 мин. Раствор L-цистеина стерилизуют фильтрацией и в количестве 0,2-0,4 г добавляют к готовой среде, рН среды 6,9- 7,0. За 32-36 ч роста выход биомассы составляет 1.10 КОЕ/мл, 1 табл. (Л С со ел со э

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1 (19) (11) (51) 4 С 1.2 Н 1/20

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

Н ДBTÎPCHÎMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21 ) 4126880/28-13 (22) 15.07.86 (46) 15.12.87. Бюл. 1(- 46 (71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. почетн.акад.Н.Ф.Гамалеи (72) С.В.Прозоровский, В.И.Артюхин, И.С.Тартаковский, Б.В.Ерусланов, А.А.Рахимов и К.И.Волковой (53) 576.8.093.1(088.8) (56) ЖМЭИ, 1985, Р 5, с ° 36-39. (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ LEGIONELLA PNEUMOPH7LA (57) Изобретение относится к медицин.ской микробиологии. Цель изобретения— повышение выхода биомассы и сокращение времени культивирования. Для приготовления питательной среды для культивирования Legionella pneumophila. в 1 л дистиллированной воды растворяют сернокислотный гидролизат рыбной кормовой муки 8-10 r однозамещенный фосфорнокислый калий 0,8-1,2 r, двузамещенный фосфорнокислый калий 0,7-1 0 r нагревают до кипения и кипятят 2-3 мин, стерилизуют при 121 С 15 мин, Раствор L-цистеина стерилизуют фильтрацией и в количестве 0,2-0,4 г добавляют к готовой среде, рН среды 6,97,0. 3а 32-36 ч роста выход биомассы составляет 1.10 КОЕ/мл. 1 табл.

1 135

Изобретение относится к медицинс- кой микробиологии и касается питательной среды, которая может быть использована для культивирования L.pneumophila с целью накопления вирулентных микроорганизмов, а также для получения вакцинных препаратов для специфической профилактики болезни легионер ров у людей.

Цель изобретения — повышение выхода биомассы и сокращение времени культивирования.

Питательную среду готовят следующим образом.

Ингредиенты среды, кроме L-цистеина, растворяют в 1 л дистиллированной воды, нагревают до кипения и кипятят

2-3 мин, проверяют реакцию среды и при необходимости корректируют извест ным способом. Среду разливают во фпаконы, стерилизуют в автоклаве при

121 С в течение 15 мин. Водный раствор Ь-цистеина НС1 стерилизуют фильт рованием через мелкопористые фильтры (0,22 ш ) и стерильно добавляют к готовой среде. В данной среде содержание аминного азота составляет 55мг-%, рН 6„9-7,0.

Сухой сернокислотный гидролизат рыбной кормовой муки готовят следующим образом.

Основой для производства сухого препарата является сернокислотный гидролиэат рыбной кормовой муки. Процесс гидролиза рыбной кормовой муки осуществляют в эмалированных реакторах в 10 .-ном водном растворе серной кислоты при 132+2 С в течение 2 ч. По окончании процесса гидролиза получено кый гидролизат охлаждают до 60-70 С и фильтруют на пресс-фильтрах через бельтрнг.

9297 2

Деионизированный гидролиэат. обрабатывают активным углем иэ расчета

20-30 г/л, фильтруют через картонные

5 фильтры и сушат в распылительной сушильной установке при температуре воздуха на входе )90-)95 С, температуо ре воздуха на выходе 90-95 С.

Полученный сухой гидролизат мелкодисперсный порошок светло-желтого цвета хорошо растворим в воде, гигроскопичен. Хранится в герметической упаковке 2 года без потери свойств.

1 -ный водный раствор сухого гидроли15, эата содержит 55,0+5,0 мг- . аминного азота.

Пример 1, Готовят среду, как описано выше, используя компоненты в следующим концетрациях, г/л: сернокислотный гидролизат рыбной кормовой муки 8,0, .однозамещенный фосфорнокислый калий 0,8; двуэамещенный фосфорнокислый калий 0,7; L-.öèñòåèí солянокислый 0,2; вода дистиллирован25 ная 1 л.

Пример 2. Готовят среду,как описано вышее, но компоненты берут в следующих соотношениях, г/л: сернокислотный гидролиэат рыбной кормовой

Зр муки 10,0; однозамещенный фосфорнокислый калий 1,2; двузамещенный фосфорнокислый калий ),О; L-цистеин солянокислый 0,4; вода дистиллированная 1 л.

Пример 3 . Готовят среду,как описано выше, но компоненты используют в следующих соотношениях, .г/л: сернокислотный гидролиэат рыбной кормовой муки 9,0; одноэамещенный фос4р форнокислый калий ),0; двузамещенный фосфорнокислый калий 0,85, L-цистеин 0 3 вода дистиллированная ) л.

П,р и м е р 4, Определение активности роста L;pneumophilà.

Жидкость темно-коричневого цвета

3,0-4, 5

Не ниже 1000

Не менее 600

Не более 1,5

Отфильтрованный гидролизат подвергают деионизации в колонках с анионитом ЭДЭ-10П. Деионизированный гидролизат должен удовлетворять следующим требованиям.: Внешний вид

Водородный показатель,рН

Общий азот, мг- .

Аминный азот, мг-%

Содержание сульфат, иона, 50

Для испытания в качестве посевного материала используют 48-часовую культуру легионелл, выращенных на угольно-дрожжевом arаре.

Культуру, смытую физраствором,вносят в объеме 2 мл в 50 мл испытуемых сред. В качестве контроля используют среду с протеоэопептоном. Посевы культивируют при 37 С на качалке при скорости вращения 250 об/мин, Учет результатов проводят через каждые

1О ч. При этом определяют концентрацию клеток в 1 мл (КОЕ) по стандартной методике, а также изучают морфоз 1359297 логические культуральные свойства выросших легионелл. м

При использовании среды с оптиальными концентрациями компонентов выход биомассы за 32-36 ч составляет

1.10 КОЕ/мл (на известной среде эа о

40-42 ч выход биомассы (1,2+0,3).10

K0E/ìë), 1

Параметры культи- Протеозопептон Сернокисвирования лотный гидролизат рыбной муки

Концентрация белковой основы, %

0,6

10 — 10

0,6

Посевная доза, КОЕ/мл

10-10

Время куль.тивирования, ч

36

Максимальный выход биомассы, КОЕ/мл

1,8.10

1,3.10 ния выхода биомассы и сокращения вре-мени культивирования, в качестве питательной основы она содержит сернокислотный гидролизат рыбной кормовой муки при следующем соотношении компонентов, г1л:

8-10

0,2-0,4

0,8-1,2

0,7-1 0

1 л.

Составитель Г,Смирнова

Техред М.Моргентал Корректор M.Äåì÷èê

Редактор И.Рыбченко

Тираж 500 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Заказ 6601

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул.Проектная,4

В та блице пред с т авл ены ср едни е данные. 5 опытов (для каждой среды от,цельно) .

Использование предлагаемой пита тельной среды позволяет ускорить процесс накопления биомассы в среднем на Ь ч при одновременном повышении выхода биомассы в среднем на

10 КОЕ/мл.

Формула изобретения

Питательная среда для культивирования Legionella pneuniophila,, содержащая питательную основу, Тцистеин, однозамещенный фосфорнокислый калий, двузамещенный фосфорнокислый калий и дистиллированную воду, о т л и ч а ющ а я с я тем, что, с целью повышеI

Сернокислотный гидролизат рыбной кормовой муки

7цистеин

Однозамещенный фосфорнокислый калий

Двузамещенный фосфорнокислый калий

Дистиллированная вода