Способ получения композиционного сорбента для колоночной хроматографии

 

Изобретение относится к способу получения композиционных сорбентов и позволяет получать сорбенты, пригодные для концентрирования и выделения биополимеров. Одну часть целлюлозы смешивают с 1 -10 ч. адсорбента или смеси адсорбентов (уголь, бентонит, каолин) и добавляют 13-15 об. 65%-ной серной кислоты. Суспензию перемешивают при комнатной температуре 15- 30 мин, добавляют воду со льдом в количестве , достаточном для снижения температуры до 2-10°С, и выдерживают на холоде 30 мин. Смесь отфильтровывают и получают сорбент. со 4 О5

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1346181 пи 4 В 01 Р 15/08, В 01 J 20 10

«У » ° в .

/ /, 3

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3969210/30-26 (22) 01.10.85 (46) 23.10.87. Бюл. № 39 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт биотехнологии (72) В. И. Максимов (53) 543.544 (088.8) (56) Жидкостная колоночная хроматография./Под ред. 3. Дейна, К. Мацека, Я. Янака. — М.: Мир, 1978, т. 2, с. 60. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПОЗИЦИОННОГО СОРБЕНТА ДЛЯ КОЛОНОЧНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ (57) Изобретение относится к способу получения композиционных сорбентов и позволяет получать сорбенты, пригодные для концентрирования и выделения биополимеров.

Одну часть целлюлозы смешивают с 1 — 10 ч. адсорбента или смеси адсорбентов (уголь, бентонит, каолин) и добавляют 13 — 15 об.

65%-ной серной кислоты. Суспензию перемешивают при комнатной температуре 15—

30 мин, добавляют воду со льдом в количестве, достаточном для снижения температуры до 2 — 10 С, и выдерживают на холоде

30 мин. Смесь отфильтровывают и получают сорбент.

1346181

Составитель Г. Никитина

Редактор H. Тупица Техред И. Верее Корректор М. Демчик

Заказ 4637/6 Тираж 656 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к способам получения композиционных сорбентов и может быть использовано в синтезе сорбентов для хроматографии биополимеров.

Цель изобретения — обеспечение возможности использования сорбента для концентрирования и выделения биополимеров.

Пример 1. 5 г чистой медицинской ваты (целлюлоза) и 20 r бентонита (аскангель) перемешивают с 80 мл 65Я-ной серной кислоты при 18 С 30 мин. К полученной суспензии добавляют воду со льдом (300 г) и перемешивают 30 мин. После фильтрования получают сорбент с отношением бентонита и целлюлозы 4:! (БЦ вЂ” 41). Полученным сорбентом наполняют колонку размером 1Х

;к, 12 см. Скорость потока воды через. колонку 48 мл/ч см -.

Пример 2. Получают сорбент аналогично примеру 1, но в качестве адсорбента берут каолин, а обработку кислотой ведут 20 мин.

Получают образец сорбента КЦ вЂ” 41. 20

Пример 3. 3 r ваты перемешивают с 50 мл

65Я-ной серной кислоты 15 мин при комнатной температуре, добавляют 30 г угля и перемешивают еще 3 мин. Добавляют смесь воды и льда (200 г), выдерживают 30 мин и фильтруют. Получают образец сорбента 25

УЦ вЂ” 101 (соотношение угля и целлюлозы 10:1).

Пример 4. 5 г ваты перемешивают с 50 мл

65о -ной серной кислоты 14 мин при 25 С, добавляют 5 г угля и 30 г бентонита и перемешивают 3 мин. Добавляют 150 г смеси воды со льдом, перемешивают и оставляют в холодильнике на 30 мин. Смесь фильтруют.

Получают образец сорбента УБЦ вЂ” -161.

Пример 5. Раствор лизоцима в воде концентрацией 1 мг/мл пропускают через колонку (0,35. 10 см) с УЦ вЂ” 101 (сорбент по примеру 3), уравновешенную водой. На колонке сорбируется 4 мг белка. Колонку отмывают водой, лизоцим вымывают 0,1 М

СНзСООН, выход белка регистрируют по поглощению при 280 нм с помощью Увикор- 40 да 11. Сорбент, полученный согласно известному способу устойчив лишь при рН больше 8, что не позволяет его использовать для выделения лизоцима.

Пример 6. Раствор рибофлавина (витамина Ва) концентрацией 0,1 г/л в 0,1 М НС1 пропускают через колонку (1,0 10 см) с

УБЦ вЂ” 161 (сорбент по примеру 4) до проскока регистрируемого по поглощению при

480 нм. Колонку промывают водой. Затем вещество элюируют 0,1 М NaOH, получают раствор, концентрация которого в 5 раз выше концентрации нанесенного раствора. Из элюента рибофлавин выделяют дЬбавлением кислоты, после чего он выпадает в виде кристаллов. В данном примере для сорбции используют раствор сильной кислоты, что невозможно при известном способе.

Пример 7. Раствор лактозы концентрацией 1 мг/мл в 0,2 М НС! пропускают через колонку (0,35 10 см) с УЦ вЂ” 101 (сорбент по примеру 3), уравновешенную 0,2 М HCl. Ha колонке сорбируется 25 мг лактозы. Колонку промывают водой, а углевод элюируют с сорбента 0,2 М СНзСООН. В данном примере адсорбцию и элюирование вещества проводят в растворах кислоты.

Пример 8, Колонку (1„3 6,5 см), содержащую сорбент по примеру 4, уравновешивают 0,05 М ацетатным буфером рН 5,0. Через колонку пропускают фермент инвертазу в том же буфере. Происходит иммобилизация инвертаза на носителе. Через колонку с иммобилизованным ферментом пропускают

7Я-ный раствор сахарозы в 0,05 М ацетатном буфере при рН 5,0 и 40 С. Время контакта субстрата с ферментом (время выхода из колонки) составляет 20 мин. Концентрация восстанавливающих сахаров после выхода из колонки превышает ЗЯ, т. е. предлагаемый способ позволяет получать сорбенты, пригодные для иммобилизации биополимеров с сохранением их специфической активности.

Формула изобретения

Способ получения композиционного сорбента для колоночной хроматографии, включающий смешивание минерального адсорбента с -раствором полисахаридного связующего в кислоте с последующей коагуляцией композиции, отличающийся тем, что, с целью обеспечения возможности использования сорбента для выделения биополимеров, смешив,ание компонентов проводят в

65о-ной серной кислоте, в качестве полисахарида используют целлюлозу, а коагуляцию осуществляют добавлением воды со льдом.