Способ получения модифицированного макропористого кремнезема

 

Изобретение относится к макропористьм кремне мным сорбентам для выделения и очистки биологически активньпс соединений и позволяет повысить емкость модифицированного кремнеземного сорбента для получения jf-глобулина. 10 г макропористого кремнезема сушат 2 ч в токе сухого инертного газа, а затем обрабатывают 30 мл 10%-ного растворар-фенилэтилтрихлорсилана в бензоле при 80°С в течение 2 ч в присутствии 0,23 мл триэтиламина. Продукт промывают сухим хлороформом, гидролизуют горячей водой и сушат под вакуумом 6 ч при 130 С. Полученный образец заливают метилхлорметиловым эфиром и нагревают при 60 С в течение 2 ч в присутствии каталитических количеств четыреххлористого олова. После экстракции диоксаном в присутствии сухого хлористого водорода образец сушат под ё вакуумом 5 ч при 130 С. Затем просл дукт обрабатывают 1%-ным раствором имидазола в этипацетате 2 ч при 77с, промывают этилацетатом, 10%-ным раствором тризтиламина в хлороформе и хлороформом. Целевой продукт содержит 0,14 ммоль/г остатков имидазольных групп.

СОЮЗ СО8ЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1 (19) (И) (51) 4 В 01 3 20/10, В 01 D 15/08

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР по делАм изОБРетений и ОткРытий f

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ / "

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3867209/31-26 (22) 07. 01.85 (46) 07.10.86. Бюл. N- 37 (71) Ленинградский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им. А.А.Жданова (72) В.Н.Постнов, А.В.Брыкалов и И.М,Гиманова (53) 543.544(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР № 857169, кл. С 08 К 9/04, 1981.

Авторское свидетельство СССР № 1153975, кл. В 01 J 20/10, 1982. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЧ МОДИФЙЦИРОВАННОГО МАКРОПОРИСТОГО КРЕМНЕЗЕМА (57) Изобретение относится к макропористым кремне(умным сорбентам для выделения и очистки биологически активных соединений и позволяет повысить емкость модифицированного кремнеземного сорбента для получения

0-глобулина. 10 г макропористого кремнезема сушат 2 ч в токе сухого инертного газа, а затем обрабатывают

30 мл 107-ного раствора Р -фенилэтилтрихлорсилана в бензоле при 80 С в течение 2 ч в присутствии 0,23 мл триэтиламина. Продукт промывают сухим хлороформом, гидролиэуют горячей водой и сушат под вакуумом 6 ч при

О

130 С. Полученный образец заливают метилхлорметиловым эфиром и нагреваь ют при 60 С в течение 2 ч в присутствии каталитических количеств четыреххлористого олова. После экстракции диоксаном в присутствии сухого хлористого водорода образец сушат под о вакуумом 5 ч при 130 С. Затем продукт обрабатывают 1Х-ным раствором имидазола в этилацетате,2 ч при 77 С, промывают этилацетатом, 107-ным . раствором триэтиламина в хлороформе и хлороформом. Целевой продукт содержит 0 14 ммоль/г остатков имидазольных групп.

1261705

= Si.- 0

=- й-ON+ Cl Si-(СН) О . Si-(СН,), Q (ll

-2 НС1 =Si- 0"

=p1 — ОН

С1

=- 1-О-,-(н,),-©.Н,О „„",.,,si-ßê,1.-© (l

Cl

ОН

СН=М

3 СН

СН М

СН СН 0 1(МЯ O СН2 СН=СН

-НС1 ОН

Si (СН2)2

ОН ментов.

Изобретение относится к сорбентам для выделения и очистки биологически активных соединений и может быть использовано в синтезе аффинных сорбентов для получения гамма-глобулина.

Цель изобретения — повышение емкости модифицированного кремнезема.

Пример 1, 10 г макропористого кремнезема (R„, =12 нм, Бу =

=120 м /г), очищенного от ионов железа, сушат 2 ч в токе сухого инертного газа, а затем обрабатывают 30 мл

107-ного раствора (3 -фенилэтилтрио хлорсилана в бензоле при 80 С в течение 2 ч. Перед проведением реакции реакционную смесь добавляют 0,23 мл триэтиламина. Непрореагировавшие реагенты удаляют с образца сухим хлороформом. После. этого образец гидролизуют горячей водой, а затем сушат о под вакуумом 6 ч при t 130 С. Хлорметилирование проводят в среде метилхлорметилового эфира в присутствии четыреххлористого олова как каталио затора при 60 С в течение 2 ч. После окончания реакции образец помещают в аппарат Сокслета с диоксаном, в который подают сухой хлористый водород. После удаления четыреххлорисПо емкости полученный продукт в два раза превосходит известный.

Пример 2. Полученный модифицированный кремнезем используют в качестве сорбента для аффинной хроматографии при очистке плацентарного гамма-глобулина человека от гемопигтого олова образец отмывают от хлористого водорода диоксаном и сушат под вакуумом 5 ч при 130 С. Продукт содержит 0,37 ммоль/г хлорметильных групп. Анализ на хлор проводят модифицированным методом Фольгарда с использованием предварительной обработо ки пиридином (при 100 С в течение

2 ч).

Затем образец обрабатывают 1Х-ным раствором имидазола в этилацетате

2 ч при t 77 С, промывают этилацетао том, 10Х-ным раствором триэтиламина в хлороформе, хлороформом. Получен15 ный образец содержит 0 14 ммоль/г остатков имидазольных групп. Содержание имидазольных групп на поверхности определяют по адсорбции красителя кислотный ярко-оранжевый Ж

М=М

Пр оце сс получе ния модифицир ов анного кремнезема можно представить следующей схемой:

В хроматографическую колонку

1,5х30 см помещают 2 г сорбента, полученного предлагаемым способом, уравновешивают фосфатным буфером

ss (рН 7, О) и наносят 1 мл 107-ного плацентарного гамма-глобулина, содержащего 6-10 мг гемопигментов.

Фракции по 5 мл элюируют из кслонки

1 261 705 незема в пропущенном через колонку гамма-глобулине появляются *римеси гемопигментов (1-57).

Формула изобретения

Составитель С. Староверов

Техред. А. Кравчук Корректор С.Шекмар

Редактор Е.Папп

Тираж 527 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 5286/7

Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул. Проектная, 4

30 мл фосфатного буфера рН 7,0. Все операции проводят при 4 С. Выход очищенного от гемопигментов гаммаглобулина составляет 80Х. Гаммаглобулин полностью очищен от гемо- 5 пигментов. Гомогенность полученного препарата подтверждают электрофорезом в полиакриламидном геле °

Регенерацию носителя проводят при использовании 0,01 н. NaOH. Регенерированный носитель отмывают водой от NaOH до рН 7,0, уравновешивают фосфатным буфером и используют для очистки новой порции гамма-глобулина.

При этом выход гамма-глобулина сос- 5 тавляет 80Х он полностью очищен от гемапигментов. После пятикратного использования модифицированного кремСпособ получения модифицированного макропористого кремнезема, включающий последовательную обработку .кремнезема кремнийорганическим модификатором, галогенсодержащим соединением и азотсодержащим лигандом, отличающийся тем, что, с целью повышения емкости продукта, в качестве модификатора используют

1 -фенилэтилтрихлорсилан, в качестве алогенсодержащего соединения — метилхлорметиловый эфир и в качестве лиганда — имидазол.