Способ размножения и сохранения клубеньковых бактерий, используемых при производстве нитрагина

 

Изобретение относится к способам размножения и сохранения клубеньковых бактерий при производстве бактериального препарата нитрагина, С целью повышения численности и выживаемости бактерий и упрощения способа в качестве природного субстрата-носителя и источника питания используют органический сапропель с содержанием сухих веществ 15-25%. Производят подготовку сапропеля, нейтрализуя его. углекислым кальцием до рН 6,8-7,2, расфасовку, холодную стерилизацию с последующей инокуляцией его исходным инокулюмом клубеньковых бактерий, упаковку и хранение 2 табл. с (Л оо i О5 О5

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1314661 A 1 (51)4 С 12 N 1/04//(С 12 N 1/04, С 12 R 1:01) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К Д ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3645745/28-13 (22) 22.09.83 (46) 15.03 ° 88. Бюл. )) 10 (71) Институт микробиологии АН БССР и Институт торфа АН БССР (72) Н.И,Мильто, А.И.Карбанович, M.З.Лопотко и П,Л.Кузьмицкий (53) 577.15 (088.8) (56) Бекер M.F.. Введение в биотехнологию, M.: Пищевая промьппленность, 1978, с. 83 °

Позднякова А.И., Хатякович А.В.

Труды Всесоюзного научно-исследовательского института сельскохозяйственной микробиологии. )")инск, 1974, т. 48, )72, (54) СПОСОБ РАЗ))НОЖЕНИЯ И СОХРАНЕНИЯ

KJIYBEHbK0BMX БАКТЕРИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ

ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ НИТРАГИНА (57) Изобретение относится к способам размножения и сохранения клубеньковых бактерий при производстве бактериального препарата нитрагина. С целью повьппения численности и выжива" емости бактерий и упрощения способа в качестве природного субстрата-носителя и источника питания используют органический сапропель с содержанием сухих веществ 15-257. Производят подготовку сапропеля, нейтрализуя его. углекислым кальцием до рН 6,8-7,2, расфасовку, холодную стерилизацию с последующей инокуляцией его исходным инокулюмом клубеньковых бактерий, упаковку и хранение, 2 табл.

1314661

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается размножения и сохранения клубеньковых бактерий при производстве нитрагина. Бактериальный препарат — нитрагин применяют в сельском хозяйстве для инокуляции клубеньковыми бактериями бобовых культур с целью повышения их аэотнакопительной .способ- 10 ности, урожайности и качества продукции.

Цель изобретения — повышение численности и выживаемости клубеньковых бактерий и упрощение способа. 15

Способ заключается в том, что использование в качестве субстрата-носителя клубеньковых бактерий органических сапропелей с содержанием сухих веществ 15-257 обеспечивает за 20 счет органического материала, содержащего питательные вещества, активное размножение и сохранение в течение года в 3-5 раз большего количества жизнеспособных клеток быстро и мед.ленно растущих клубеньковых бактерий при незначительном загрязнении посторонней микрофлоры.

Сапропели по свойствам подразделяются на органические, кремнеземистые из0 и карбонатные. Органические сапропели характеризуются повышенным содержанием органического компонента

{59,6-95,77 в расчете на сухое вещество), невысокой эольностью (6,340,27), значительной амплитудой рН с

4,6-7,4.

Элементарный состав органической массы сапропелей сравнительно постоянен. Содержание углерода колеблется 40 от 48 до 65Х, азота — от 1,3 до

6,0Х. на абсолютно сухую органическую массу.

Сапропели содержат все биогенные 45 макро- и микроэлементы, Доступность питательных веществ сапропелей для микроорганизмов сравнительно невелика, Нейтрализация сапропелей, имеющих кислую реакцию, внесением СаСО»

50 обезвоживание их до определенных пределов, а также стерилизация повышают доступность питательных веществ и полноценность сапропелей в качестве субстрата для размножения

55 и сохранения клубеньковых бактерий.

Влияние обработки сапропеля на его химические свойства представлены в табл.l.

Пример. В качестве субстрата для размножения и сохранения различных видов клубеньковых бактерий ис-. пользуют органический сапропель озера Судобль Минской области или озера

Лочинское с содержанием сухого вещества 20Х. Нейтрализованный СаСО> до рН 7,0 сапропель расфасовывают в полиэтиленовые пакеты иэ расчета

50 r сухого вещества, Пакеты запаивают, упаковывают в кортонные коробки и стерилиэуют гамма-излучением в дозе 4,0-5,0 Мрад. Простерилизованный сапропель проверяют на стерильность путем высева его водной суспенэии 1:10 на мясопептонный агар с 0,57 глюкозы и 0,57. сахарозы. Стерильный сапропель инокулируют инъекцией жидкой культуры инокулянта непосредственно в пакет. Инокулянт вносят иэ расчета 1,0 млрд, жизнеспособных клеток на 1 г сухого сапропеля. Прокол заклеивают липкой лентой и содержимое пакетов тщательно перемешива-. ют. Пакеты с инокулированными клубеньковыми бактериями сапропелем хранят о при температуре 16 С.

Результаты использования органического сапропеля при содержании

15-25Х абсолютно сухого вещества приведены в табл.2.

Таким образом, в сравнении с прототипом при использовании в качестве субстрата-носителя торфа наблюдались низкие титры размножения — 12,6 мпрд. клеток и сохранение в течение года всего 6,5 млрд. клеток .в 1 г сухоro препарата, а по предложенному способу в течение года сохранность бактерий в 3-5 раз выше.

Формула изобретения

Способ размножения и сохранения клубеньковых бактерий, используемых при производстве нитрагина, предусматривающий подготовку природного субстрата-носителя и источник питания, путем нейтрализации его углекислым кальцием до величины рН 6,8-7,2, расфасовки, холодной стерилизации с последующими инокуляцией его исходным инокулюмом клубеньковых бактерий, упаковкой и хранением, о т л и ч а— ю шийся тем, что, с целью повышения численности и выживаемости бактерий и упрощения способа, в качест1314661 ческий сапропель с содержанием сухих веществ 15-257,, ве природного субстрата-носителя и источника питания используют органиТаблица!

Влияние отделъных приемов предварительной обработки сапропеля на его химические свойства

Аналнэируемые формы сапропеля

Химические пока152 сухого вещества

252 сухого вещества

20Z сухого вещества эатели

1 2

5е15 5э50 7е05 7э25 5 20 5э45 7в 10 7э20 5е25 5 ° 45 7 10 7 ° 20 рН

1350 3200 1800 3600 2600 4800 3400 5800 3500 5750 4520 6750

Содернание ам-! миачного азота

304 Н.об. 360

Н.об, 446 Сл. 500 Сл, 528

К.об. 280 Н,об.

Содерщание ннтратного азота

1 ll 8 20

6 17

ll 1 8

5 2

Содернание подвинного фосфора

68 83 77 82 79 . 82

74 78 75

80 89 82

Содерхание подвн кного алюминия

63 131 131 87 42 135 132 85 49

145 140 99

+ - сапропель беэ внесения СаСОэ, П вЂ” сапропель, нейтралиэованиый СаСО>, сапропель, не подвергнутый стерилизации, 2 — сапропель, подвергнутый стерилизации ееа - Содерщание углерода н остальных элементов дано в мг на l кг субстрата.

Таблица 2

Размножение и сохранение клубеньковых бактерий в органическом сапропеле оз. Лочинское Минской обл. с содержанием сухого вещества 15-257

Коли че с тво постоИнокулянт

Срок хранения, месяцы

Сапропель, содержащий !$7. сухого вещества

Клубеньковые бактерии сои, шт.

629 а

0,5

31,8

0,3

21,2

24,5 13,6

Клубеньковые бактерии люлина, шт.

367 а

0,6

19,8

28,4 23,5 10,2

0,3

Содерванне водорастворимого углерода"

Количество клубеньковых бактерий, млрд/r сухого вещества ронних микрооргаНИЗМОВ,4 от коли чества клубеньковых бактерий

1314661

Про: олжение табл.2

Количество клубеньковых бактерий, млрд/г сухого вещества

Ииокулянт

Срок хранения, месяцы

1 3

Клубеньковые бактерии гороха, шт.

250 а

0,2

145,0 106, 9 63, 7

70,0

1,5

Клубеньковые бактерии сои, шт. 629 а 0,6

38,0

49,6 41,5 25,0

0,3

Клубеньковые бактерии люпина, шт. 367 а 0,8

31,5

37,4

29,8 14,8

0,4

Клубеньковые бактерии гороха, шт. 250а 2,0

89,4

183,7 114,5 84,0

0,3

Сапропель, содержащий 25Х сухого вещества

Клубеньковые бактерии сои, шт, 629 а 0,5

29,6

20,5

21,7 12,5

0 5

Клубеньковые бактерии люлина, шт. 367 а 0,7

23,4

27,5

20,5 8,6

0,4

Клубеньковые бактерии гороха, шт. 250а 1,8

110,0 103,6 59,7

58,7

0,3

Составитель И.Привалова

Техред И.Попович

Редактор Л.Павлова

Корректор М.Демчик

Заказ 1199

Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная,4

Сапропель, содержащий 20Х сухого вещества

Тираж 520 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж"35, Раушская наб., д.4/5

Количеств»

ЭО ПОСТО" рониик микрoopгб

НИЗМОЭ,З от коли чества клубенъковых бакте» рий