Способ идентификации бактерий рода @

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается способа идентификации бактерий рода Klebsiell. Цель изобретения - ускорение и упрощение способа. Способ осуществляют следующим образом. Исследуемый материал высевают на плотную питательную среду, содержащую, г/л дистиллированной воды: сухой питательный агар 32,0 - 35,0; L-арабиноза 8,0 - 12,0; бромтимоловый синий 0,06 - 0,08; 5-аминосалициловая кислота; 4,5 - 5,5. Среда светлозеленого цвета, рН 6,8 - 7,2. Посев инкуЙ1руют при 35 - 37 С. Вокруг колоний бактерий рода Klebsiell образуется зона интенсивного чернокоричневого цвета диаметром 25 35 мм, Идентификацию проводят в один этап без дальнейших пересевов на специфические питательные среды, Способ высоко чувствителен и позволяет определять наличие колебания в концентрации менее 100 кл/мл в ассоциации микроорганизмов, Точность 91,7 t2 %. Время идентификации без предварительного вьщеления чистой культуры 18 - 24 ч. 1 табл. (Л

. СОЮЗ СО8ЕТСНИХ

COUHA J1HCTPHECHHX

РЕСПУБЛИН (19) (11) А1

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР (21) 3858284/28-13 (22) 25. 02. 85 (46) 30, 05 ° 87. Бюл, Ф 20 (72) Е.П.Сиволодский (53) 576.8.093 ° 1 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

1(= 1235220, кл, С 12 Q 1/04, С 12 N 1/20, 1984.

Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней. .Под ред, К.И.Матвеева. 11.: Мед., 1973, с,320. (54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ

РОДА KLEBSIELLA (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается способа идентификации бактерий рода

Klebsiell, Цель изобретения — ускорение и упрощение способа, Способ осуществляют следующим образом, Исследуемый материал высевают на плот(51) 4 С 12 Q 1/04 // (< 12 Q 1/04, С 12 R 1:22) ную питательную среду, соде1.жащую, г/л дистиллированной воды: сухой питательный агар 32,0 — 35,0; L-арабиноза 8,0 — 12,0; бромтимоловый синий 0,06 — 0,08; 5-аминосалициловая кислота; 4,5 — 5,5. Среда светлозеленого цвета, рН 6,8 — 7,2, Посев инкубйруют при 35 — 37 С. Вокруг колоний бактерий рода Klebsiell образуется эона интенсивного чернокоричневого цвета диаметром 25

35 мм, Идентификацию проводят в один этап без дальнейщих пересевов на специфические питательные среды.

Способ высоко чувствителен и позволяет определять наличие колебания в концентрации менее 100 кл/мл в ассоциации микроорганизмов. Точность

91,7 + 2 7. Время идентификации без предварительного выделения чистой культуры 18 - 24 ч. 1 табл.

1 1 31

Изобретение относится к медицине, в частности, к медицинской микробиологии

Цель изобретения - ускорение и упрощение способа идентификации бактерий рода Klebsiella путем создания среды, обеспечивающей одноэтапное определение.

Дифференциальную среду готовят следующим образом, В 1 л воды вносят 35 г сухого пи" тательного агара на любом гидролиэате, кипятят до полного растворения. (или автоклавируют), Добавляют 5 г

5-аминосалициловой кислоты. 10 r

L-арабинозы, 4 мл 1,67-ного спиртового раствора бромтимолового синего, растворяют при перемешивании.

Добавляют при перемешивании 1 н, раствор NaOH до появления зеленой окраски среды, соответствующей рН 6,8-7,2 (на каждые 100 мл среды требуется около 2,5-3 мл 1 н. раствора NaOH). Разливают среду в стерильные чашки Петри, Среда в чашках

Петри имеет зеленую окраску, пригодна к использованию и течение 5 суток при хранении от 4 до 8 С.

Пример 1, Исследуемый материал — чистую агаровую культуру идентифицируемых бактерий — засевают петлей в виде бляшки диаметром

5 мм на поверхность сектора питательной среды в чашке Петри (среда содержит на 1 л дистиллированной воды, г: сухой питательный агар из рыбного гидролиэата 32; 5-аминосалициловая кислота 4,5; L-арабино3а 8; бромтимоловыи синий 0,06; рН 7,0, установлен добавлением 30 мл

1 н ° раствора NaOH). Инкубируют при

37 С в течение 18 ч, после чего учитывают результат: на поверхности питательной среды светло-зеленого цвета вырастает в виде бляшки макроколония бактерий, окруженная зоной питательной среды диаметром 25 мм интенсивной черно-коричневой окраски. Наличие этой зоны указывает на принадлежность исследуемых бактерий к роду Klebsiella.

Пример 2. Исследуемый мате риал — мокроту больного (0„1-0,2 мл) засевают шпателем на поверхность питательной среды в чашке Петри среда содержит, г: сухой питательный агар 33,5, 5-аминосалициловая кислота 5,0; L-арабиноза 10; бромтимоло3874 2

t5

30 вый синий 0,07 r;„ pH 6,8 ° Инкубирук т при 37 С в течение 24 ч, после чего учитывают результат: на поверхности питательной среды светло-зеленого цвета вырастают колонии различных бактерий, среди которых имеются окруженные четкой зоной черно-коричневой окраски среды, что указывает на принадлежность бактерий из этих колоний к роду Klebsiella.

Пример 3. Исследуемый материал, содержащий идентифицируемые бактерии, засевают на поверхность питательной среды в чашке Петри среда содержит, г: сухой питательный агар 35; 5-аминосалициловая кислота

5,5; L-арабиноэа 12; бромтимоловый синий 0,08; дистиллированная вода

1 л; рН 7,2„ Посев инкубируют при

35 С в течение 18 ч, после чего учитывают результат: на поверхности питательной среды светло-зеленого цвета вырастают колонии бактерий, окруженные зонои питательной среды интенсивной черно-коричневой окраски.

Наличие этой зоны указывает на принадлежность исследуемых бактерий к роду Klebsiella.

В таблице представлены примеры использования способа с вариантами питательной среды, приготовленной на основе "Эритроит агар сухой".

Способ обладает высокой чувствительностью, позволяет обнаружить и идентифицировать Klebsiell при наличии их в исследуемом материале менее

100 кл./мл.

Дифференциальные признаки Klebsiell (зона черно-коричневой окраски среды вокруг колоний) четко проявляются при ассоциациях с любыми бактериями, способными расти на данной среде °

Предлагаемый способ позволяет идентифицировать 91,7+2,0% штаммов

Klebsie11.

Способ ускоряет идентификацию (через 18-24 ч вместо 48-72 ч по известному способу), которую проводят непосредственно при посев исследуемого материала на питательную среду, без дополнительных пересевов на дифференциальные среды.

Формул а и з о б р е т е н и я

Способ идентификации бактерий рода Klebsiella путем посева исследуе13874

Сухой питательный

13 мого материала на питательную среду, содержащую сухой питательный агар, бромтимоловый синий и дистиллированную воду, при рН 6,8"7,2 с последующим инкубированием посевов при 35—

37. С и идентификацией искомых бактерий по характеру окрашивания, о т— л и ч а ю шийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, в качестве источника углеводов используют L-арабинозу, при этом в питательную среду дополнительно вводят

5-аминосалициловую кислоту при следующем соотношении входящих в нее ингредиентов, г/л:

32,0-35,0

8,0-!2,0 агар

L-Арабино за

5 Бромтимоловый синий

5-Аминосали0,06-0,08

Посев чистой культуры Klebsiell

Наличие

Размер колоний

Klebsie11 мм

Фоновая

Посев бляшкой диаметром 5 мл зон черно-коричневой окраска питательной

Выраженность

Фоновая окL-арабиноза, г/л

5-Аминосалициловая окраски средь вокруг колоний прочих видов бактерий среды раска питачерно корич невой кислота, г/л тельной среды окрас ки пи татель ной среды вокру колоний

Klebs iel1

4,5

25-30

25-30

25-30

Светло-зеленая

То же

++ 2-4 То же

5 0

30-35

-+++ 2-4

Светло-зеленая

Светлозеленая.+++

30-35

30-35

2-4

+++, 2-4

Варианты питательной среды на основе

"эритроит агар сухой 36 г/л, индикатор бромтимоловый синий 0,064 г/л, рН 7,0

Интенсивность дифференциаль ного признака — диаметр зоны чернокоричневой окраски среды вокруг бляшки колонии Klebэ1е11,мм циловая кислота 4,5-5 5

f0 Дистиллированная вода До 1 л, посев инкубируют в течение 18-24 ч до образования темно-коричневой эоны вокруг колонии, по которой иден-!

5 тифицйруют бактерии рода Klebsiella, 1

Посев смешанной культуры (фекалии с добавлением тест-культуры Klebsiell) ++ 2-4 Светлозеленая

++ 2-4

1313874

Продолжение таблицы

Варианты питательной среды на основе

"эритроит агар сухой 36 г/л, индикатор бромтимоловый синий О ° 064 г/л, рН70

Посев чистой культуры К1еЬв3.е11

Посев смешанной культуры (фекалии с добавлением тест-культуры Klebsiell) Фоновая окраска питательной среды

Размер колоний

К1еЬsiell мм

Посев бляшкой диаметром 5 мл

Фоновая окL-,арабиноза, г/л

5-Аминосалициловая кислота, г/л раска пит ательной среды

5,5

25-30

30-35

++ 2-3 ЖелтоСветло-зеленая зеленая

++ 2-3

++ 2-3

12

25-30

П р и м е ч а н и е ° Учет результатов посевов через 24 ч инкубапии при

37 С °

Чувствительность среды 60-1007 по отношению к числу колоний Klebsiell, выросших на питательном ага ре б е з пр едложенных добавок .

Составитель А. Завадская

Техред А. Кравчук

Корректор С.111екмар

Редактор А.Маковская

Заказ 2181/26 Тираж 500

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Подписное

Производственно-псптиграАическое предприятие, r ° Ужгород, ул.Проектная, Интенсивность дифференциаль ного признака — диаметр зоны чернокоричневой окраски среды вокруг бляшки колонии К1еЬsiell Mì

Выраженность черно корич невой окрас ки пи тат ель ной ср.еды вокру колоний

К1еЪsie1l

Наличие эон черно-коричневой окраски среды вокруг колоний прочих видов бактерий