Способ выявления факторов адгезии у бактерий рода @

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Цель изобретения - повышение специфичности способа . Сущность способа сводится к тому, что исследуемую культуру протея выращивают на плотной питательной среде в течение 24 ч при 28-30 С. Для постановки реакции гемагглютинации используют 3%-ную взвесь эритроцитов цыпленка на физиологическом растворе с добавлением 0,6% D-маннозы. Полученную суспензию эритроцитов смешивают в равном соотношении с суспензией исследуемой культуры протея концентрацией 1 млрд/мл. По образованию агглютинационных хлопьев в течение 1-2 мин определяют способность культуры протея давать D-маннозорезис - тентную реакцию гемагглютинации, т.е. наличие факторов адгезии. 1 табл. (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) А1

@(РГ,:ъ У, 1т ", а, ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (2i) 3872934/28-13 (22) 07.01.85 (46) 23.05.87. Бюл. В 19 (71) Башкирский государственный медицинский институт им. 15-летия

ВЛКСМ и Уфимский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова (72) З.Г.Габидуллин, В.М.Бондаренко, И.Б.Ишкильдин и P.Á.Èøìóðçèí (53) 576.851.47(088.8) (56) Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 1984, У 3, с, 46-48. (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ФАКТОРОВ АДГЕЗИИ У БАКТЕРИЙ РОДА PROTEUS (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии. Цель изобрете(51) 4 С 1? ((1/04//(С 12 Q 1/04, С 12 R 1:37) ния — повышение специфичности способа. Сущность способа сводится к тому, что исследуемую культуру протея выращивают на плотной питательной среде о в течение 24 ч при 28-30 С. Для постановки реакции гемагглютинации используют ЗЖ-ную взвесь эритроцитов цыпленка на физиологическом растворе с добавлением 0,67. D-маннозы. Полученную суспензию эритроцитов смешивают в равном соотношении с суспензией исследуемой культуры протея концентрацией 1 млрд/мл. По образованию агглютинационных хлопьев в течение

1-2 мин определяют способность культуры протея давать D-маннозорезис

Cl тентную реакцию гемагглютинации, т.е. наличие факторов адгезии. 1 табл.

13 l 2098

Изобретение относится к медицин-ской микробиологии и касается выявления этиологической значимости бактерий рода Proteus.

Цель изобретения — повьппение специфичности способа.

Пример. Выращивание исследуемой культуры проводят на скошенном агаре, который готовят на основе бульона Хоттингера (рН 7,4-7,6) с до- 10 бавлением к 98 мл бульона 1„5 г промытого вымороженного дальневосточного агар-агара и 0,5 г дрожжевого экстракта. Выращивание проводят в течение 24 ч при 28-30 С.

Для приготовления суспензии эритроцитов используют эритроциты цыпленка, из которых готовят 37-ную взвесь на физиологическом растворе с добавлением 0,6X D-маннозы. Концентрация эритроцитов 250 млн/мл.

Постановка D-ìàííosoðåçèñòåíòíoé реакции гемагглютинации (ДМГ).

На чистое предметное стекло нано25 сят по 0,05 мл суспензии эритроцитов и 0 05 мл суспензии исследуемой культуры протея с концентрацией 1 млрд/мл, Осторожно перемешивают при комнатной температуре. По образованию агглютинационных хлопьев в течение 1-2 мин судят о способности культур давать

D-маннозорезистентную реакцию гемагглютинации, Для определения степени адгезивной 35 активности бактерий реакцию ДМГ ставят с культурой различной оптической плотности (1 млрд/мл — 250 тыс ° /мл) и результаты оценивают следующим образом, Наличие агглютинационных хлопьев при смешивании суспензии эритроцитов и культуры с оптической плотностью 1 млрд/мл — 25 млн/мл считается слабо положительной реакцией, 25 млн/мл — 15 млн/мл — положительной активности реакция, 15 млн/мл

5 млн/мл — средней положительной активности реакция, 5 млн/мл—

500 тыс./мл — высокой активности реакция. Отсутствие хлопьев свидетельствует об отрицательной реакции.

В качестве контролей проводят реакцию с интактной культурой н без культуры. 55

Изучают 112 штаммов протея, выделенные от больных с гнойно-воспалительными и кишечными инфекциями, среди которых Pr.vulgaris 14, Pr mirabilis 86, N,morgani 11 штаммов и

Pr. stuartii 1 штамм.

Параллельно для сравнения с известным методом ставится D-маннозорезистентная реакция гемагглютинации с ЗЖ-ной взвесью бычьих эритроцитов и с ЗЕ-ной взвесью эритроцитов человека II группы крови, Результаты опытов представлены в таблице.

Из таблицы видно„ что с помощью предлагаемого способа выявлено

32 штамма с положительной реакцией

D-ìaHíoçoðåçHñòåíòHoé гемагглютинации, а по известному не выявлено ни одного такого штамма, что свидетельствует о более высокой специфичности предлагаемого способа.

Из выявленных 32 штаммов 18 обладают высокой, 7 средней, 6 положительной и 2 слабой активностями.

Специфичность способа подтверждается также следующими опытами.

В одном из опытов получают сыворотки от кроликов, шестикратно иммунизированных внутривенно культурами протея с положительной реакцией Dманнозорезистентной гемагглютинации и с отрицательной реакцией ДМГ и

1 проверяют их действие на D-маннозорезистентную гемагглютинацию. Установлено, что сыворотки, полученные от иммунизации культурой с положительной ДМГ, тормозят реакцию D-маннозорезистентной гемагглютинации, а вторые не оказывают никакого действия на эту реакцию, что свидетельствует об антигенном характере фактора адгезии бактерий рода Proteus.

В другом опыте исследуют корреляцию свойств штаммов давать реакцию

ДМК с их способностью вызывать острую токсическую пневмонию у экспериментальных животных.(мыши весом 1718 r). Устанавливают, что все исследованные 23 штамма протея, вызывающие острую токсическую пневмонию у животных, дают с эритроцитами цыпленка положительную реакцию ДМГ.

Применение для выявления адгезионных свойств бактерий рода Proteus эритроцитов цыпленка повьппает специфичность способа, дает возможность получить количественную характеристику адгезии, что позволяет достоверно определить этиологическую значимость бактерий рода Proteus в возникновеыи л гнойно-септиче-.ких и кишечных

3 1312098 4 заболеваний и проводить целенаправ- нонкой с ней Р-маннозорезистентной ленную профилактику и лечение ° реакции гемагглютннации с 3%-ной взвесью эритроцитов и учетом полученФормулаиз обретения ных результатов, о т л и ч а ю щ и йСпособ выявления факторов адгеэии 5 с я тем, что, с целью повышения спеу бактерий рода Proteus путем выращи- цифичности способа, реакцию гемагвания исследуемой культуры на плотной глютинации проводят с эритроцитами питательной среде с последующей поста- цыпленка.

Р-наяиоаоревистеитиая реакция по способу

Нолнчест втаннов

Ниолинический тиц иавестиону предлагаенону ритроциты II rp. рови человека

Эритроциты быкН"

Эритроциты кури

9 5

20 66

2 9

1 Нет

8 6

21 65

2 9

Proteus vulgaris

Proteus mirabilis

Nworganii

14 .

Нет

Нет

86

° l

Pr. stuartii н

1 Нет

Н р и í е ч а я и е. + — реакция полакителъиая, - — реакция отрицательная.

Составитель В.Дроздов

Редактор Н.Гунько Техред A.Êðàâ÷óê Корректор С.Черни

Заказ 1935/24 Тираж 500 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4