Способ определения серотонина и гистамина в биологических объектах
Изобретение относится к клинической биохимии. С целью повьшения чувствительности и упрощения определения серотонина и гистамина навеску биологического материала гомогенизируют, центрифугируют. Супернатант и контрольные раствЬры серотонина, гистамина наносят на пластину с силуфолом и хроматографиругот в системе этанол - уксусная кислота - вода (5:3:2). Пластины сушат, проявляют 3-5%-ным раствором аллоксана в диметилформамиде, нагревают 3-5 мин при 100-105°С. Участки хроматограмм элюируют диметилформамидом и спектрофотометрируют. Кд со о:
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
„SU„„290167 (51)4 С 01 N 33 52 33 48
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
М с©
C)
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPbITI44 (21) 3787859/28-14 (22) 07,09.84 (46) 15.02.87..Бюл. У 6 (71) Запорожский медицинский институт (72) Н.В.Степанова, E.Е.Яремко и В.В.Петренко (53) 615.787(088.8) (56) Саминский Н.В. и др. — Лабораторное дело, 1982, Ф 2, с. 104-107. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕРОТОНИНА
И ГИСТАИИНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ (57) Изобретение относится к клинической биохимии. С целью повышения чувствительности и упрощения определения серотонина и гистамина навеску .биологического материала гомогениэируют, центрифугируют. Супернатант и контрольные растворы серотонина, гистамина наносят на пластину с силуфолом и хроматографируют в системе этанол— уксусная кислота — вода (5:3:2). Пластины сушат, проявляют 3-57-ным раствором аллоксана в диметилформамиде, нагревают 3-5 мин при 100-105 С. Участки хроматограмм элюируют диметилформамидом и спектрофотометрируют.
1 129016
Изобретение относится к клинической медицине и может быть использовано в клинических биохимических лабо— раториях.
Цель изобретения — повышение чув- 5 ствительности и упрощение способа за счет использования цветореагента аллоксана.
Способ осуществляют следующим образом. 10
Навеску исследуемого биологического материала гомогенизируют, центрифугируют, супернатант и стандартные растворы серотонина и гистамина наносят на пластину с силуфолом и прово- 15 дят хроматографию в системе растворителей этанол:уксусная кислота:вода
5:3:2. После этого пластины высушивают, проявляют 3-57.-ным раствором аллоксана в диметилформамиде, нагре- 20 вают 3-5 мин при 100-105 С, элюируют проявленные участки диметилформамидом, спектрофотометрируют И рассчитывают содержание серотонина и гистамина. 25
Пример t. Навеску ткани 50 мг тщательно гомогенизируют в 1 мл дважды дистиллированной воды. Гомогенат. центрифугируют в течение 30 мин при
3000 об/мин. На линию старта пластины 30 силуфола УФ 254 наносят 5 пятен надосадочной жидкости (0,03 мл) и два пятна О, 1 стандартных растворов серотонина — креатинин сульфата и гистамина дигидрохлорида. Хроматограммы помещают в систему растворителей этанол — уксусная кислота — вода (5:3:2). После прохождения раствори-. телем 10-11 см пластины вынимают, высушивают и проявляют 37.-ным раствором 40
7 2 аллоксана в диметилформамиде (ДМФА) с последующим нагреванием в сушильном шкафу при 100 С в течение 3 мин..
Окрашенные пятна соскабливают, переносят в отдельные пробирки и в каждую из них добавляют 3 мл ДИФА. Со- держимое пробирок нагревают в кипящей водяной бане в течение 3 мин, охлаждают и переносят в кюветы толщиной слоя 1 см для спектрофотометрирования. Параллельно наносят на пластины силуфола по 0,03 мл стандартных растворов серотонина и гистамина и проводят те же манипуляции.
Для спектрофотометрирования контролем является опыт с соскобом сорбента. Измерение оптической плотности анализируемых проб и стандартных растворов проводят на фоне контроля при помощи спектрофотометра при
470 нм для серотонина и 465 нм для гистамина.
Расчет количественного содержания серотонина и гистамина в гомогенате ткани (в мкг/г ткани) проводят по формулам .
Д О 000261
Содержание серотонина =
Содержание гистамина
Д О 000363
Д где Д вЂ” оптическая плотность анализируемых растворов, Д вЂ” оптическая плотность стандартных растворов.
Получили результаты
Д cep. = 0,333.
Д сер. = 0,204.
Д,гист. = 0,469.
Д гист. = 0,046.
0i204 0 000261
-6
Содержание серотонина — - — — - — — — — — 159 89 -10 мкг/г.
0,333
0 046 0 000363
Содержание гистамина — 0 469 35,6 "10 мкг/г.
Пример 2. Количественное оп- наносят на пластины силуфола по ределение серотонина и гистамина в,0,04 мл стандартных растворов серокрови. Из пальца набирают 0,1 мл кро- тонина и гистамина. ви и переносят в пробирку с 0,2 мл Расчет количественного содержания 0,4 н.НС10 . Пробу центрифугируют в 5п серотонина и гистамина в крови прово течение 30 мин при 3000 об/мин. На дят по формулам
Д О 00003913 линию старта пластины силуфола нано- Содержание серотонина = - — - — — — --. сят 0,04 мл надосадочной жидкости и два пятна стандартных растворов Содержание гистамина
Д О 00005445 серотонина и гистамина. Дальнейшие 55 Получали результаты о операции те же, что в примере 1, за Д сер. = 0,140. исключением того, что используют 5Х Д сер. = 0,273 ный раствор аллоксана в ДИФА, нагре- Д гист. = 0,197. вают 5 мин при 105 С. Параллельно Д гист. = 0,193.
1290167
О 273-0 00003913 -в
Содержание серотонина = - --- — — — — — = 76,3 10, мкг/мп.
О, 140
О 193 Оа00005445
-с
Содержание гистамина
0,197
53,34. 10 мкг/мл.
П р и. м е р 3. Количественное определение серотонина и гистамина в гомогенате ткани проводят так же, как. в примере 1, но с использованием 47ного раствора аллоксана в ДИФА и вре1О мени нагревания 4 мин при 103 С.
Получали результаты
Д сер. = 0,330.
Д сер. = 0,202.
Д„гист. = 0,468..
Д гист. = 0,045.
О 202 О 000261 -6
Содержание серотонина
0,330
159 76 10 мкг/г.
Составитель Н. Гуляева
Техред Л.Сердюкова Корректор С.Шекмар
Редактор А:Ревин
Заказ 7893/39 Тираж 798 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, г ° Ужгород, ул. Проектная, 4
Од045 Од 0003 63 -6
Содержание гистамина — О 468 — 35,12 10 мкг/г.
f а и з о б р е т е н и я способа, пробу наносят на пластину с
Формула из о
Способ определения серотонина и силуфолом, проводят разделение серогистамина в ина в биологических объектах 20 тонина и гистамина тонкослойной хропутем о ра отки бработки биологической пробы матографией, пластины обрабатывают химическим реагентом и разделения 3-5Х-íûì раствором аллоксана в димесеротонина и гистамина с последующим тилформамиде, затем выдерживают спектрофотометрированием, о т л и ч а- 3-5 мин при 100-105 С, а проявленные и с я тем что с целью упро- 25 участки хроматограмм элюируют димещения и повышения чувствительности тилформамидом.
