Способ определения синдрома цилиарной дискинезии бронхов
Изобретение относится к функциональной диагностике в пульмонологии и позволяет осуществить дифференциацию органических и функциональных нарушений мерцательного эпителия у больных. Берут образец эпителия слизистой брон.хов и помещают его в 45%-ный глицерин в присутствии 20 ммоЛь фосфата натрия (рН 7,0) и 120 ММОЛЬ хлористого калия, инкубируют 24 ч при 4°С. Пермеаболизированный препарат помещают в реактивирующий буфер состава, 14моль: 120 фосфата натрия (рН 7,0), 120 хлористого калия, 5 хлористого магния, 5 АТФ, 2 мкг/мл тестикулярной гиалуронидазы. Частоту биения ресничек регистрируют методом фазово-конт растной микроскопии в 100 полях зрения . При наличии или отсутствии подвижности ресничек диагностируют функциональный или органический характер цилиарной дискинезии соответственно . с сл tvd 00 00 СП 00
СОКИ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
{su 4 С 01 Н 1/28,У
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ЮИьл к {i . Г; .
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3734488/28-14 (22) 03.05.84 (46) 07,02.87. Бюл. В 5 (71) Московский научно-исследовательский институт педиатрии и детской хирургии, МГУ им.M.Â.Ëoìîíoñoâà и
Институт иммунологии (72) Н.А.Шанина, В.И.Гельфанд, И.И.Дыханов, Н.Н.Розинова и С.Ю.Каганов (53) 615.475(088.8) (56) Pediatrics 1980, 65, 698-702. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СИНДРОМА
ЦИЛИАРНОИ ДИСКИНЕЗИИ БРОНХОВ (57) Изобретение относится к функциональной диагностике в пульмонологии и позволяет осуществить дифференциацию органических и функциональных нарушений мерцательного эпителия у
„„SU„„1288537 А 1 больных. Берут образец эпителия слизистой бронхов и помещают его в
451-ный глицерин в присутствии
20 ммоль фосфата натрия (рН 7,0) и 120 ммоль хлористого калия, инкубируют 24 ч при 4 С. Пермеаболизированный препарат помещают в реактивирующий буфер состава, ммоль: 120 фосфата натрия (рН 7,0), 120 хлористого калия, 5 хлористого магния, .
5 АТФ, 2 мкг/мл тестикулярной гиалуронидазы. Частоту биения ресничек регистрируют методом фазово-конт- растной микроскопии в 100 полях зре-. ния. При наличии или отсутствии подвижности ресничек диагностируют функциональный или органический характер цилиарной дискинезии соответственно.
1288537
Изобретение относится к медицине„ а именно к способам функциональной диагностики в пульмонологии, Цель изобретения — дифференциация органических и функциональных нару в 5 шений мерцательного эпителия у больного путем пермеаболизации мембран глицерином и реактивации образца
АТФ с последуюшим наблюдением за мерцательной активностью ресничек эпителия бронхов, Способ осуществляют следующим образом.
У больных с помощью щеточной биопсии отбирают образец эпителия слизистой бронхов и помещают его в
457-ный глицерин, содержащий 20 ммог:ь фосфата натрия (рН 7,0), 120 ммоль
КС1, инкубируют при 4 С в течение
24 ч. В результате инкубации у
20 мембран эпителиальных клеток появляется проницаемость для АТФ, который используется в качестве субстрата динеиновой АТФ-азой„ осуществля25 ющей механохимическое сопряжение в ре сничках.
Пермеаболизированный препарат помещают в реактивирующий буфер, содержащий, ммоль: фосфат натрия l20 (рН 7,0), КС1 120; NgCI 5 и АТФ 5, ЗО
В буфер добавляют тестикулярную гиалуронидазу (2 мкг/мл) для r-лдролиза вязких мукополисахарицов, препятствующих регистрации биения ресничек.
Реактивированный препарат наблю- . дают методом фазово-контрастной микроскопии„ регистрируя частоту биения ресничек в 100 полях зрения. В качестве контроля исследуют подвижность ресничек в биоптате не позднее, чем через 30 мин после отбора материала без пермеаболизации и реактивации, т.е. за счет эндогенного АТФ.
Отсутствие движения ресничек в конт45 рольном препарате и наличие его в реактивированном препарате свидетельствует о том, что в результате поражения не затронут двигательный аппарат ресничек, а отсутствие движения как при реактивации, так и в контроле свидетельствует о поражениях, затрагивающих динеин — тубулиновый комплекс, играющий ключевую роль в биении ресничек.
Пример 1. Больная М., 12 лет.
Клинический диагноз: кистозная гипоплазия верхней доли правого легкогo) хроническая пневмония, двусторонний гайморит. У ребенка постоянный кашель с отделением гнойной мокроты.
Над правым легким укорочение перкуторного звука, влажные хрипы. На ре тгенограмме груцной клетки отме; чено уменьшение объема правого легкого, полостные образования в области верхней доли. При бронхоскопии выявлен двусторонний гнойный эндобронхит.
При исследовании предлагаемым способом выявлены следующие нарушения функционального состояния мерцательного эпителия слизистой бронхов: клетки мерцательного эпителия контрольного препарата значительно мацерированы, большая часть их лишена ресничек или имеет неподвижные реснички, незначительная часть имеет подвижные реснички. В пермеаболизированном и реак:тивированном АТФ препарагах обнаружено также небольшое количество клеток с подвижными ресничками.
Ребенку назначают курс антибиотикотерапии, Проводят шесть бронхоскопических санаций. Состояние больной". улучшилось. Активность эндобронхиальных изменений уменьшалась. При повторном обследовании после проведенного лечения в контрольном и пермеаболизированном препаратах слизистой бронхов у больной выявлено
„уменьшение степени мацерации клеток мерцательного эпителия и значительное увеличение процента клеток с подвижными ресничками. Это свидетельствует о функциональном характере нарушения подвижности ресничек и возможности восстановления нарушенных функций при адекватной терапии.
Пример 2. Больная К., 9 лет.
Клинический диагноз: синдром Картагенера (обратное расположение органов, поражение легких, синусит). У ребенка кашель с отделением гнойной мокроты, одышка. Над легкими с обеих сторон обилие. влажных хрипов ° На рентгенограмме грудной клетки деформация легочного рисунка. В области верхней доли — слева — кистозные образования. Радиоизотопное исследова зз ние регионарной вентиляции с Хе выявило дефект заполнения в области нижних,прлей, смешанный тип вентиляционных расстройств с преимущественно рестриктивными изменениями в нижних
1288537
Формула из обре те ния
Составитель M. Позняк
Редактор А, Лишкина Техред Л.Олейник
Корректор В. Бутяга
Заказ 7798/39 Тираж 799 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, отделах. На бронхограмме правого . легкого — гипоплазия нижней доли с кистозными образованиями. При бронхоскопии обнаружен двусторонний гнойный эндобронхит. 5
При исследовании предлагаемым способом в контрольном и пермеаболизированном препаратах мерцательного эпителия бронхов обнаруживают клетки только с неподвижными ресничками, 10 что свидетельствует о наличии нарушений в двигательном аппарате ресничек.Назначают антибиотикотерапию,осуществляют санацию бронхиального дерева. Состояние ребенка несколько 15 улучшилось. Однако сохранились значительные физикальные изменения в легких, гнойный эндобронхит.
При повторном обследовании не об.— наружено восстановления подвижности 20 ресничек ни в контрольном, ни в пермеаболизированном препаратах. Данные исследования предлагаем.ам способом подтверждены электронно-микроскопическими исследованиями, выявившими 25 отсутствие динеиновых ручек в структуре аксонем ресничек. Наличие такого структурного дефекта определяет неподвижность ресничек, Таким образОм, необратимый характер изменений ультраструКтуры ресничек мерцательного эпителия обусловил стойкую цилиарную неподвижность органического характера, Это, очевидно, определяет тяжесть течения процесса, отсутствие выраженного эффекта терапии и свидетельствует о неблагоприятном прогнозе.
Способ определения синдрома цилиарной дискинезии бронхов путем микроскопического исследования биоптата их слизистой, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью дифференциации органических и функциональных нарушений мерцательного эпителия у больно го, биоптат пермеаболизируют глицерином в присутствии натрий-фосфатного буфера и хлористого калия, затем по" мещают его в буфер, содержащий хлористый калий, хлористый магний и тестикулярную гиалуронидазу, и при наличии или отсутствии подвижности ресничек определяют соответственно функциональный или органический характер цилиарной дискинезии.
