Способ приготовления монослоя эритроцитов

Авторы патента:

G01N33/52 - использование соединений или составов для колориметрического, спектрофотометрического или флуорометрического анализа, например реактивной бумаги

СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ МОНОСЛОЯ ЭРИТРОЦИТОВ путем предварительной обработки твердофазного носите- : ля агентом, связывающим эритроциты, от.личающийся тем, что, с целью упрощения: способа и увеличения плотности монослоя и стабильности , в качестве связывающего агента используют фитогемагглютинин.

COl03 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК ((9) (11) (51) 4 01

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ /

К АВТОРСКОМ У СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3743406/28-14 (22) 25.05.84 (46) 30.09.85. Бюл. Ф 36 (72) Д.Ю. Плаксин (71) Пермский государственнь|й медицинский институт (53) 611-018.51(088.8) (56) Потаинев и др. Иммунология, 1983, 6, 61-65.

Dosch Н.M. et а1. Jmmuno1ogy, 1979, 43, 283-29 2.

Kennedy 3.С. et а1. Jmmuno1ogy, 197 1, 20, 253-257 . (54) (57) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ МОНОСЛОЯ ЭРИТРОЦИТОВ путем предваритель" ной обработки твердофазного носите-, ля агентом, связывающим эритроциты, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и увеличения плотности монослоя и стабильности, в качестве связывающего агента используют фитогемагглютинин.

118240

Составитель М.Позник

Техред А. Кикемезей

Редактор А.Ленина

Корректор В.Синицкая

Заказ 6098/42

Тираж 896 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к иммуно-. логии и биофизике, и может бытьйспользовано в методах иммунологических исследований и для изучения 5 рецепторных функций биологических мембран.

Целью изобретения является упрощение,способа и увеличение плотности монослоя и стабильности. 10

Монослой эритроцитов готовят путем предварительной обработки твердофазного носителя фитогемагглютинина (ФГА), который физически сорбируют на его поверхности.. При 15 контакте сорбированного ФГА с взвесью эритроцитов происходит связывание эритроцитов в монослой на поверхности твердофазного носителя. ФГА формирует. монослой за счет 20 комплементарного взаимодействия с высокой степенью средства, что увеличивает плотность монослоя и его стабильность.

Пример. В лунки дакриловых 25 микрокамер микродозатором вносят по 12 мкл 0,5 мг/мл ФГА на забу ференном фосфатами О, 15 М растворе натрия хлорида с 0,02Х азидом натрия, рН 7,2-7,4 (ЗФР-NaN>) . После 1 ч 30 экспозиции при комнатной температуре микрокамеры отмывают от несвязавшегося со стенками лунок ФГА трехкратно сплошньпчи заливками ЗФР без азида натрия.

0,25 мл плотного осадка эритроцитов отмывают центрифугированием при 1000 об/мин по 10 мин в пяти объемах (по 12 мл) ЗФР. Из конечного осадка готовят 2;0,5 и 0,1Х .взвеси эритроцитов в ЗФР. Готовые взвеси отмытых эритроцитов в объеме

20 мкм вносят в лунки отмытых миквЂ” рокамер с сорбированным ФГА либо производят сплошную заливку микрокамер 10 мл взвесей. Микрокамеры инкубируют в горизонтальном положео нии при 37 С либо при комнатной

1 2 температуре 30 или 60 мин. Несвязавшиеся эритроциты отмывают сплошными заливками 4-5 порций ЗФР по

10 мп и качатепьными движениями камер в горизонтальной плоскости. ЗФР, удерживающийся в лунках при верти- . кальном положении микрокамер за счет сил поверхностного натяжения, удаляют однократным стряхиванием микрокамер в перевернутом положении.

Плотность монослоев оценивают под световым микроскопом при увеличении 160. Эритроциты выстилают плоское дно и наклонные стенки лунок сплошным монослоем. Участки разрежения отсутствуют. После седиментации 2Х взвесей эритроцитов в течение 30 и 60 мин и 0,5Х. взвесей в течение 60 мин в монослое наблюдают плотно упакованные эритроциты тетра, пента, и гексаэдрической формы . и эритроциты, фиксированные минимумом своей поверхности и располагающиеся в монослое в виде вертикально стоящих дисков, что в поле зрения проявляется в наличии палочкообразных и гантелеобразных структур. В целом внешний вид монослоя вследствие его большой плотности напоминает картину "булыжной мостовой", что не хара кт ер но для моно сло ев, и олуча емых при помощи органических поликатионов.

Монослои, получаемые согласно предлагаемому способу, стабильны (морфологическая однородность, отсутствие зон спонтанного гемолиза) при хранении под ЗФР без консервано та при 4 С в течение минимум трех суток, в то время как в прототипе сроки сохранности монослоев ограничены одними сутками. Сам способ более доступен и прост в осуществлении, Вместо мало доступных и дорогих импортных препаратов поликатионов используют коммерческий препарат

ФГА, выпускаемый серийно отечественной промышленностью.

Способ приготовления монослоя эритроцитов

Способ приготовления гистологического препарата ткани печени // 1119983

Способ получения окрашенного субстрата для определения целлюлазной активности // 1056055

Перхлораты пиримидо [1,2-а] бензимидазолия в качестве флуоресцентных красителей растительных тканей и микроорганизмов // 1051091

Способ определения трофической активности планктонных организмов // 1029079

Способ индикации микроколичеств липидов // 991304

Способ определения суммарного количества отрицательно заряженных фосфолипидов // 907434

Способ количественного определения свободной и связанной нейраминовой кислоты в биологической пробе // 898326

Способ определения аминогликозидных антибиотиков в биологических жидкостях // 892278

Способ количественного определения карбидина // 890250

Способ определения антиоксидантной активности плазмы крови // 2102757

Способ дифференциальной диагностики гемморрагической лихорадки с почечным синдромом от острых распираторных вирусных инфекций и воспалительных заболеваний почек // 2104540

Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии и инфекционным болезням

Способ прогнозирования острого инфаркта миокарда // 2105981

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и предназначено для прогнозирования течения инфаркта миокарда

Способ определения влияния со*002 на генерацию супероксидного анион-радикала фагоцитами // 2108572

Изобретение относится к медицине и касается исследования влияния CO2 на генерацию супероксидного анионрадикала фагоцитами

Способ определения степени магниточувствительности человека // 2108581

Изобретение относится к медицине, в частности, к гигиене, может быть использовано для определения индивидуальной магниточувствительности человека при профотборе

Способ определения естественной киллерной активности лимфоцитов человека в условиях гипербарии // 2109288

Изобретение относится к области водолазной медицины и физиологии подводных погружений и может быть использовано для определения влияния факторов гипербарии (величины общего давления, вида используемой газовой смеси, типа водолазного спуска, параметров микроклимата в гипербарических комплексах и т.д.) на естественную киллерную активность лимфоцитов крови водолазов

Способ диагностики перинатальных нефропатий на стадии предболезни // 2110799

Способ определения бактериальных липополисахаридов // 2114436

Изобретение относится к медицине, а именно к способам количественного определения бактериальных липополисахаридов в процессе производства медицинских иммунобиологических препаратов

Способ обнаружения идентификации и/или количественной оценки материала, набор для анализа, оптический волновод, биосенсор // 2116349

Изобретение относится к генной инженерии, а именно к способу проведения анализов с помощью генных зондов и с использованием биосенсора, включающего детектор затухания колебаний

Способ определения количества бактерий в биопрепарате // 2117291

Изобретение относится к способам исследования биологических материалов с использованием соединений или составов для колориметрического, спектрофотометрического или флуорометрического анализа, в частности к способам определения количества бактерий в биопрепаратах, и может быть использовано в медицинской микробиологии и микробиологической промышленности