Способ подготовки бактериальных культур сальмонелл для выявления энтеротоксина
Изобретение относится к биохимии . Цель изобретения - ускорение способа при одновременном повышении чувствительности анализа. Бактериальные культуры сальмонелл вьфащивают в любой идкой питательной среде. Полученные суспензии сальмонелл центрифугируют , супернатант сливают. К L осадку бактериальной культуры добавляют 0,5 мл дистиллированной воды. Осадок ресуспендируют и переносят в пробирки, к осадку добавляют полимиксин. Затем смесь инкубируют и к ней прибавляют тритон. Пробы вновь инкубируют , а полученные лизаты центрифугируют , В супернатанте определяют наличие энтеротоксина в различных разведениях. i СЛ
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИН.
А1 (19) (И) д)) 4 G 01 N 33/53, 33/68
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н А BTOPCKOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3868601/28-14 (.22) 01.04.85 (46) 07.09.86. Бюл. ¹ 33 (71) Научно-исследовательский институт морфологии человека АМН СССР (72) Ф.С.Флуер, Ю.Г.Пархоменко и И.Н.Емельяненко (53) 616.07(088.8) (56) Houston С.W., Koo F.С.W., Peterson J.W. Characterization of
salmonella toxin releated sy mitomycin С-Тreated cells. Хпйее . Immun., 1981, 32, 2, р. 916-926. (54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КУЛЬТУР САЛЬМОНЕЛЛ ДЛЯ ВЬИВЛЕНИЯ
ЭЦТЕРОТОКСИНА (57) Изобретение относится к биохимии. Цель изобретения — ускорение способа при одновременном повьппении чувствительности анализа. Бактериальные культуры сальмонелл вырашивают в любой жидкой питательной среде. Полученные суспеизии сальмонелл центрифугируют, супернатант сливают. К; осадку бактериальной культуры добавляют 0 5 мл дистиллированной воды.
Осадок ресуспендируют и переносят в пробирки, к осадку добавляют полимиксин. Затем смесь инкубируют и к ней прибавляют тритон. Пробы вновь инкубируют, а полученные лизаты центрифугируют. В супернатанте определяют наличие энтеротоксина в различных разведениях.
1 255935
Фор мула из обретения
Составитель H. Хрусталева
Техред Л.Сердюкова Корректор И. Муска.
Редактор Н. Рогулич
Заказ 4816/44
Тираж 778
Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035., Москва, Ж-35 Раушская наб., д. 4/5
Производственно"полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная. 4
Изобретение относится к медицине, в частности к инфекционной патологии, а именно к биохическому способу подготовки бактериальных культур с целью их быстрого лизирования для выделения энтеротоксинов и других внутриклеточных субстанций.
Цель изобретения — ускорение способа при одновременном повьш1ении чувствительности анализа. К осадку сальмонелл добавляют дистиллированную воду, полимиксин B в конечной концентрации 2,0-2,5 мг/мл, инкубируют смеси при физиологических условиях втечение 1,0-1,5 ч и добавляют три в 15 тон X-405 в конечной концентрации
0,14-0,01%.
Пример 1. Бактериальные. культуры, сальмонелл (штамм S.typhimurium 415), выращивают в любой 20 жидкой питательной среде в объеме
10 мл в пробирках емкостью 40-50 мл в течение 24-30 ч при постоянном встряхивании из шуттель-аппарата при 210 об/мин и 37 С. Далее полученные суспензии сальмонелл центрифугируют при 8000 об/мин в течение
i5-20 мин. Супернатант сливают, а к осадку бактериальной культурЫ добавляют 0 5 мл дистиллированной Зп воды, осадок ресуспендируют и переносят в конические агглютинационные пробирки. К осадку добавляют полимиксин в концентрации 2,0 мг/мл..
Затем ставят инкубировать смесь на
i 0-1,5 ч в термостат при 37 С и после инкубации добавляют к пробам тритон Х-405 в конечной концентрации
0,1.1%. Пробы вновь инкубируют при 37 С
15-20 мин, полученные лизаты центрифугируют, супернатант осторожно отса) сыйают и исследуют на наличие энтеротоксина в различных разведениях. Для испытуемого штамма энтеротоксин при указанных параметрах режимов выявлялся в разведении 1:4 и по степени ре" акции оценивался на 1 крест.
Пример 2. Исследуют культуру сальмонелл того же штамма описанным способом, но концентрация добавляемого полимиксина B составляет
2,5 мг/мл, а тритона Х-405 0,09%.
При данных параметрах режимов энтеротоксин выявлялся в разведении 1:4.
Степень реакции оценивают на 2 креста.
Способ подготовки бактериальных культур сальмонелл для выявления энтеротоксина путем выращивания их в жидких средах, центрифугирования и воздействия на полученный осадок повреждающим агентом, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью ускорения способа при одновременном повышении чувствительности анализа, к осадку добавляют дистиллированную воду, затем полимиксин В в конечной концентрации 2,0-2,5 мг/мл, далее пробы инкубируют при физиологических условиях в течение 1,0-1,5 ч, добавляют тритон X-405 в конечной концентрации 0,1+0,01%, вновь инкубируют, центрифугируют, а энтеротоксин выявляют в супернатанте.
