Способ определения авидности антител

 

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для определения авидности антител в различных иммунных сыворотках. Цель изобретения - ускорение и упрощение способа за счет определения двух основных признаков авидности антител: скорости и полноты связывания одновременно . Проводят реакцию непрямой иммунофлуоресценции с иммунными сыворотками на предметных стеклах с мазками из тестштамма бактерий. Результат учитывают с помощью микрофлуометрии. Скорость связывания антител с антигеном определяют как процент интенсивности свечения на 1,3 и 5-й мин к 20-й мин протекания реакции, а полноту связывания - как интенсивность свечения в милливольтах на 20-й мин. 1 табл. N9 сд оо

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1245313

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ i3 „

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3776823/28-14 (22) 18.07.84. (46) 23.07.86. Бюл. № 27 (71) Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт (72) О. И. Быкова, И. И. Черченко и В. В. Алексеев (53) 615.373 (088.8) (56) Бунин К. В., Фирсанов В. И.,Парфенова Н. И., Кравцов Э. Г., Нечаева И. П. Изучение авидности специфических антител в сыворотках крови больных холерой и вибриононосителей.— Микробиология, эпидемиология и иммунобиология, 1976, № 9, 70 — 74. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АВИДНОСТИ АНТИТЕЛ (5в 4 А 61 К 39 00 G О! N 33 53 (57) Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для определения авидности антител в различных иммунных сыворотках. Цель изобретения — ускорение и упрощение способа за счет определения двух основных признаков авидности антител: скорости и полноты связывания одновременно. Проводят реакцию непрямой иммунофлуоресценции с иммунными сыворотками на предметных стеклах с мазками из тестштамма бактерий. Результат учитывают с помощью микрофлуометрии. Скорость связывания антител с антигеном определяют как процент интенсивности свечения на 1,3 и 5-й мин к 20-й мин протекания реакции, а полноту связывания — как интенсивность свечения в милливольтах на 20-й мин. 1 табл.

1245313

Формула изобретения

Составитель M. Васильев

Редактор С. Патрушева Техред И. Верес Корректор Г. Решетник

Заказ 3937/3 Тираж 660 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, y :. Проектная, 4

Изобретение относится к имм унологии и может быть использовано для определения авидности антител в различных иммунных сыворотках.

Цель изобретения — ускорение и упро5 щение способа за счет определения двух основных признаков авидности антител: скорости и полноты связывания одновременно одним методом.

Способ осуществляется следующим образом.

Проводят реакцию непрямой иммунофлуоресценции с иммунными сыворотками на предметных стеклах с мазками из тестштамма бактерий, при этом результат реакции учитывают микрофлуорометрией.

Скорость связывания антител с антигеном определяют как процент интенсивности свечения на 1,3, 5-й мин к 20-й мин протекания реакции, а полноту связывания — как интенсивность свечения в милливольтах на 20-й мин. 20

Пример 1. Сравнение авидности антител в трех мелиоидозных гипериммунных сыворотках.

Готовят мазки из взвеси типичного мелиоидозного штамма с концентрацией 10" мелиоидозных тел в 1 мл. Исследуемые сыворотки (А, Б, Б) в рабочем разведении наносят на мазки и инкубируют ках<дую

1, 3, 5 и 20 мин на отдельном мазке (стекле).

Промываюг препараты и наносят HB них люминесцирующую сыворотку против иммуноглобулинов того вида, от которого получены гипериммунные сыворотки, в соответствующем рабочем разведении. Инкубируют

20 мин и промывают. Препараты микроскопируют и измеряют интенсивность свечения с помощью микрофлуорометрии с применением фотонасадки и люминесцентного мик35 роскопа, интенсивность вырах<ают в милливольтах выходного напряжения фотоумножителя. Подсчитывают процент интенсивности свечения на 1, 3 и 5-й мин к 20-й мин и анализируют полученные результаты (см. таблицу).

Иммунные Процент интенсивности Интенсивность сыворотки свечения к 20-й мин на: свечения на

--20 мин, мВ

1 мин 3 мин 5 мин 20 мин

Л 42 77 93 100 310

Б 32 61 84 100 280

В 30 46 61 100 260

Процент нарастания интенсивности свечения характеризует скорость связывания антиген антителами, а абсолютная величина ее на 20-й мин — полноту связывания.

По этим критериям авидность антител в гипериммунной мелиоидозной сыворотке А наивысшая.

Таким образом, способ позволяет ускорить определение авидности антител в 3 — 4 раза по сравнению с известным способом и упростить его за счет определения двух параметров авидности не в двух отдельных опытах (по известному способу), а в одном.

Способ определения авидности антител путем взаимодействия антител с антигеном с последующим учетом результатов реакции, отличаюи4ийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, учет реакции осуществляют с помощью микрофлуорометрии в реакции непрямой иммунофлуоресценции и определяют интенсивность свечения, при этом скорость связывания определяют как процент интенсивности свечения на 1, 3, 5-й мин к 20-й мин, а полноту связывания — как интенсивность свечения на 20-й мин.