ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3719557/28-13 (22) 03.04.84 (46) 23.06.86. Бнхп. У 23 (71) Научно-производственное объединение "Фермент" (72) П.Д. Валанчюс, Ю.Ф. Василяускас, Ю.П. Норейкене, В.В. Масалене, В.С. Яшкене, З.А. Юшкайте иА.Ю. Ва" лицкас (53) 577.15(088.8) (Se) Авторское свидетельство СССР

В 990812, кл. С 12 N 9/32, 1983.

Технологический проьыиленный регламент по производству ферментного препарата амилосубтилина .ГЗх-1, 1979.

„„SU„„12 9146 А 1 (5g 4 С 12 N 9/28, 9/32, 1/20 // (С 12 N 9/28 С 12 К i:125) (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ АМИЛАЗ путем глубинного культивирования Bacillus:subtilis в лсидкой питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли, с последующим введением углеродистого вещества, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и стабильности амилолитической активности, после введения углеродистого вещества и пое ингения баллинга до 15,0-14,0 дополнительно в ферментирующую среду вводят смесь кукурузного экстракта и хлористого кальция s соотношении 10:1 д при количестве кукурузного экстракта 0,6-1,8 об.X.

1 123

Изобретение относится к промышленной микробиологии, а именно к технологии получения бактериального ферментного препарата амилосубтилина, применяемого в животноводстве, пищевой и легкой промышленности.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта и стабильности амилолитической активности

B процессе культивирования продуцентов Bacillus subtilis.

Для получения бактериальных амилаз путем глубинного культивирования бактерий рода Bacillus в жидкой питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральных солей, с последующей подкормкой улеродистым веществом после понижения баллинга до 15,0-14,0 проводят вторую дополО нительную подкормку культуральной жидкости азотным веществом и минеральной солью в соотношении 10:1 при количестве азотистого вещества 0,61,8 об., причем в качестве азотистого вещества используют кукурузный экстракт, а в качестве минеральной соли хлористый кальций.

Пример 1. В расчете на 1 м культуральной жидкости и в соотношении 10:1 кукурузного экстракта и хлористого кальция кукурузный экстракт в количестве 0,6 об.X в 50 л подогре,той до 50 С водопроводной воды суспендируют 6 кг жидкого кукурузного экстракта, содержащего 507. сухих веществ. Взвешивают 600 г хлористого кальция, растворяют в 2 л водопроводной воды и при перемешивании сливают в суспендированный кукурузный экстракт. рН смеси кукурузного экстракта и хлористого кальция доводят до 6 5+

+0,1, перемешивая с 20%-ным раствором едкого натрия (в 200 r NaOH до-. бавляют 0,8 л водопроводной воды).

Объем смеси водопроводной воды доводят до 60 л. Приготовленный раствор передают в сатиллит и стерилиэуют

30 мин:при 135"С. После этого раствор охлаждают до 37+1 С и подают в ферментер в процессе культивирования

9146 2 после окончания. подкормки крахмалом о и понижении баллинга до 15,0-14,0

Продолжительность ферментации 65 ч, амилолитическая активность 2800 Бер/мл.

Выход 100X.

Пример 2. Проводят аналогично примеру 1 при соотношении 10:1 кукурузного экстракта и хлористого кальция (количество кукурузного экст1Î ракта l,2 об.7). Активность амилазы достигает 2910 Бер/мл. Продолжительность ферментации 68 ч. Выход 1007.

Пример 3. Проводят аналогич15 но примеру 1 при соотношении 10:1 кукурузного экстракта и хлористого кальция (количество кукурузного экстракта 1,8 об. ). Активность Ы.-амилазы 3000 Бер/мл. Продолжительность б ферментации 70 ч. Выход 100 .

В табл. 1 приведены данные, обосновывающие выбор соотношения и объема дополнительно вводимых кукурузного экстракта и хлористого кальция в

25 процессе ферментации в среду культивирования.

Из табл. 1 следует, что оптимальным соотношением кукурузного экстракта и хлористого кальция является

10:1 и концентрация .азотного вещества 0,6 вЂ” 1,8 об.%, что предотвращает резкие падения амилолитической активности в процессе ферментации.

В табл. 2 приведены сравнительные данные выхода целевого продукта (бактериальной амилазы) по предлагаемому и известному способам.

Таким образом, введение второй

4 дополнительной подкормки при пониже46 о нии баллинга до 15,0-14,0, в качестве которой используют смесь азотного вещества (кукурузного экстракта) и минеральной соли (хлористого каль„. ция) в соотношении 10:1 в количестве

0,6 вЂ” 1,8 об,7., способствует повьппению стабильности амилолитической ак° ° ивности в процессе культивирования ас. subtilis и позволяет получить

1007-ный выход целевого продукта..1 239146 4

Таблица 1

КоличестСредняя амилолитическая активКукурузный

КоличестСоотношение кукурузного экстракта и хлористого кальция во падений амиэкство ракт, об.Х лолитической ак опыность (АА), Бер/мл тов

12:1

4; 1

0,4

0,6

12:1

12! 1

1,0

2315 +

2025 х.

2310 +

1980 м

12:1

2,0 . 7

12:1

10:1

0,4

2256 +

1880 <

10:1

2362

10:1

2374

10:1

2378

10:1

2385

7,5:1

2115 +

1850 х.

7,5:1

2075

2089

7,5:1

2167

2175

7,5:1.

Контроль

2256 +

1504 +

П р и м е ч а н и е. + вЂ” средняя АА без учета резкого падения;

+ вЂ” средняя АА с учетом резкого падения.

0,6 10

1,0 10

1,8 10

2,0 10

0,4 8

0,6 10

1,0 10

1.,8 10

2,0 10 тивности (АА) в проведенных опы тах

2260 +

1695 к

2271 +

1892

2242 +

1793

1239146

Таблица 2

Способ получения

КоличестВыход, Ж

Предлагаемый

Известный*

150 3128 469200 100

150 2821 423218 90,2

10 Проведено 10 ферментаций, в одной из них отмечено падение активности о -амилазы. Таким образом, 15 м культуральной жидкости Вас. subtilis из всего полученных 150 м непригодно для получения ферментных препаратов амилосубтилина Г3х и

Г10х.

Составитель В. Соина

Техред Н.Бонкало

Редактор Н. Егорова

Корректор N Демчик

Заказ 3354/21 Тираж 490

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Количество ферментаций во культуральной жидкости

Вас.