Способ исследования структуры гемоглобина

 

Изобретение позволяет повысить точность исследования структуры гемоглобина за счет увеличения степени обогащения гемоглобина изотопом, для чего производят анемизацию животного 3-5-кратным кровопусканием в размере 3-7% от общего объема циркулирующей крови в зависимости от состояния животного по одному разу в сут, а инъекцию фруктозного раствора изотопа (хлорида Fe) производят один раз в двое сут 6-кратно в дозе 2,4 мл/кг веса. IN9 оо со ч ел

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИ<ЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ

Н АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3641323/28-14 (22) 08.04.83 (46) 15.06.86. Бюл. В 22 (71) Научно-исследовательский институт ядерной физики при Томском политехническом институте (72) H.Ï.Äèäeíêî, Е.М.Чуприкова, В.М.Перельмутер и M.Ë.Ñåäîêîâà (53) 616.07 (088.8) (56) Qonser U. et aI. -AppT. Phys

Letter, 1963, 3, с. 189. (54) СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРЫ

ГЕМОГЛОБИНА

„„SU„„3 237975 А 1 (57) Изобретение позволяет повысить точность исследования структуры гемоглобина за счет увеличения степени обогащения гемоглобина изотопом, для чего производят анемизацию животного

3-5-кратным кровопусканием в размере 3-7Е от общего объема циркулирующей крови в зависимости от состояния животного по одному разу в сут, а инъекцию фруктозного раствора изотопа (хлорида Fe) производят один раз в двое сут б-кратно в дозе 2,4 мл/кг веса.

10

ll5

2О

Ф 12

Изобретение относится к экспериментальной медицине.

Целью изобретения является повышение точности способе за счет увеличения степени обогащения гемоглобина изотопом.

Способ осуществляют следующим образом.

Анемизацию животного производят

3-5-кратным кровопусканием в размере 3-7% от общего объема циркулирующей крови в зависимости от состояния животного по одному разу в сут, а инъекцию фруктозного раствора хлорида Fe производят один

57 раз в двое сут в количестве 6 инъекций °

П р и м е p . Берут две группы, белых лабораторных беспородных крыс по четыре животных несом 200-250 г.

Контрольную группу обогащают в соответствии со способом — г,рототипом. Перед началом эксперимента определяют коицентрац по НЬ в крови по Сали г%:14,4; 14,2; 13,2; 12,6.

На первьп, второй H третий день эксперимента животным вводят 3% †и раствор фенилгидразина по 0,3 мл, на четвертый и пятый день — отдых, Содержание НЬ на шестой день составляет)г%: 9,8; )0 0; 8 8", 8,2. С шестого по двадцать девятый день эксперимента живо гпььм вводят 0,05 М раствор FeCI, о фруктозе по

0,6 мл ежед свпо. Il;, тридцатый день зкспериме ITQ жи",o гпых ЭHGI!в:.вот декапитацией, Опытную группу Обогаща|от в соответствии с предлагаемым способом.

Концентрация НЬ II крови перед началом эксперймента составляет, г7.: 12,8;

16 0; 15 4; 14 0. С первого по пятый день эксперимент»: кровопускание иэ хВОстОВОЙ вены по 0,5-2,0 мл за Один раз в зависимости От исходного веса животного, т.е. по 3-77. от общего объема циркулирующей крови. После трех хровопускапий у первой крысы уровень НЬ снижается до 9,8 г 7., после четырех кровопусканий у первой и третьей — 9,2 r 7. и 10,0 г 7. соответственно, после пяти кровопусканий г7.: 8,8; 9,8; 9,6; 9,8. На шестой восьмой, десятый, двенадцатый, четырнадцатый и шестнадцатый дни эксперимента проводят внутримышечные инъекции фруктозного раствора FeCI по 0,6 мл на каждое животное (2,4 мл/кг веса). На тридцатый

37975 2 от начала эксперимента (25 день от начала инъекции) животных забивают декапитацией.

Из крови животных опытной и контрольной групп готовят образцы сухоro гемоглобина следующим образом.

Кровь с антикоагулянтом центрифугируют 10 мин по 3 тыс. об/мин.

Суперйатант удаляют с помощью водоструйного насоса, осадок эритро" цитов промывают 0,97-ным раство ром NaCI, центрифугируют при

3 тыс. об/мин. Супернатант удаляют.

Операцию повторяют трижды. Отмытые эритроциты гемолизируют 3 объемами дистиллированной воды. Выдерживают на холоде 6-8 ч. Гемолизат центрифугируют 1 ч при 18 тыс об/мин и

4 С для: отделения стромы. Супернатант (р-р гемоглобина) сливают и высушивают. Полученный сухой гемоглобин развешг1вают по кюветам, снимают

Мессбауэровский спектр. Обогащение

Образцов ПЬз полученных От жиВОтных контрольной группы, определен,ное по величине эффекта Мессбауэра, составляет, i: 29,1, 28,1, 29,4, .29,9, т.е. 29 I + 0,9.

Обогащение образцов НЬ от животных опытной группы,%: 28,9, 29„2, ?9,4, 29,0, т.е. 29,1 + 0,4.

Результаты испытаний.

57

Расход Fe в опьггль:=. гр ппах

41,04 мг па группу; в контрольных группах 164,16 мг на группу.

Обогащение образцов Hb, Определенное по величине эффекта Ыессбауэра: в опытных группах 29,1+

+ 0,4%; н контрольных группах 29,1+

+ 0,9%.

Таким образом, обогащение живот57 ных изотопом Ге в соответствии с предлагаемым способом повышает эффективность использования изотопа по сравне ио с прототипом в 4 раза.

Способ позволяет получать Hb содержащий по сравнению с природным белком в 13-18 раз больше мессбауэ5Т ровского изотопа Fe, не подвергая при этом нарушению нативную структуру белка. Повьш ение содержа— ния Ге приводит к сокращению

5 времени снятия спектра с 80 часов до 15-20 мин и делает возможным изучение конформационных перестроек в белковой молекуле методом -резонансной спектроско1тии.

Составитель М.Позняк

Техред М.Ходанич

Корректор E..Сирохман

Редактор Н.Горват

Заказ 3282/44

Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

ll3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная,4

3 12379 .Формула изобретения

Способ исследования структуры гемоглобина путем выделения гемоглобина из крови анемизированных живот5 ных, обогащенной изотопом Ре при помощи инъекций фруктозного раствоЭч ра - FeCI с последующим воздействием на гемоглобин миллиметровых волн, отличающийся тем, 75 4 что, а целью повышения точности споI соба за счет увеличения степени обогащения гемоглобина изотопом, анемизацию животных проводят 3-5-кратным кровопусканием в размере 3-7Х от общего объема циркулирующей крови, а инъекции фруктозного раствора изо" тона .проводят в дозе 2,4 мл/кг массы 6-кратно с периодом в двое сут.