Способ определения активности @ -нафтилацетатэстеразы

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ Р -НАФТИЛАЦЕТАТЭСТЕРАЗЫ путем инкубации содержащего фермент материала с -нафтилацетатом и последующего определения окращенного продукта реакции, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа при определении активности в желудочном соке, в качестве содержащего фермент материала используют отфильтрованные порции желудочного сока - базальную и при стимуляции секреции гистамином или пентагастрином, максимальную инкубацию проводят при рН 6,6 и температуре 37°С, а оптическую плотность определяют при 328 нм.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

«< ф

6

I.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3592338/28-14 (22) 18.05.83 (46) 30.08.85. Бюл. № 32 (72) П. А. Канищев, Н. М. Береза и М. П. Фучеджи (53) 543.666+ 616.33-088.8 (088.8) (56) Лизосомы. Методы исследования. Сбор ник п/р Дн. Дингла, М.: Мир, 1980, с. 38 — 43 (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ Р -НАФТИЛАЦЕТАТЭСТЕРА3bl путем инкубации содержащего фермент

„„Я0„„1175441 А (51)4 А 61 В 10/00, G 01 N 33/48 материала с р -нафтилацетатом и последующего определения окращенного продукта реакции, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа при определении активности в желудочном соке, в качестве содержащего фермент материала используют отфильтрованные порции желудочного сока — базальную и при стимуляции секреции гистамином или пентагастрином, максимальную инкубацию проводят при рН 6,6 и температуре 37 С, а оптическую плотность определяют при 328 нм.

1175441

Составитель Н. Гуляева

Техред И. Верес Корректор А. Тяско

Тираж 722 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретении и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Редактор Н. Швыдкая

Заказ 5245/4

Изобретение относится к медицине, а именно к способам исследования желудочного сока.

Целью изобретения является повышение точности способа при определении активности в желудочном соке.

Пример. Больной М., мужчина 35 лет, находившийся в клинике заболеваний желудка по поводу язвенной болезни, утром натощак подвергнут желудочному зондированию под контролем рентгеноскопии. Порцию желудочного сока натощак отсосали в течение 10 мин шприцом и выбросили. Затем в течение 1 ч собрали, постоянно отсасывая шприцом, порцию базального сока. Подкожно ввели гистамин гидрохлорид 0,1%-ный раствор из расчета 0,025 мг сухого вещества на 1 кг массы больного (1,75 мл) . После стимуляции секреции гистамином снова шприцом отсосали в течение 1 ч максимальную порцию желудочного сока. Таким образом, получили 100 мл базальной порции и

110 мл максимальной порции сока. Отдельно каждую порцию профильтровали через бумажный фильтр «синяя лента» и поставили в холодильник.

Приступили к изготовлению субстрата, для чего взвесили на аналитических весах

2 мг очищенного бета-нефтилацетата, растворили его в 2 мл ацетона и довели фосфатным буфером до 10 мл. Фосфатный буфер для этого приготовили из 18 5 мл 0 2 М

МахНР04х12 НаО и 81,5 мл 0,2 М ХааРО4 X

X 2НвО и 100 мл дистиллированной воды.

В кювету с 3 мл раствора бета-нафтилацетата прилили 0,2 мл базальной порции желудочного сока больного, рН смеси 6,6.

Смесь осветили при длине волны спектрофотометра 328 нм. Прибор настроили на «О». Затем кювету со смесью поместили на водяную баню инкубации при 37 С на

5 мин по секундомеру. После инкубации определили экстинкцию смеси на спектрофотометре при длине волны 328 нм. По калибровочной рабочей таблице, построеной по бета-нафтолу, определили, что экстинкции пробы базальной порции сока 0,057 соответствует концентрации бета-нафтола 0,3566 X

Х 10 MMQJlb/MJI. Подставив в формулу чис4 ловые значения, вычисляют в-нафтилацетатэстеразную активность каждой порции сока сУ4

Vg t10 где А-B -нафтилацетатэстеразная активность желудочного сока в бетанафтоловых единицах (lб-н.е. =

-з

= 10 ммоль бета-нафтола, образовавшегося под действием

1 мл желудочного сока за 1 мин)

C — концентрация образовавшегося бета-нафтола в ммоль/мл, соответствующая по рабочей таблице экстинкции опытной пробы

10 желудочного сока;

Ч1 — объем смеси, мл (3,2 мл);

V — объем порции (максимальной или базальной) желудочного сока, мл; тз — объем пробы желудочного сока, мл (0,2 мл); — время инкубации (5 мин).

При низкой активности 13-нафтилацетатэстеразы в желудочном соке опыт повторяют с удлинением времени инкубации.

Подставив в формулу числовые значения букв, вычислили,р,-нафтилацетатэстеразную активность этой порции сока

А 0 3566.10 4-3 2-100

02 5 10з

Следовательно р -нафтилацетатэстеразная активность базальной порции желудочного сока у больного М. равна 11,41 б.-н.е.

Параллельно с базальной исследовали также максимальную порцию сока. Экстинкция максимальной порции сока была 0,180; концентрация бета-нафтола по рабочей таблице — 1,13 — 10 4 ммоль/мл. Вычислили по той же формуле в -нафтилацетатэстеразеактивность максимальной порции сока

1 13 10 4 32 110

= МЯфи, Сопоставив с показателями в -нафтилаце40 татэстеразы активности желудочного сока у здоровых лиц, видим, что у больного М. активность р-нафтилацетатэстеразы в обеих порциях желудочного сока значительно превосходит средние цифры нормы, причем после стимуляции имеет место резкое по45 вышение р -нафтилацетатэстерозной активности сока, что дает основание подтвердить диагноз язвенной болезни с повышением секреторной функции желудка.