Способ определения активности коллагеназы
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ КОЛЛАГЕНАЗЫ путем смешивания коллагеназы с предварительно подготовленным субстратом, инкубации реакционной смеси, остановки ферментативной реакции и определения степени гидролиза субстрата, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, п качестве субстрата используют стекловидное тело глаза, ферментативн то реакцию останавливают прогреванием реакционной смеси при 54-63 с в течение 10-20 мин, а о степени гвдролиза субстрата судят по скорости высыхания реакционной смеси, причем больша я скорость высыхания со ответствует большей сгепени гидролиза . СО с:
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН (19) (11) (51) 4
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ н автогеном свиДЕтЕльСТНу
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3578526/28-13 (22) 02,03.83 (46) !5.08.85. Бюл. № 30 (72) B.À. Агафонов и С.И.Анисимов . (53) 543.866(088 ° 8) (56) Shimizu И., Glimcher N.J., Travis D., Goldhaber P.-Rroc.exp.
biol. ¹ 4, 1969, v. 130, р, 1175.. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ КОЛЛАГЕНАЗЫ путем смешивания коллагеназы с предварительно подготовленным субстратом, инкубации реакционной смеси, остановки ферментативной реакции и определения степени гидролиза субстрата, о т— л и ч а ю шийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве субстрата используют стекловидное тело глаза, ферментативную реакцию останавливают прогреванием реакционной смеси при 54-63 С в те-. чение 10-20 мин, а о степени гндро— лиза субстрата судят по скорости высыхания реакционной смеси, причем большая скорость высыхания соответствует большей степени гидролиза.
I 1173317 2
Составитель Н. Гуляева
Редактор Л, Веселовская Техред Л.Микеш Корректор В. Гирняк
Заказ 5044/43 Тираж 897
В11ИГП1И Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
11 3035, М< <.кяа, Ж-35, Раушская наб,, д, 4/5
Подписное
Фплпа:i IT
Изобретение относится к биохимии а более конкретно к определению активности коллагенаэы, и может быть использовано в производстве коллагеназы, а также"в биохимических исследованиях.
Целью предложения является упрощение способа.
Пример. В стеклянные градуированные трубочки набирают по
0,05 мл стекловидного тела глаза кролика (для каждого измерения используют по три параллельные пробы).
В отмеренные объемы стекловидного тела с помощью микрошприца .вводят по 0,01 мл раствора коллагеназы (150 Ед/мг), содержащего фермент в различных количествах (0,15-0 мг).
Активность коллагеназы от пробы к пробе искусственно снижают от 22,5 до 0 Ед, замещая фермент эквивалентным количеством сывороточного альбумина путем смешивания растворов этих белков. В часть контрольных проб с интактным стекловидным телом вводят по 0,01 мл дистиллированной воды, в другую часть — раствор коллагенаэы, предварительно инактивированной нагреванием при 60 С в течение 15 мин, о
Все прббы инкубируют в термостате при 37 С в течение 30 мин. Реакцию о останавливают нагреванием проб прп б0 С в течение 15 мин, Далее пробы о стекловидного тела переносят в отдельные чашки Петри и распределяют на дн< в пределах окружности диаметром 15 мм. Чтобы избежать движений воздуха и неравномерной скорости испарения проб, чашки наполовину прикрывают крышками. Момент нанесения проб и момент их полного высыхания регистрируют. Высушивание проводят при 20-22 С. Активность коллао геназы определяют как отношение времени высыхания контрольных проб стекловидного тела ко времени вы<.ыхания проб с исследуемым ферментом и выражап т в относительных единицах, Известную активность коллагеназы, выраженную в Ед/мг, можно сопоставить с относительными единицами активности, полученными предлагаемым способом. Например, после обработки пробы стекловидного тела коллагенаэой, имеющей активность 10,5 Ед, ее, относительная активность равна
1,095..Поскольку между сравниваемыми величинами нет линейной зависи.— мости, то для удобства перевода относительных единиц активности исследуемых препаратов .коллагеназы в известные можно составить соответствующую номограмму.
