Способ активации лимфоцитов
СПОСОБ АКТИВАЦИИ ЛИМФОЦИТОВ путем вьщеления и культивирования мононуклеарных лейкоцитов с последующим внесением в среду культивирования активатора, отличающийся тем, что, с целью повьшения специфичности стимуляции, в качестве активатора используют плазминоген в дозе 5-100 мкг/мл культуры клеток, § (Л с
СООЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИН (!9) (II) SU (sl)4 G 0l !! 33/48 опислни изоБрят иия
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3571856/28-13 (22) 25.01.83 (46) 15.08.85. Бюл. Р 30 (72) E.Â. Барковский, В.А. Сятковский и В.Г. Цыганков (71) Минский ордена Трудового Красного Знамени государственный медицинский институт (53) 578.085.23(088.8) (56) Лимфоциты: выделение, фракционирование, характеристика. Под ред.
Натвич и др., M., "Медицина", 1980, с. 9-63. (54) (57) СПОСОБ АКТИВАЦИИ ЛИМФОЦИТОВ путем выделения и культивирования мононуклеарных лейкоцитов с последующим внесением в среду культивирования активатора, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью повышения специфичности стимуляции, в качестве активатора используют плазминоген в дозе 5-100 мкг/мл куль. туры клеток.
1173316
В качестве контроля служат клетки, к которым добавляют 5-100 мкл среды RPMI-1640. За 16 ч до конца культивирования в культуры вводят
2,0 мкКи Н-тимидина (удельная активность 20,6 мкКи/моль} . Через
72 ч после начала культивирования клетки обрабатывают холодной
57-ной трихлоруксусной кислотой и .нерастворимую фракцию (ДНК ) собирают на мембранных фильтрах.
45
Количество включенного в
ДНК Н вЂ” тимидина определяют с использованием толуольного сцинтиллятора ЖС вЂ” 106 на счетчике СБС-2.
Количественные данные о включении
Н-тимидина в ДНК лимфоцитов представляют собой среднее арифметическое измерений,в пяти параллельных 55 культурах и выражают в импульсах в минуту на 5.10 клеток. Данные представлены в табл. !.
Изобретенке относится к медицине, в частности к иммунологии
Целью изобретения является повышение специфичности стимуляции лимфоцитов путем использования плазмино- 5 гена в дозе 5-100 мкг/мл культуры клеток.
Способ, иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Исследование мито- 10
1енной активности стимуляторов в культуре лимфоцитов селезенки мышей.
Исходной клеточной популяцией является популяция клеток селезенки
6-8-недельных мьпйей С57В1. Выделе- !5 ние MoHQHуклеарных клеток (лимфоциты и моноциты) из селезенки мышей проводят путем центрифугирования отфильтрованного через нейлоновую сеточку гомогената на верографин-фико- 20 ле с плотностью 1,087 г/см при
400 8 в течение 30 мин.
Клетки (5 10 мп ) инкубируют при
37 С в 1 мл среды RPMI-!640, допол0 ненной 2 ммоль 2-глютамина, 25
3 10 моль 2-меркаптоэтанола, 100 ед/мл пенициллина и 10 мг/мл стрептомицина.
К I мл клеточной суспензии добавляют 5-10 мкл раствоРов стимуляторов,30 разведенных в среде RPMI-1640 (1 мг/мл).
Таблица!
Имп/мин
Стимулятор
Количество
Индекс стимуляции стимулятора, мкг
280+15,3
Контроль
Плазмино- .
5 863+40,9 3,1 ген
Фитогемагглютинин
20 665 41,2 2,4
В качестве контроля служат клетки, к которым добавляют 5-100 мкл среды RPMI-1640.
За 4 ч до конца культивирования в культуры вводят 2,0 мкКи Н-ти5 мидина (удельная активность
20,6 мКи/моль). Через 72 ч после начала культивирования клетки обрабатывают так же, как и в примере 1.
Пример 2, Исследование митогенной активности глу-плазминогена в культуре лимфоцитов периферической крови человека.
Исходной клеточной популяцией является популяция клеток периферической крови человека.
Дефибринизацию осуществляют при перемешивании 12 мл крови в пробирке, содержащей 25 стеклянных бусин диаметром- 2-4 мм. Дефибринированную кровь смешивают с равным объемом среды
RPMI-!640, 6-8 мл этой смеси наносят на поверхность 3 мл верографин-фикола в пробирках с внутренним диаметром
12-14 мм и центрифугируют при комнатной температуре 30 мин при 400
После центрифугирования клетки крови разцеляют на. две. фракции: белый слой, состоящий из мбнонуклеарных клеток на поверхности, и фракцию, содержащую эритроциты и гранулоциты на дне пробирки. Мононуклеарные клетки собирают пипеткой. Клетки (1,10 мл ) инкубируют при 37 С в 1 мл среды RPMI-1640, дополненной 2 ммоль Z-глютамина, -5
3110 моль 2-меркаптоэтанола, 100 ед/мл пенициллина и 10 мг/мл стрептомицина.
К I мл клеточной суспензии добавляют 5-100 мкМ раствора глу-плазминогена, разведенного на среде RPMI-1640 (1 мг/мл).
1173316 1
Продахгжеггие табл. 2
20 17521131
IO0 1437+!34
2,0
1,6
Время . культивиров ания, ч ля72
0 874+97
1 021 89
1,2
Составитель М. Серова
Редактор Л. Веселовская Техрзд Л,Микеш Корректор В. Гирняк
Заказ 50 4/43 Тираж 897
В11ИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретегий и откры.:ий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Подписное
Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4
Количественные данные о включе— нии Н-тимидина в ДИК лимфоцитов
3 представляют собой среднее арифметическое измерений в пяти параллельных культурах и выраженьг в импульсах в минуту на 1 ° 10 клеток. Данные представлены в табл. 2.
Таблица 2
Предлагаемый способ обеспечивает !
О расширение арсенала веществ для активации лимфоцитов за счет свойствен,ных организму веществ. Это в свою очередь расширяет возможности изуче.ния механизмов активации лимфоцитов, их функциональной характеристики у больных для оценки состояния и резервов иммунных. реакций органггзма.
