Способ получения инозин-5 @ -монофосфата
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИПОЗИН5 -МОНОФОСФАТА из природных источников сьгр± я, отличающийс я тем, что, с целью упрощения способа, в качестве источника сырья . используют мышцы малоценных пород рыб которые измельчают и вьщерживают в течение 6-8 ч в присутствии хлористого калия, целевой продукт экстрагируют 5-8%-ньпч раствором хлорной или серной кислоты, после фильтрования сорбируют на активированном угле, элюируют смесью этиловый спирт-вода25% нь Й a rмиaк в соответствии 25:
4(5!) С 07 Н 19/20 ф : с
13,, - -.ф=,"в., 1, СОЮЗ СОВЕТСНИХ М"" .. СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
-1 . фЯ,, РЕСПУБЛИН
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3551772/23-04 (22) 25.11.82 (46) 23.06 85. Бюч. N: 23 (72) !1.,I. Курский, В.A. Тугай, И. В. Сахненко, В. iãi. Акулин и I ii чп
SU„„1 162834 с я тем, что, с целью упрошения способа, в качестве исто ника сырья используют мышцы малоценных пород рыб, которые измельчают и выдерживают в течение 6-8 ч в присутствии хлорис— того калия, целевой продукт экстрагируют 5-87-ным раствором хлорной или серной кислоты, после Фильтрования сорбируют на активированном угле, элюируют смесью этиловый спирт-вода25. †.ный аммиак в соответствии
25:(22-24):(1-3), упаривают в вакууме до 15-20K содержания нуклеотндз и после обработки амилацетатом в соотйошении 1:1 целевой продукт подкисляют до рН 1,8-2,2 и осаждают
4-10-кратным объемом этилового спирта при 0-2 С.
> Е! Ct»!II)O I (ir)r !I > (тт
")1(I "„(,1 ()) O; f ) (»С) М((1). " .>" »).
)" О I »: Р:(it > I(—, » О Г H»!».; ) „,; » i ..))-», i » И)() f!;);; ;(i)t:i»; l ..rÕ (I1 i )P:1 (H, i»3((, . ii c !(Г:)р: v. (,"1)»))i (5» ) 31»! ;il;):,<>.;: l..:»i)(;. (:Ь(Р I.:-i < !, 1)< Ilt— 1(, ) . . I r 1 < I: r, i):< i)?)(7,",) I (t H l ) ",Г ° . 1 ° ". (() ) Л I ) r), 1 O » O О t) .1": С i » f ) (!ii!!1)r>,! I (!(., r1;) P! );) т».. « ) ((»: -) ) 1<С) (1) ft)»)! i .,r;r«, < ) .(!> )! > ) ;; г) ii>(т)г I "I° ", - ; i) < (3» 3 1» : C !C(, »!< ;,(Ii), т» () ) <) !! I) f ) 3 1 l » (), П t т tk i H: » I 3:И Р О, i r I ) I :,; i ))))г);)) ;)»т(3! )>3 -,i !>,)(,.ri)k-«1) t..! ri) ;— )1O! : т Г OC ) »1), ТС) (СР(С . C :! r), .) . т)i (! 1) I! >i)> ("1) ()() r() r)lc r> (<г >i, С ) 1! P ; ) (С ;) < . ) ()(. ),; 1 ! () ) ) ) » )т, Г(), ; <, ) ) !)r rifi r )) », т, ! , ) ); i ) l l If ! » ) "1>) t ) 1 ) f . . : > ) ;, ; < >), );) <- .! >) .,)-; ", . — . . » » >(«)1 . . . » И > 13 : )," !, .,: i "!! 1) < ) )3 ГI тl):)l! г ).) т!!г)Г)), ) "(т) 13 г :1:1! i(:, !) I "»(111: Р . 1" . т () Г С „ ii C i>i .ii » 3 i t! II!1 <,, .! .: (тол . цс 1 c i. : I icp:) ()1! . I i)! i I t. <:. (, I 3>!)» 3т(;(< т»,1; ) )! ". (С)>H "f I ) r tr -, O (3<»» i (:.: II )(>О;: >? I!(7, i iP, !()! <) l) O. I )r ;! ););! ) )т7 )..,.() t)cl; 31),, ); (> —;, —,! )) " 1 . :. » 1): О 1 >1 t;. " ." ")) » (? !! ;K » ) ) ">(((1 ),:()» )))<>>т (C»)(!
I!(t i:li ) . * (,: . ) ° ) 5< )) ;. ; I;;,:> O fl )) )>) ), г(, > ) » О-)(Р) (1(1( )".i.(>Г )! )" !)) 1)1((— . !,, ), — (— г 1) ) ) I;I тг, т,, >)O .;, ! )(Г r 3<)>37»k)r) "()") ) ) )i:,;r< > C >)tp h H f1О 3 ЛС>. 1 Е(РТ ИС. (С.) . ) "-1111 1):)> . 1 ) С Тт! ) )1 (ЙИ )IH H )H,Op OH ()C 7 OR(IIHci !)i? C)! t C C C. :1)ГЧ Еl»1 . )МИ(С РОО)(т757 t)»О:е О ()Р О;: 1:," 11" 1 . 1тр О)(Е ТОГО, уГ(р О(()<»ИР; .:C;C:t)();: 3 а ЕС:) (С)т!а ЕТС Е(Е) ИС) ПО>! Е HO E3(3»if!i t (TС Г 1 — D E. I » О 1 О <1) с Р м Р 1! 7 а т k! E3 1 ((1 О ! 1) с » P а:il i Hkf 57 ИМ Р»)!))С) (()(Е) (3 T >cr) >IF У i!),(((I Pl (() г ) Л .Р Е3 .) 11 )1 тг) т <. ) Г" 13(lс> !3! рИ Ет. 1 Р ТО» (1 (1 т> 11 (31!! t f3) )1 11. )1 . а 31)! -.! !) < ()1 : )) : 1 . !) )! . )!Г т): ! .); 1 ) >,) ))(, r 1 г . . ) ()), !) :! 1: 1 )! От: », 1() . > i. Г)> . .. 1< !!;) ,, ) ) >,"(: )) . . . )Е ",И: ".И . 3, )1)Г)" . )i)i:ТQ ) т !(;l.. :с! ! )Г)) )i(r. )ГТ ..1)ЕC(I т:",,;C <(11« , - ? С. т, .. :й)- с! <) а . )i)3)" ()) i ) а»ИЬ) "(ОС) Ъ<)МО 1 а>)МИ:: IЦ(> ; t7а. ВОДН.(К;?).етЕ)ОР > СОЕЕЕРжа>т?>И!: ? 1() (tO;I)ck;cC.:S.«,. т;О р1! .) 0 0;.— (!О,"? 1<",1 и (ажда!? 1 5 — 1. "13) — (ср)1 i кь(м o(.)7.(iot )х„(с) ."..»,eHH:)ão о 0 — 2 0 )т? С, iiОГ O.".I 1(HOÃО CПИ,)Tа . 0(.c)с»С Ь ()ТД Е?11(f<)T ЦС liTpll()? I ИрГ>1>а(!И ЕМ, Пp r М> ! )а)()т ) > гt Оут(, i;;..,!,Еi) !HO! O g1?,„— >(O( .) Ti11 (i13,))! ((! (kIP . r . 13) fC )))))И Бг)Ю ; Е3 (т C 11 ЬП т р Е»аj!: ") (!С(!. ) Г ((()Ь(М .;1 . i 162 ,/>((Xi ; (т:01301 > 1(ро ту!(Tя ((0 1(.Г с<)д((р,(,) i!иe (>сíoпног.> в=цест>::( гм((К; иму. l IIOI .!(>Ыеflf(>1 1!рт(50::.I ) . Сое,, инеiil .е :-:арак геризонапо;р(матo— r 1)аф(!>r "C 1(П 0;1!3И/(((r (/C < 1>it (T:! >Ci(r ((Ь— H o -. т,- . т;> и; (7 г 0: б р я з; т < т — 1 t 1> в Яме P Я с т!1(7;) и Г F)IJ 0. I,i Ii 17 (>,(Я(i(7)I н — бута!1(7)1,,:1;(ет )н, мурав(и!Иая (((слота „. 7(О- па я Гри -(орукс c I;я кис.-(ота О, 1 М ХПА взя Гых в кo:l;>т>сс; вс 20> --0, 7 ), :, >т 1; li i;I ГОГ> и;:.:0113(>!в >1/) (Г И С т /,:1 К !I)c Р((1 <, >.i<1>! (Г>.;" /,, i i<(. > РЯС т в()ш, 17000-ICЮ(в,-:." .* i>tl ет),.1!<)Я(7> :1 те . >i c t; -.:;;(°,.- С. Затс..t !0!5HË;)Т 3 ТЕ>(а<:1-:() 1, Э(30 Ь -руют, ГС- . 1(К ", Я)ти(3Я!7Т, 17;1110-,1<Л т((р ЭВЯ;т. Ой )одт.т, )100 (7;.! OIIJH I!Fl!(>T И -«ep E 3 1 ч !<13Л(>тp";10Ò, .!Ро 3Р(1Ч?(т (Е фи. bTP<: i I> . О > .<,,1!?(Я:т>Т т O и т) <3Д : (Я f(> Т С (,. 1 е т) ж;!.! 1 И Е Н У К Л (. 0 и. . Я ° COp(;t(t/I(7tI!i) ; «,,II(0(..;, -,/! /Itr э т — >; pаэ "И(ЛОГ?(,!(С !7рт"..(ЕO) 1. ФHF!ътр>l .>рО <> „<,> / . Ст ) ii i (с т . : ко((р 0 . 1: 3: !Iii!i) у)/тт т 1(Э(>.Ю 96 . — !t t 7 Ги;.,О,-.Ы, : 1;;, ; с . т />дя; c/ ) / — t tf>i< > 1I / !< н c o t; i> 0 tie:!H>i t>pя> r .-Ю> С(1-, >>;(-"т:.(у! 5 —, .:(- (3<1(<>т В il «., . 1 . 1(7 I .: С О (Сржа тl > < Ч с fI>/I/ rO-)÷-tëIi ./,— ° то (>Е,>,.<0 )t -. -,() Н><() i> 3((/рЯю, О ) ъ(7."1 . <) :I(OH Г(7:=Я I! Обра батыя ают р;-;в(Ih ?I объемо«м Ям;-к(Я?((ЗTHTe <1 Волн >it! р.-" -т. >р, . Ог ержащ-.,) 5 --1 1Р, IIo,:;к!(с)!я, т 20>:: — 1(..:: НС1 I: 1 Н 1,8 и ОС< .>/Ц(ЯЮТ I i(I:Iel> .>и: 17(>ДУI;T .7 КРЯТНЫМ 40 ( () (ft i> (< . O7f 9 0,: - (1 0 т > .) i > I; r O 13 O I : > (: . 7 1 Я, 0;;„(Г;т(д 1;>тот,.;!O 1 Г . (;С а,ток 07 ri(-.-(Я— > Млт ОХЛэж (:: 0;0 Э Г Л >r!<)> V СПИРта 45 зьк ((и();.кп H эк(икятзре нял прокалени (т .! С;1 !", f .; Ыь(х <д i 07 м r:ðeHя.тятя., содер— ) e I l(ОС 11() H li01 !3 e!!;e(Т:)Я 9 (7//7 (мЯ КСИ:,у;(1101,(0(!((7 !Ii>(250 11(<() . (.Oe)(!if(eHHe т.."(ЯР Я К l (,) .- . 3 0 НЯ !i<7 ХР ()Мс О! !7 и(>, Ит((>СКОЙ И 0 (13!(>(< f1 0(»Г Ь!С i) I iQi" 1(Т:. 1>1-:0 Э Г«Л ОН (;(ря. ((1 5 — 1МР t> систе" if (яi!>(л (ч!Л(l(> пр>.!"р, 1) 1(и .: 7, 1 к: сер (e)r!(013 . Я(Ш: > Р i!ti>1 Киж;т i; >IOIJI,Ч;if f НЯ МЯСО— 55 р б т(К ".>Ò,, -". 1 KC 1 р,.:(т.«„,>(.",;!т>1 Г< 1, )();-,.",—,т(: (H..;i!ИрованIi(;>е;:, .«;i:, »»".: н. :,:Iе;)ж((вя— ч ф 1(>7 8 ч при 25 С. Затем побав (Hx>T л 8:.-ной H„S0. и экстряги()ук т в т Гие (е 1 ч, зятем фил(,труют. 0сад(к зHFH ;-..р я((в«лтив содержание нукл еотида в эксгракте и сорбционную емкость .-ля иo -. римеру 1) со скоростью О, /, > <с Л< МИН> СМ ПОПЕРЕЧНОГО СЕЧЕНИЯ к:.:01(к(! . Г1Ром: >дают О, uu l Iv Растго— Н,«(!» под спектрофотометричес(... t! f?7oJ7ем. Злюируют 5 — 1МР Г.;((.. ">в 9 (7 ., н?>(ii э тилОв((й cr(HpT: В Ода ? э --пь:й ."1Н ОН в соот!(ошении 2 ), 1 (()РакЦие>т сОДе17ЖЯЩУю нУклео ти;. т Уг:BPIfвают в вакУУме До 157. содс1)жя(и я целевого продукта (контролт,:-:тс поглощению при 250 нм), и ?!еряют объем и обрабатыгают равямилацетята, Водный раст„-l во -, соде()жа(((?ш 0 — 11Р, подкисля ют ло РН 2. 2 ?0>.-ной НС1 и осаждают евой продукт 10-KpBTHh объемом о;л-;.;-" ен: ого Дс 0 С 95."Гт-ного этилов(7;-, г(иртя. Осадок отделяют центрифуг;(р(>ванием, промыгают 3 мл охлажПст;НОГО Э->ИЛОВОГO СПИРта И ВЫСУШИпяют D .эксикаторе над прокаленным / 3 (< В; (хо-(110 мг препарата, содержа> (ic 0« i30 ного вещества 957. Соеди:10 (ие охаря к —. ериз опа но хроматогр гфИЧЕСКОИ ".ОДЗИЖIIОСТЬ!(> ОТНОСИТЕЛЬНО этяло! ного образца — 1МР в системе (аналогично примеру 1) . 0б.аоотка измельчен! ого сырья хлор,-:<;т/ и калием в течение 6-8 ч необ- .; >д -;-а для полного превращения тка— :-;(вой >.. Р в 1МР с помощью наиболее :)ффективного активатора АМР-айин(7гипролазы — моновалентных катионов Кс. Время обработки установлено эксперимситяльно с помощью хроматографическогэ анализа измельченной ткани ня с0, ержяние адениннуклеотидов: за время, меньше 6 ч, часть АМР остаетс я нсизме (How виде, а увеличение времени обработки () 8 ч) не приводит к повышению выхода 1МР, а толь— ;<о к увеличению продолжительности процесса. Зкстряк(п(ю нуклеотидов эффективно приводят с помощью разбавленных C Ir (7 t7 O (» 3 I3 I l (p 3— ны х:rоp няя илl(Г ерняя кHсл РTя . 11pи («(, !, t . (Я ((ltc -f (! ()ВТ() >,(1151(. «(1. В(1()i!It) (1 (УI. Г(1 1! 3 3 I! Ii l i: i,, . (!,(1(.:«Л;) (1 0 )(;> ° 1> tl f i ...Ii. i ((fci(;:,t1Я .IC! tit !))(я::(((. (! «»() ((3 ." (,Еа (1() 51. .)О It 0> KHCJIC)ÃC! -) КС 7!! (3 K". :, i! t» 3 с! а(И} 1 ЕJI 1>I I 0 Ч Г(р ОП(а ЕТ С lt О t! (ОН(1(I КИ (! Т: (i I I", (Ма. 1> НОС Тll Гlp 01(еc C:3 ?J! I0H() ОВаlilf}T („ ) и ((!(1(ИМВЛЬ)(Г)! РВСХOJ C PC cii»итои . Уги)р il!(!!(He до 15 — 20 : содержа;(ия ;« "Ic:(ЕОТ :(Ла ЛБЛЛЕТ(:5i Оl(ТИМаЛНН! I 13 "1351 3(1 II О Г H PpàÑ 7 Â(7p МОСТЕ>г? ((((Г;()р) -, . "1(lpHTIi3(I!I>(? „,О (»дерн;1!!ИЛ Соста()итель Ю.Голода Редактор Л.Гратилло Техред Л. Ко(01(бняк ):орректор И, Эрдейи Заказ 4067!22 Тираж 354 I 0 JI11È " Н О е БИИИГ(И ГОСударетВЕ .ÍÎÃO КОМИТСТc3 ССС(Г(О делам изобретений и откр!Лтии 113035, И(?сква, )K-35, Рау(пска«1 наб. „д, - «) 5 Филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4 «(Г () I i 3(В )(!ИИ «1(I(i "t I (. Г! ((Ii ";!!" )((> ;(:Ii !f»(? I .)(ilfC :: i, 1:I Г lic I:il:Iii :i: :, . )Вii :.11(Я I!У((:I(ОТHJ(ci, t,P«П!(" i I ::, (((Р .: ОJI.:(1(IT(,JI t«(1;litt Г:1;! 11, Онl!Г "f;,>,;!РИ)!Еli»}!1!C КИСЕ(t) (,1 О;( () ((» приl)О Ill ñ 1(v:iú «и;(!«И)0 . ЯГ г:);..:,— . :, (, . (! (! О Г ();1 (31((1111!() (() 8,. — i . ((.,.:); р;> (и ей . ")! i, t1;,1 а(1 (I В i) (113 3((i! (?1 A 01 . 15! Il ii «О 1)е . I !3» (.Орб »1(Та«OIIp(3 (0 11)! (T(! 5(ГC. и „ ti!: Обеслеt(IITIc) t Т c()Ip(1.(IHI(t. .p;:. (ci1l í0 с I: c(IOë .:; O!3cf }HI C i C;I. (H 1(»,! t -(7 :еff (t В, к;Iк Ho((()()C! (»(I«I(>L(Г }(13((, > к игла (! Г (l i 1 с ОР»11(и (й (I Po t(1,л }i (> (« ,) ; i(3 .)а!,if!0 ) КС Г ) 3 КТ(1 CO (НЕ(1(icIJi )(: ., 1 .;(3(7(Г)М Зна .Сний р(1 I, (I;l(lpi (i()Р. :l 3 TI ec ò!(ом > с т() ОЙ(т ()е ) .):I I0Tf P O T i cI I I H» ((М Е Г 1>10 .) Т и 1 О ) 3 (>(11 (!iHpт: вода: аммиак об(це(!р) нято В к(1,1(lllон(! 011 хрома (() гра(7)5}и, 1! o»IC)О:) «: О О Т I I О Ш" 1! И и Гl P O 13 (Ц Е l (С >> Л С Т О((:), T Т(! )(Р .: ((;: :. (:. «1, », ii! I !i »!!life>:ii!} !(I:: :" Л(..:, }3,(fi !i — сtitlтffill" (. . ;(Itl,i ã: г!«(!;1!I» !П (}(I I! П((1: У!,В. .,(((I C 53 Т. . i I>i(( «I(I (Г Т(!It tt(I(Г )О(! )(О;Ii IIH)i!;1(i (1<11 ((с »5»- II(Pа i!H(ll3cl 11 Ft(l(il()Jl!> "}О!)Е(;«(: "" i((>i Га,(. (3,:l,, ::: ;(>}И(Я ()С(3)(П) (Ii) . Ilc .« . -.-Г O P ОДУ:. (1 !в ?}i )!)(>(. Г I IH(Гtl(. : . () I i О!! (I I I!И . :: ) )ПЕ; Е ° 1 Н(! Я: . I!Г i l(Ã:: ttl! (t!IГТ:i(lit ,О\ 1 ((«,1, ««(-, .((Г Il ) i13i), ит к и(. (° . !) (с (Iу (II j) г,i р(3 ! 1::,,I " (: )I ИЯ 13 f : ).1(i ». . «>! (. (О 1!;)! 1,(.(Г(1, 0cë;! -!(": l;c ..Р::;)o!)одлт ii(t! .; :;t .— ,1 iI .. 1!Ии,iIc) 0 . " . (((i i и}(н) l - т c . (1»ра с Т )»р I i }1ИЖ(3 0 ll i 1() «(нодИ 1 :>: I »13 >- (П(. ,3((10 "1>(? ОД 5, i- P ;I»I О !I > 1(— (,, I H" ((;7!3}>«(t»li(T(> i(J i(i i t> 1 ТУР М 5! f; ÏC . В,(Т »(От p(75"t »;(((((:; на((,; н;«() C ci -1, (-.,- Г>,->— Оl(;t",, >(Р !» (t>1;«>П;: ((; >i l>i О 1 >)>((;, . t f 1 i I I .
