Способ получения меченного тритием гуанизин-5-триофосфата
О П И 1-А Н "И Е"
ИЗОБРЕТЕН Ия
Союз Советских
Социалистических
Республик (11) 461622
К АВТОРСКОМУ СВИДВТВДЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 13.07.73 (21) 1949383/23-4 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано25.10.76.Бюллетень №39 (45) Дата опубликования описания 14.0>.77 (51) М. Кл.
С 07 Н 19/20
С 07 В 23/00
Государственный комитет
Совета Министров СССР па делам изобретений и открытий (53) УДК 547.857.. 7. 07 (088. 8) (72) Авторы изобрвтения О В. Лавров, Н.С. Марченков, К.С. Михайлов и Н.Ф. Мясоедов (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЧЕННОГО ТРИТИЕМ
ГУА НОЗ И Н- 5 -ТРИ ФОСФ А ТА
Изобретение относится к области получения меченных тритием препаратов биологического назначения, а именно к новому способу получения меченного по 8-му положению тритием гуанозин-5 -трифосфата.
Ф
Это соединение находит широкое применение в молекулярной биологии.
Ключевой стадией при синтезе меченного тритием гуанозин-5 -трифосфата является получение меченого гуанозина-8 (Т). 1О
Известен способ получения гуанозин-8 (Т)-5 -трифосфата обработкой 8 — бромгуанозина газообразным тритием в условиях высокочастотного электрического разряда с последующей радиохимической очисткой гу- 15 анозина-8 (Т), совмещенной с биохимическим фосфорилированием.
Однако сильная деструкция маркируемого соединения снижает удельную активность и чистоту целевого продукта. Кроме того, из- gp вестный способ требует применения специальной аппаратуры и высокопроцентного трития.
Цель изобретения — повысить удельную активность и радиохимическую чистоту целевого продукта. 25
Для этого 8-бромгуанозин подвергают обработке тритием при 50-150 С с промео жуточным выделением гуанозин — 8 (Т) и последующей радиохимической очисткой последнего, совмещенной с биохимическим фосфорилированием.
Достоинством способа также является возможность получения гуанозин — 5 -трифосфата заданной удельной активности регулировкой концентрации трития в газовой смеси.
Замещение атома брома в исходном 8— бромгуанозине на атом трития происходит в мягких реакционных условиях, что позволяет существенно уменьшить деструкцию маркируемого соединения.
Пример . 4.0,0 мг 8-бромгуанозина адсорбируют на 400 мг палладиевого катализатора (10% палладия на активированном угле "Норит"). Обработку 8-бромгуанозина газообразным тритием проводят при температуре 100оС. Продолжительность реакции в атмосфере 50%-ного трития 2 час. По окончании реакции продукты десорбируют с катализатора, 80 мл 10%-ного водного пиридина и лабильный тритий замещают на во461622
Составитель И. Обручников
Редактор О, Сгенина Техред Г. Родак Корректор Н. Бабурка
Заказ 5442/171 Тираж 575 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР пв делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д,4/5
Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 дород путем трехкратного изотопного урав— новешивания с водой. Сухой остаток после отгонки последней порции воды растворяют в 15 мл дистиллированной воды и наносят на колонку, содержащую дауэкс 1х8 в формиатовой форме (1,0х15 см). Колонку промывают 150 мл дистиллированной воды, при этом выходит четкий пик гуанина-8 (Т). 3атем при элюции 150 мл 0,25 н. муравьиной кислоты выходит четкий пик гуанозина-8(Т) .
Далее выделяют 8-бромгуанозин-Т (G ), используя для элюции 2,2 н. муравьиную кислоту. Получают 10mc гуанина-8(Т) с удельной активностью 3,65 кюри/ммоль, 146гпс гуанозина-8(Т) с удельной актив- N ностью 6,7 кюри/ммоль и 8 mc 8-бромгуанозина-Т(6 ) с удельной активностью
0,3 кюри/ммоль. Полученный препарат гуанозина-8(Т) концентрируют при помощи активированного угля типа "Норит" и фос- щ форилируют, используя 1,0 мл стандартного ферментного раствора, до гуанозин-5— !
-трифосфата-8 (Т) . Продукты фосфорилирования разделяют ионообменной хроматографией на колонке (Зх30 см) с ДЭАЭ- целлюлозой A-25 в бикарбонатной форме (3х х30 см). Для элюции применяют линейный градиент гриэтиламмонийбикарбонатного буфера рН 8,6 (ог 0,2 М до 0,6 М). Фракции собирают, обессоливают при помощи се- g)
I + фадекса КМ-25 в Н -форме и концентрируют в вакууме, получают 50 mc гуаноt зин-5 -трифосфата-8 (Т) с удельной активностью 4,6 кюри/ммоль, Теоретически по приведенной ниже формуле удельная актив- 35 ность препарата должна составить 4,1 кюри/ммоль. Т
Ауд= д т- н н +н. где A > — теоретически достижимая ак- ) тивность маркируемого соединения в данных экспериментальных условиях, кюри/ммоль;
29,2 — коэффициент пересчета удельной активности, кюри/ммоль;
Т вЂ” количество трития в исходном газе, ммоль;
Я вЂ” количество водорода в исходном газе, ммоль;
Мп
Н = — количество водорода в лабильных положениях маркируемого соединения, ммоль;
М вЂ” исходное количество бромгуанозина, ммоль;
11=6 — число атомов водорода в лабильных положениях молекул 8-бромгуанозина;
H„= o, — „-количество водорода, содержащегося в катализаторе, способного к изотопному уравновешиванию с тритием, ммоль; — количество катализатора, мг.
Полученный препарат гуанозин-5 -трифосфат-8-(Т) хроматографически однороден и радиохимически чисг.
Формула изобретения
Способ получения меченного тритием гуI анозин-5 -трифосфата обработкой адсорбированного на палладиевом катализаторе 8-бромгуанозина газообразным тритием, выделением меченного тритием гуанозина-8(Г) с последующей радиохимической очисткой последнего, совмещенной с биохимическим фосфорилированием, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что, с целью повышения удельной активности и радиохимической чистоты целевого продукта, обработку 8-бромгуанозина тритием проводят при 50-150оС.
