L-нуклеозиды, обладающие анти-hbv или анти-ebv активностью, способ ингибирования hbv или ebv инфекции
Описываются новые соединения - L-нуклеозиды общей формулы (1), где R - остаток урацила, тимина, цитозина или пурина, который может быть замещен атомом галогена и алкилом, и R'' - атом водорода, ацил, алкил, монофосфат, дифосфат или трифосфат, или его фармацевтически приемлемые соли, которые обладают анти-HBV или анти-EBV активностью. Описывается также способ ингибирования HBV или EBV инфекции. 2 с. и 11 з.п.ф-лы, 20 ил., 2 табл.
![](https://img.poleznayamodel.ru/img_pat/40/401939.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
Соединение 3 (40 г, 210 ммолей) перемешивают в 500 мл безводного пиридина при 0oC, при этом TsCl (75 г, 393 ммоля) растворяют в 100 мл CHCl3 путем добавления по каплям. Спустя 3 часа таким же образом добавляют вторую порцию TsCl (50 г, 262 ммоля) в 50 мл CHCl3. Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов, затем охлаждают при 0oC, добавляют 10 мл воды, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут. Реакционную смесь выливают в 500 мл смеси льда с водой, экстрагируют CHCl3 (150 мл x 4), промывают 1,5М H2SO4, (150 мл x 4), насыщенным раствором NaHCO3 (200 мл x 2), сушат над сульфатом магния. После удаления растворителя получают коричневый сироп, который после кристаллизации из EtOH дает соединение 4 в виде твердого вещества белого цвета (103,8 г, 99%). 1H-ЯМР (CDCl3):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
Соединение 4 (70 г, 140,5 ммоля) растворяют в 700 мл ледяной AcOH и 100 мл Ac2O, прикапывая при 0oC 50 мл концентрированной серной кислоты. Полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, а затем выливают в 1 л смеси лед-вода, экстрагируют CHCl3 (200 мл x 4), промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, сушат над сульфатом магния. После удаления растворителя в вакууме получают соединение 5 в виде сиропа (84,2 г, выход неочищенного продукта 110%). Метил-3,5-ди-O-p-толилсульфонил-
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
Неочищенный продукт 5 (80 г) перемешивают в 500 мл 1% смеси HCl/CH3OH при комнатной температуре в течение 30 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, остаток растворяют в 300 мл CHCl3, промывают насыщенным NaHCO3, сушат над сульфатом магния. После удаления растворителя получают соединение 6 в виде сиропа (60 г, 90% из 4). Метил-2-O-бензоил-3,5-ди-O-p-толилсульфонил-
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
Сироп соединения 6 (60 г, 127 ммолей) растворяют в 200 мл пиридина и перемешивают при 0oC, прикапывая бензоилхлорид (40 мл, 345 ммолей), а полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 17 часов. Его концентрируют до около 50 мл, затем выливают в 300 мл смеси лед-вода, экстрагируют CHCl3, промывают 3 н. H2SO4 и насыщенным NaHCO3, сушат над сульфатом магния. После выпаривания растворителя получают соединение 7 в виде сиропа (71 г, 97%). Meтил-2,3,5-три-O-бензоил-
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
Сироп соединения 7 (70 г) и бензоат натрия (100 г, 694 ммоля) суспендируют в 1200 мл ДМФ и перемешивают механической мешалкой при кипячении с обратным холодильником в течение 16 часов. Смесь охлаждают до комнатной температуры и выливают в 1 л смеси лед-вода, экстрагируют эфиром, сушат над сульфатом магния. После выпаривания растворителя получают сироп (50 г, 8a и 8b), который растворяют в 180 мл пиридина и бензоилируют (BzCl, 20 мл, 172 ммоля) в течение 17 часов при комнатной температуре. После обработки получают соединение 9 в виде сиропа коричневого цвета (48 г, 83% из 7). 1-O-ацетил-2,3,5-три-O-бензоил-
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
Соединение 9 (26 г, 54,6 ммоля) обрабатывают 275 мл ледяной уксусной кислоты, 55 мл уксусного ангидрида и 16 мл концентрированной серной кислоты при температуре от 0oC до комнатной температуры в течение 17 часов. Затем выливают в 1 л смеси лед-вода, экстрагируют хлороформом (200 мл x 4). Объединенный экстракт промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия и сушат над сульфатом магния. После удаления растворителя получают сироп коричневого цвета, который обрабатывают этанолом и получают соединение 10 в виде твердого вещества белого цвета (8,8 г, 32%). Т.плавления 124,7oC, литерат. 129-130oC; Д форма: 130-131oC [
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
1H-ЯМР (CDCl3):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/img_pat/40/401940.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
L-рибозу (5 г, 33,3 ммоля) суспендируют в 120 мл 1% HCl/ MeOH и перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов, в результате чего получают прозрачный раствор. Реакцию гасят, добавляя 30 мл безводного пиридина, а затем выпаривают при пониженном давлении. Оставшийся сироп выпаривают совместно с пиридином (30 мл x 2), затем растворяют в 80 мл безводного пиридина и перемешивают при 0oC, прикапывая бензоилхлорид (20 мл, 172 ммоля). После перемешивания при комнатной температуре в течение 17 часов реакцию завершают. Добавляют 10 мл воды, полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 0,5 часа, затем концентрируют до около 50 мл, выливают в 150 мл смеси лед-вода, экстрагируют хлороформом (50 мл x 4), промывают последовательно 3 н. H2SO4, (30 мл x 2), насыщенным бикарбонатом натрия (30 мл x 3) и сушат над сульфатом магния. После удаления растворителя получают соединение 9 в виде 13 г сиропа. Неочищенное соединение 9 растворяют в 80 мл HBr/AcOH (45%, вес/объем) и перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 часа. К этой смеси добавляют ледяную уксусную кислоту (50 мл), полученный раствор перемешивают при 0oC, медленно добавляя 34 мл воды для поддержания температуры ниже 7oC. Затем перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа, выливают в 200 мл смеси лед-вода, экстрагируют хлороформом (50 мл x 5). Объединенные экстракты промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, сушат над сульфатом магния. После удаления растворителя получают 13 г сиропа, который растворяют в 40 мл безводного пиридина, перемешивают при 0oC. Затем прикапывают уксусный ангидрид (14 мл, 148,4 ммоля). После завершения реакции реакционную смесь выливают в 150 мл смеси лед-вода, экстрагируют хлороформом (50 мл x 4), промывают последовательно 3 н. H2SO4, (30 мл x 2), насыщенным раствором бикарбоната натрия (50 мл x 2) и сушат над сульфатом магния. После удаления растворителя и обработки метанолом получают соединение 10 в виде твердого вещества белого цвета (9,2 г, 53,7% из L-рибозы). 1,3,5-три-O-бензоил-
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
Соединение 10 (9 г, 17,84 ммоля) перемешивают в 100 мл CH2Cl2 при 0oC, при этом добавляют 70 мл CH2Cl2, содержащего HBr (3,2 г, 30,5 ммоля), сразу. Полученную смесь перемешивают при температуре 0oC в течение 3,5 часа, добавляют 55 мл воды, полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. Органический слой выделяют, промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия и сушат над сульфатом магния. После выпаривания растворителя получают пену, из которой после перекристаллизации из CH2Cl2 и н-гексана получают соединение 11 в виде твердого вещества белого цвета (6,2 г, 75,5%). Т. плавления 137-138oC, из литературы: 140-141oC, [
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
1H-ЯМР (CDCl3):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
Соединение 11 (5,94 г, 12,84 ммоля) перемешивают в 50 мл безводного CH2Cl2 при -15oC (смесь сухой лед-CCl4). Последовательно добавляют безводный ДМФ (15 мл) и сульфурилхлорид (3,2 мл, 3,98 ммоля). Полученный раствор перемешивают при -15oC в течение 30 минут, а затем оставляют при комнатной температуре на 4 часа. Тремя порциями добавляют имидазол (9,7 г, 12,78 ммоля), охлаждая при этом в ледяной ванне. Затем ее перемешивают при комнатной температуре в течение 17 часов. Полученную смесь выливают в 150 мл смеси лед-вода, водную фазу экстрагируют CH2Cl2 (50 мл x 3). Объединенные органические слои промывают водой и сушат над сульфатом магния. Очищают на хроматографической колонке (гексан: EtOAc/5:1 до 1:1), в результате чего получают соединение 12 в виде твердого вещества белого цвета (3,7, 49%). Т.плавления 124,5-125,5oC; литерат. 129oC; [
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
Суспензию соединения 12 (3,33 г, 5,62 ммоля), KHF2 (1,76 г, 22,56 ммоля) в 30 мл 2,3-бутандиола перемешивают в атмосфере аргона. Смесь нагревают до 150oC, добавляя 1 мл HF/H2O (48%, 27,6 ммоля), полученную смесь перемешивают при 160oC в течение 1,5 часа. Для гашения реакции добавляют смесь рассол-вода, а затем полученный раствор экстрагируют метиленхлоридом (50 мл x 4). Объединенные экстракты промывают рассолом, водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, сушат над безводным сульфатом магния и активированным углем (Darco-60). Все это выливают на слой силикагеля (5 см x 5 см), промывают метиленхлоридом, а затем EtOAc, получают сироп, который кристаллизуют из 95% EtOH, получая соединение 13 (1,3 г, 49,8%). Т.плавления 77-78oC (литературн. 82oC). 1H-ЯМР (CDCl3):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/img_pat/40/401941.gif)
Соединение 13 (464 мг, 1 ммоль) растворяют в 10 мл метиленхлорида, добавляя при этом 1,4 мл HBr/AcOH (45% вес/объем). Полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов, а затем выпаривают досуха. Остаток растворяют в 20 мл метиленхлорида и промывают водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, сушат над сульфатом магния. После фильтрования и выпаривания получают бромосахар - соединение 14 (100%, на основании данных ТСХ). Одновременно суспендируют 2,6-ди-хлорпурин (378 мг, 2 ммоля) в 15 мл HMDS (гексаметилдисилозан) и 2 мг сульфата аммония, а затем кипятят с обратным холодильником в течение 2 часов. HMDS выпаривают при высоком вакууме в атмосфере азота до получения силилированного основания белого цвета. Бромосахар 14 растворяют в 25 мл безводного 1,2-дихлорэтана. Полученный раствор добавляют к силилированному основанию в атмосфере азота. Полученную смесь перемешивают при кипении с обратным холодильником в течение 2 дней. Добавляют хлороформ (30 мл) и промывают последовательно водой (20 мл x 2), насыщенным раствором бикарбоната натрия (20 мл x 2), насыщенным раствором NaCl (20 мл x 2) и сушат над сульфатом магния. Из CHCl3 кристаллизуют соединение 15 (105 мг, 19,7%). Т. плавления 158oC; Д форма: 158oC. УФ (метанол)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
Соединение 15 (70 мг, 0,13 ммоля) растворяют в 25 мл насыщенного NH3/CH3OH в запаянной стальной бомбе и нагревают при 90oC в течение 6 часов. После удаления растворителя при пониженном давлении получают полужидкое вещество желтого цвета, которое очищают с помощью препаративной ТСХ (9: 1/CHCl3: CH3OH). После лиофилизации из воды и 1,4-диоксана получают порошок белого цвета - соединение 16 (30 мг, 75%). УФ (H2O) pH2,
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/949.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/949.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/949.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
К раствору соединения 13 (400 мг, 0,86 ммоля) в безводном CH2Cl2 (10 мл) добавляют бромистый водород в уксусной кислоте (45% вес/объем, 1,5 мл), полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 17 часов. После удаления растворителя и совместного испарения с толуолом получают соединение 14. В то же самое время тимин (215 мг, 1,72 ммоля) кипятят с обратным холодильником в НМ (25 мл) в атмосфере азота в течение 17 часов до получения гомогенного раствора. После выпаривания растворителя получают силилированный тимин. Раствор соединения 14 в 50 мл дихлорэтана добавляют к силилированному тимину и полученный раствор кипятят в атмосфере азота в течение 3 дней. Добавляют воду, а затем экстрагируют CHCl3. Органический слой промывают водой, рассолом и сушат над сульфатом магния. После выпаривания растворителя получают неочищенный продукт, который очищают с помощью препаративной ТСХ, используя 2% MeOH/CHCl3 до получения соединения 17 (235 мг, 58%). Т.плавления 99-101oC. УФ (метанол): 230, 264 нм [
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
Соединение 17 (145 мг, 0,309 ммоля) обрабатывают NH3/CH3OH при комнатной температуре в течение 18 часов. После выпаривания растворителя и очистки с помощью препаративной ТСХ (15% MeOH/CHCl3) получают соединение 18 (70 мг, 87,5%). Т.плавления 174-175oC. УФ: 264 нм, [
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
1H-ЯМР (DMSO-d6):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
К раствору соединения 13 в безводном дихлорметане (10 мл) добавляют бромистый водород в уксусной кислоте (45% вес/объем, 0,97 мл, 5,385 ммоля). Этот раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 13 часов, после выпаривания растворителя и совместного испарения с толуолом получают соединение 14. В то же самое время 5-этилурацил (0,75 г, 5,39 ммоля суспендируют в HMDS (10 мл) с сульфатом аммония (5 мг) и кипятят с обратным холодильником в течение 5 часов в атмосфере азота до получения гомогенного раствора. Раствор силилированного основания выпаривают досуха, избегая контакта с влагой. К полученному сиропу добавляют раствор соединения 14 в безводном 1,2-дихлорэтане (10 мл). Реакционную смесь перемешивают при 95oC в атмосфере азота в течение 20 часов, затем выпаривают в вакууме досуха до получения твердого вещества желтого цвета, которое смешивают с CH3OH/CHCl3 (1:1) и фильтруют. Полученный фильтрат выпаривают до получения остатка, который обрабатывают на хроматографической колонке (CH3OH/CHCl3, 0-1%) до получения твердого вещества белого цвета, соединение 19 (0,557 г, 100%). 1H-ЯМР (DMSO-d6):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/img_pat/40/401942.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
Соединение 19 (500 мг) растворяют в метанольном аммиаке (50 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение 44 часов. Полученный раствор выпаривают досуха до получения твердого вещества белого цвета (0,4 г), которое обрабатывают на хроматографической колонке с силикагелем (CH3OH/CHCl3, 0-5%) до получения твердого вещества белого цвета, соединение 20 (240 мг, 84%). Т. плавления 158-161oC. УФ (MeOH):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
К раствору соединения 13 (150 мг, 0,323 ммоля) в безводном метиленхлориде (5 мл) добавляют бромистый водород в уксусной кислоте (45% вес/объем, 0,29 мл, 1,615 ммоля). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 9,5 часов. После выпаривания растворителя и совместного испарения с толуолом получают соединение 15 в виде сиропа желтого цвета. В то же самое время N4-бензоил-5-иодоцитозин (550 мг, 1,615 ммоля) суспендируют в HMDS (8 мл) с сульфатом аммония (3 мг) и кипятят с обратным холодильником в течение 5 часов в атмосфере азота до получения гомогенного раствора. Раствор силилированного основания выпаривают досуха, избегая контакта с влагой. К полученному сиропу добавляют раствор соединения 14 в безводном 1,2-дихлорэтане (10 мл). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 23 часов, затем выпаривают досуха до получения сиропа коричневого цвета, который тщательно растирают с хлороформом (30 мл). Полученный осадок отфильтровывают и промывают хлороформом. Полученный фильтрат и промывки объединяют и выпаривают до получения сиропа коричневого цвета. Полученную смесь разделяют с помощью хроматографической колонки с силикагелем (CH3OH)CHCl3, 0-1%) до получения твердого вещества белого цвета, соединения 21 (100 мг, 45%). 1H-ЯМР (CDCl3);
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
Соединение 21 (100 мг, 0,27 ммоля) обрабатывают насыщенным NH3/MeOH (60 мл) при комнатной температуре в течение 24 часов. В результате хроматографической обработки на силикагеле (0-10% CH3OH/CHCl3) получают соединение 22 (35 мг, 71%) в виде твердого вещества белого цвета. [
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
1H-ЯМР (DMSO-d6):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
К раствору соединения 13 (260 мг, 0,56 ммоля) в 10 мл безводного CH2Cl2 добавляют HBr/AcOH (45%, вес/объем, 0,5 мл, 2,8 ммоля). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 36 часов, а затем выпаривают досуха. Остаток растворяют в 20 мл CH2Cl2, промывают водой (10 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (10 мл) и сушат над сульфатом магния. После фильтрования и выпаривания получают бромосахар - соединение 14 в виде сиропа. В то же самое время 5-иодоурацил (270 мг, 1,12 ммоля) суспендируют в 10 мл HMDS и кипятят с обратным холодильником в течение 36 часов до получения гомогенного раствора. Его выпаривают
в вакууме досуха. К этому добавляют раствор соединения 14 в безводном 1,2-дихлорэтане, и полученный раствор кипятят с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 1,5 дней. Добавляют CHCl3 (20 мл), и полученный раствор промывают последовательно водой (10 мл), рассолом (10 мл) и насыщенным раствором бикарбоната натрия (10 мл), а затем сушат над сульфатом магния. После удаления растворителя получают сироп, который кристаллизуют из CH2Cl2 до получения соединения 23 в виде твердого вещества желтого цвета (237 мг, 73%). Часть его (70 мг) перекристаллизовывают из 2-изопропанола до получения твердого вещества белого цвета (67 мг). УФ (метанол):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
Соединение 23 (40 мг, 0,069 ммоля) растворяют в 25 мл насыщенного NH3/MeOH и перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов, а затем выпаривают досуха. Полученный сироп очищают с помощью препаративной ТСХ (5:1/CHCl3:MeOH) до получения соединения 24 в виде твердого вещества (19 мг, 74%). УФ (MeOH):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
1H-ЯМР (DMSO-d6):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
Как проиллюстрировано на фиг. 9, 30 грамм (0,2 моля) порошка L-арабинозы (5), а затем 0,4 мл концентрированной серной кислоты добавляют к 600 мл (14,8 молей) безводного метанола. Эту суспензию перемешивают и нагревают при слабом кипении с обратным холодильником до получения прозрачного раствора в течение 2 часов. Затем реакционную смесь нейтрализуют 1,5 г бикарбоната натрия, сушат над сульфатом магния, а затем выпаривают в вакууме до получения густого сиропа (соединение 6), который разбавляют 50 мл свежеочищенного тетрагидрофурана, и снова концентрируют (35-40oC баня) для удаления остаточного метанола. Добавляют свежеочищенный тетрагидрофуран (400 мл), и полученную смесь обрабатывают 30 г Drierite, 156 г (2,78 моля) гидроксида калия и 200 мл (1,74 моля) бензилхлорида. Полученную смесь нагревают при слабом кипении с обратным холодильником в течение ночи, охлаждают, фильтруют через тонкий слой целита и концентрируют в вакууме, а затем при высоком вакууме и 100oC (баня). Неочищенный сиропообразный метил-2, 3,5-три-O-бензил-L-арабинозид (7) растворяют в 400 мл ледяной уксусной кислоты. Гидролизную смесь нагревают до 65-70oC в течение 2 часов, концентрируют в вакууме до одной трети объема и выливают в 2,5 л смеси льда и воды. После введения затравки (затравочные кристаллы были исходно получены хроматографически при элюировании дихлорметаном), полученную смесь выдерживают при 5oC в течение ночи. Водный слой декантируют из частично кристаллической массы, и последнюю растворяют в 200 мл дихлорметана. Полученный раствор промывают холодным водным бикарбонатом натрия, сушат над сульфатом магния, фильтруют через тонкий слой обесцвечивающего угля и концентрируют в вакууме до получения сиропа, который растворяют в 200 мл циклогексана. После введения затравки раствор выдерживают при комнатной температуре в течение 1 часа, а затем при 5oC в течение ночи до получения 27,7 г (33,2%) 2,3,5-три-O-бензил- L-арабинозы (8). Т.плавления 68-73oC. [
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
УФ (MeOH)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
Соединение 8 (фиг. 9) (2 г, 4,76 ммоля) растворяют в 7,5 мл дихлорметана, к этому раствору добавляют раствор 0,95 г (5,1 ммоля) p-нитробензоилхлорида в смеси 5 мл дихлорметана и 1,5 мл пиридина. Реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре в течение ночи, а затем промывают последовательно 1 н. соляной кислотой (10 мл x 2), водным бикарбонатом натрия (10 мл x 2) и водой (30 мл x 3). Влагу удаляют с помощью Na2SO4, полученный раствор концентрируют в вакууме до получения 2,67 г (98,4%) смеси аномеров соединения 9. Т.плавления 68-82oC. Дополнительная очистка на хроматографической колонке с силикагелем (гексан:ацетон 8:1) обеспечивает температуру плавления 89-93oC; [
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
УФ (MeOH)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
1H-ЯМР (250 МГц, CDCl3):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
0,444 г (3,52 ммоля) тимина и 2 мг сульфата аммония суспендируют в гексаметилдисилазане (10 мл); суспензию кипятят с обратным холодильником (140oC) в течение ночи в атмосфере азота до получения прозрачного раствора. Избыток гексаметилдисилазана удаляют в вакууме, избегая при этом контакта с влагой, в результате чего получают сироп-соединение 11. Соединение 9 (1 г, 1,76 ммоля) добавляют к 17 мл дихлорметана, предварительно насыщенного безводным хлористым водородом при 0oC. Спустя 2 часа при 0oC осажденную p-нитробензойную кислоту (0,25 г) удаляют фильтрованием, и полученный фильтрат концентрируют в вакууме до получения сиропа, а затем выдерживают в высоком вакууме при комнатной температуре в течение 2 часов, в результате чего получают 2,3,5-три-O-бензил-
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/img_pat/40/401943.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
Палладийхлорид (680 мг, 3,835 ммоля) суспендируют в 100 мл метанола и восстанавливают, встряхивая при комнатной температуре в атмосфере водорода. Затем раствор 450 мг соединения 12 в 25 мл метанола добавляют к подкисленной суспензии палладиевой черни. Реакционную смесь встряхивают при комнатной температуре в атмосфере водорода в течение 38 часов. После удаления катализатора раствор нейтрализуют Dowex (HCO3) до pH 7 и концентрируют в вакууме до получения твердого вещества белого цвета, которое после перекристаллизации из этанола дает соединение 13 (105 мг, 47,7%). Т.плав. 244-249oC. [
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
1H-ЯМP (300 МГц, DMSO-d6):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
Рассчитано: C 46,51 H 5,46 N 10,85
Найдено: C 46,67 H 5,63 N 10,56
1-(2,3,5-три-O-бензил-
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
Цитозин (0,61 г, 6 ммолей) и сульфат аммония (2 мг) суспендируют в гексаметилдисилазане (15 мл), и все это кипятят с обратным холодильником (140oC) в атмосфере азота в течение 2 часов до получения прозрачного раствора. Смесь силилированного цитозина выпаривают досуха в вакууме, не допуская контакта с влагой, до получения соединения 14 в виде сиропа. Соединение 9 (2,82 г, 5 ммолей) добавляют к 47 мл сухого дихлорметана, предварительно насыщенного безводным хлористым водородом при 0oC. Спустя 2 часа при 0oC выпавшую в осадок p-нитробензойную кислоту (0,807 г) удаляют фильтрованием, полученный фильтрат концентрируют в вакууме до получения соединения 10, - 2,3,5-три-O-бензил-
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/img_pat/40/401944.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
Палладийхлорид (315 мг, 1,78 ммоля) суспендируют в 160 мл метанола и восстанавливают, встряхивая при комнатной температуре в атмосфере водорода. К этой кислотной суспензии палладиевой черни добавляют раствор 300 мг соединения 15 в 15 мл метанола. Реакционную смесь встряхивают с водородом при комнатной температуре в течение 3 часов. После удаления катализатора полученный раствор нейтрализуют Dowex (HCO3), концентрируют в вакууме, а затем очищают с помощью препаративной ТСХ (MeOH:CHCl3, 3:5) до получения сиропа, который растворяют в 3 мл метанола, в который добавляют 1% раствора HCl в MeOH до pH 1, концентрируют досуха и тщательно растирают с 2-пропанолом, в результате чего получают 36 мг (22,1%) соединения 16. Т.плавления 190-194oC [
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
5 мл 1М треххлористого бора в дихлорметане охлаждают до -72oC (сухой лед-ацетон). К раствору треххлористого бора медленно добавляют раствор соединения 15 (180 мг, 0,351 ммоля) в 3 мл дихлорметана. После 2,75 часа (полное время реакции) охлаждающую ванну удаляют, растворитель и газ удаляют в вакууме. Остаток растворяют в холодном дихлорметане (10 мл) и полученный раствор выпаривают досуха (трижды, пока не получают остаток белого твердого вещества), добавляют холодный насыщенный раствор бикарбоната натрия для установления pH 6-7. Полученную смесь разбавляют этанолом, нагревают до кипения, обрабатывают древесным углем и фильтруют. Полученный фильтрат выпаривают досуха, получая сироп, который растворяют в 3 мл метанола, добавляют 1% раствор HCl в метаноле до pH 1, концентрируют досуха и тщательно растирают с 2-пропанолом до получения соединения 16 (66 мг, 78,4%). 9-(2,3,5-три-O-бензил-
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
Тщательно высушенное соединение 9 (5 г, 8,8 ммоля) добавляют к 82 мл дихлорметана, предварительно насыщенного безводным хлористым водородом при 0oC. После 2 часов реакции при 0oC выпавшую в осадок p-нитробензойную кислоту (1,53 г) удаляют фильтрованием, а полученный фильтрат концентрируют в вакууме до получения сиропа, который выдерживают в полном вакууме при комнатной температуре в течение 2 часов. Полученный таким образом 2,3,5-три-O-бензил-
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/img_pat/40/401945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
УФ (CH2Cl2):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
1H-ЯМР (250 МГц, CDCl3):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
Треххлористый бор (5 мл, 1М) в дихлорметане охлаждают до -72oC (сухой лед-ацетон). Раствор соединения 18 (150 мг, 0,279 ммоля) в 5 мл дихлорметана медленно добавляют к раствору треххлористого бора. После 3,5 часов реакции охлаждающую ванну удаляют, а растворитель и газ удаляют в вакууме. Остаток растворяют в холодном дихлорметане (10 мл), полученный раствор выпаривают досуха (6 раз, до получения твердого вещества желтого цвета). Холодный насыщенный раствор бикарбоната натрия добавляют для установления pH 7-8. Полученную смесь разбавляют этанолом, нагревают до кипения, суспензию фильтруют через целит, полученный фильтрат концентрируют в вакууме до сиропа, который кристаллизуют из воды. Выход соединения составил 55 мг (74%). Т. плавления 256-258oC. УФ (H2O):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/955.gif)
1H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d6):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
К 650 мл безводного ацетона добавляют 4 мл концентрированной серной кислоты, 5 г молекулярных сит
![](https://img.poleznayamodel.ru/img_pat/40/401946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
Соединение 3 (41 г, 215,6 ммоля) перемешивают в пиридине (150 мл) и CH2Cl2 (150 мл) при 0oC. BzCl (27,5 мл, 237 ммоля), растворенного в 30 мл пиридина, добавляют к этой смеси по каплям. Спустя 30 минут, добавляют 5 мл воды, полученную смесь выпаривают досуха, растворяют в EtOAc, промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия и сушат над безводным сульфатом натрия. После выпаривания растворителя получают сироп оранжевого цвета, который кристаллизуют из Et2O, получая соединение 20 (36 г). Маточный раствор выпаривают досуха, а остаток очищают на хроматографической колонке с силикагелем (1% CH3OH/CHCl3) до получения другой порции соединения 25 (12 г, всего выход 76%). Т.плавления 82-83oC (литерат.1 Dформа 83,5-84,5oC). 1H-ЯМР (CDCl3):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
Соединение 25 (40 г, 136 ммолей) перемешивают в 450 мл CH2Cl2. К этой смеси добавляют пиридинийдихромат (PDC, 30,7 г, 81,6 ммоля) и Ac2O (42,3 мл, 448,8 ммоля). Полученную смесь концентрируют до 1/5 ее начального объема, а затем в нее добавляют EtOAc (50 мл). Полученный раствор фильтруют, полученный фильтрат выливают на слой силикагеля (10 см x 5 см), элюируют EtOAc, объединенный элюат концентрируют и совместно испаряют с толуолом (50 мл x 2). После кристаллизации из гексана и EtOAc получают соединение 26 в виде твердого вещества белого цвета (38 г, 96%). Т.плавления 91-93oC, [
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/176.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
Найдено: C 61,42 H 5,53. 1,2-ди-O-изопропилиден-
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
Соединение 26 (37 г, 127 ммолей) растворяют в EtOH/H2O (400 мл/100 мл) при 0oC, добавляя порциями NaBH4 (23,3 г, 612 ммолей). Полученную суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов. Ее фильтруют и полученный фильтрат выпаривают досуха и испаряют совместно с метанолом. После хроматографической обработки на силикагеле (0-15%, CH3OH/CH2Cl2) и кристаллизации из EtOAc/гексан получают соединение 27 в виде иголок белого цвета (19 г, 79%). Т.плавления 86-87oC, [
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/176.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
Найдено: C 50,62 H 7,46. 3,5-ди-O-бензоил-1,2-ди-O-изопропилиден-
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
Соединение 27 (19 г, 100 ммолей) перемешивают в 300 мл пиридина при 0oC, прикапывая при этом BzCl (40 мл, 348 ммоля), а затем перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Растворитель выпаривают досуха. Остаток экстрагируют EtOAc, промывают насыщенным раствором NaHCO3, сушат над сульфатом натрия, выпаривают растворитель и кристаллизуют из эфира, получая соединение 28 в виде твердого вещества белого цвета (39 г, 98%). Т.плавления 83-85oC. 1H-ЯМР (CDCl3):
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
Найдено: C 66,32 H 5,57. 1-O-ацетил-2,3,5-три-O-бензоил-
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
Соединение 23 (38 г, 95 ммолей) перемешивают в 300 мл 1% HCl/CH3OH при комнатной температуре в течение 30 часов, добавляют 20 мл пиридина, а затем раствор выпаривают досуха. Остаток выпаривают совместно с пиридином (30 мл x 2), а затем растворяют в 100 мл безводного пиридина, прикапывая BzCl (17 мл, 146 ммолей) при 0oC, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Растворитель выпаривают, а остаток растворяют в EtOAc, промывают 0,5 н. HCl, затем насыщенным NaHCO3, сушат над сульфатом натрия. После выпаривания растворителя получают сырое соединение 30 в виде сиропа. Это неочищенное соединение перемешивают в ледяной уксусной кислоте (400 мл), а затем Ac2O (100 мл) при 0oC, прикапывая концентрированную серную кислоту (10 мл). Этот раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Полученную смесь выливают в смесь лед-вода, экстрагируют CHCl3, нейтрализуют насыщенным раствором бикарбоната натрия, а затем сушат над сульфатом магния. После испарения растворителя получают светложелтый сироп, который кристаллизуют из метанола до получения соединения 31 в виде твердого вещества белого цвета (23,89 г, 49,6%, от 28-31). Т.плавления 124,7oC [
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/945.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/948.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/img_pat/40/401947.gif)
Раскрытые здесь соединения могут быть оценены в плане их активности против HBV и EBV, как подробно описано далее, или другими способами, известными специалистам. Пример 1. Биологическая активность против HBV
Используют клетки гепатомы человека с HBV (2.2.15 клетки) в этом анализе. Эти клетки выращивают до слияния в питательной среде с минимальным необходимым набором с 10% сывороткой плода теленка. Среду заменяют с трехдневными интервалами. При слиянии начинают обработку лекарствами, а затем продолжают ее в течение 3 дней. Еще раз добавляют ту же концентрацию лекарства после удаления среды из культур, и выдерживают эти культуры в течение еще 3-х дней. Среду после шестидневной обработки собирают, и вирусные частицы осаждают с использованием полиэтиленгликоля. Затем частицы переваривают, и проводят Southern анализ. Полученные блоты гибридизируют с HBV-специфическим зондом и оценивают количество вирусных ДНК по сравнению с уровнями ДНК из культур, которые не были обработаны лекарствами. Геномную ДНК переваривают Hind 111 и проводят Southern анализ. Уровни эписомальной ДНК определяют по отношению к интегрированной HBV ДНК. Рассчитывают концентрации лекарств, которые вызывают 50% ингибирование ДНК (ID50) по сравнению с контрольными образцами. Полученные результаты суммированы в таблице 1. Пример 2. Биологическая активность против EBV
H1 клетки поддерживают в длительной фазе роста в течение двух дней перед началом первичной обработки. Клетки центрифугируют при 600 g в течение 10 минут при комнатной температуре для того, чтобы отделить их от среды, содержащей существовавшие ранее вирусные частицы. H1 клетки высеивают в пластины с 24 ячейками при плотности 1
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/8226.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/8226.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/8226.gif)
Оценивают очистку плазмы и печени мышей от L-(-)-FMAU после орального введения. Мышам вводят L-(-)-FMAU, меченые тритием (радиоспецифичность 9,3 мкмоль/мкКюри). Фиг. 11 представляет график зависимости концентрации L- (-)-FMAU в плазме мышей после орального введения от времени, а фиг. 12 представляет график зависимости концентрации L-(-)- FMAU в печени мышей после орального введения от времени (перекрестно, 10 мг/кг вводят дважды в день в течение 30 дней перед фармакокинетическими исследованиями, а затем проводят исследования на тридцать первый день, после введения той же самой концентрации; заштрихованные кружки - введение 50 мг/кг дважды в день в течение 30 дней перед исследованиями, а затем на тридцать первый день проводят исследования после введения той же концентрации; незаштрихованные кружки - введение в первый раз 50 мг/кг в первый день исследования). В указанные моменты времени (см. фиг. 10 и 11) у мышей отбирают кровь из ретро-орбитального синуса, используя обработанные гепарином капилляры. Плазму экстрагируют трихлоруксусной кислотой и нейтрализуют фреоном/триоктиламином. Надосадочные жидкости измеряют напрямую и рассчитывают концентрации. Как показано на фиг. 10 и 11, пиковая концентрация L-(-)-FMAU в печени и плазме наблюдается примерно через один час. Соединение практически выводится как из плазмы, так и из печени спустя четыре часа. Пример 4. Токсичность L-(-)-FMAU для самок мышей BDF1
Фиг. 13a иллюстрирует изменение веса тела через тридцать дней у контрольных BDF1 самок мышей. Фиг. 13b и 13c иллюстрируют изменения веса тела через 30 дней у самок мышей BDF1, которым вводят 10 мг/кг (13b) и 50 мг/кг (13c) дважды в день L-(-)-FMAU. Вес тела представлен репрезентативно как среднее и стандартное отклонение для 5-7 мышей. Как видно из фиг. 13 и 13c, L-(-)-FMAU, по-видимому, не оказывает серьезного влияния на вес мышей в течение тридцати дней, что указывает на хорошую переносимость соединения. Пример 5. Клинический анализ плазмы мышей после обработки L-(-)-FMAU
На фиг. 14-20 представлены результаты клинических анализов химического состава плазмы мышей после введения L-(-)-FMAU в дозах 10 мг/кг (три мыши) или 50 мг/кг (три мыши) дважды в день в течение тридцати дней. Фиг. 14 представляет график концентрации общего количества билирубина в плазме мышей в мг/дл. Фиг. 15 представляет график концентрации щелочной фосфатазы в мышиной плазме в Ед/л. Общее количество билирубина и щелочная фосфатаза являются показателями функционирования печени. Значения билирубина у мышей попадают в нормальный интервал значений для человека (менее чем 1,2 мг/дл), но значения для щелочной фосфатазы несколько выше нормального уровня для человека (30-114 Ед/л). Фиг. 16 представляет график концентраций креатинина в мышиной плазме в мг/дл. Креатинин является показателем функций печени. За исключением мыши 50-2 уровни креатинина у обработанных мышей не отличаются от уровней у контрольных мышей. Фиг. 17 представляет график концентрации AST (SGOT, сывороточная глутаминовая щавелевая трансаминаза) в мышиной плазме в Ед/л. Фиг. 18 представляет график концентраций AST (SGPT, сывороточная глутаминовая пировиноградная трансаминаза) в мышиной плазме в Ед/л. SGOT и SGPT являются показателями функции печени. За исключением мыши 50-2 (как для SGOT, так и для SGPT) и мыши 10-2 (только для SGOT) уровни энзимов обработанных мышей не отличаются от уровней, наблюдаемых у контрольных животных. Фиг. 19 представляет график концентраций молочной кислоты в мышиной плазме в ммоль/л. Фиг. 20 представляет график концентраций молочной дегидрогеназы в мышиной плазме в Ед/л. Молочная кислота вырабатывается в мышцах при гликолизе. Молочная дегидрогеназа (LDH) присутствует в виде различных изоэнзимов в различных тканях. Выделение LDH в плазму может служить показателем повреждений тканей. Уровни молочной кислоты и молочной дегидрогеназы у обработанных мышей не отличаются заметно от уровней для контрольных животных. III. Олигонуклеотиды
Олигонуклеотиды желательных последовательностей можно модифицировать, замещая один или более из L-нуклеозидов, раскрытых здесь, на нуклеозид в олигонуклеотиде. В предпочтительном варианте L-нуклеозид помещают на один конец олигонуклеотида. Модифицированный олигонуклеотид можно использовать, например, в антисмысловой технологии. Антисмысловая технология относится обычно к модуляции генной экспрессии путем процесса, в котором синтерический нуклеотид гибридизуют с комплементарной последовательностью нуклеиновой кислоты, чтобы ингибировать транскрипцию или репликацию (если мишеневой последовательностью является ДНК), ингибировать трансляцию (если мишеневой последовательностью является РНК) или ингибировать процессинг (если мишеневой последовательностью является пре-РНК). Используя эту методику, можно модулировать широкий круг клеточных активностей. Простым примером может служить ингибирование биосинтеза протеинов за счет антисмыслового олигонуклеотида, связанного с мРНК. В другом варианте, синтетический олигонуклеотид гибридизуют со специфической генной последовательностью в двухцепочной ДНК, образуя трехцепочный комплекс (триплекс), который ингибирует экспрессию этой генной последовательности. Антисмысловые олигонуклеотиды можно также использовать для активации генной экспрессии косвенным путем, подавляя биосинтез природного репрессора. АОТ можно использовать для подавления экспрессии патогенных генов, например, тех, которые облегчают репликацию вирусов, включая вирус иммунодефицита человека (HIV), вирус гепатита B (HBV) и герпесвирус, а также раковые заболевания, особенно твердые опухоли, такие, как глиомы, рак молочной железы и меланомы. Стабильность выбранного олигонуклеотида по отношению к нуклеазам представляет важный фактор для применений ин виво. Известно, что 3'-экзонуклеазная активность ответственна за разрушение немодифицированных антисмысловых олигонуклеотидов в сыворотке (Влассов В.В., Якубов Л.А., Prospects for Antisense Nucleic Acid Therapy of Cancer and AIDS, 1991, 243-266, Wiley-Liss, Inc. , New York; Nucleic Acids Res., 1993, 21, 145). В одном варианте раскрытые здесь L-нуклеотиды можно использовать для минимизации 3'-экзонуклеазой антисмысловых олигонуклеотидов. Олигонуклеотиды настоящего изобретения, которые способны связываться с полирибонуклеиновой кислотой или полидеоксирибонуклеиновой кислотой, можно использовать в качестве антисмысловых агентов таким образом, что и обычные антисмысловые агенты. См., в основном: Antisense Molecular Biology and S-oligos, Synthesis 1 (Oct. 1988) (опубликовано Synthecell Corp., Rockville, Md. ); 2 Discoveries in Antisense Nucleic Acids (C.Brakel and R.Fraley eds. 1989); Uhlmann, et. al. , "Antisense Oligonucleotides: A New Therapeutic Technique", Chem.Rev. 90 (4), 1990; и Milligan J.F., Matteucci M.D., Martin J. C. , J. Med.Chem., 1993, 36, 1923-1937. Антисмысловые агенты настоящего изобретения можно использовать, конструируя антисмысловой агент, который способен селективно связываться с заранее определенной последовательностью полидеоксирибонуклеиновой кислоты или последовательностью полирибонуклеиновой кислоты с клеткой, содержащей такую последовательность (например, добавляя антисмысловой агент в культурную среду, содержащую такую клетку), так, чтобы антисмысловой агент был захвачен клеткой, связался с заранее определенной последовательностью и блокировал бы ее транскрипцию, трансляцию или репликацию. Требования для селективного связывания антисмыслового агента известны (например, длина 17 оснований для селективного связывания с геномом человека). IV. Получение фармацевтических композиций
Раскрытые здесь соединения и их фармацевтически приемлемые соли, пролекарства и производные можно использовать для профилактики и лечения инфекций HBV и EBV, а также других родственных состояний, таких как анти-HBV или анти-EBV позитивные антитела и HBV- или EBV-позитивные состояния, хронические воспаления печени, вызванные HBV, циррозы, острые гепатиты, фульминантные (скоротечные) гепатиты, хронические персистентные гепатиты и утомляемость. Эти соединения или композиции можно также использовать в профилактических целях для предотвращения или замедления развития клинических заболеваний у индивидуумов с анти-HBV и анти-EBV антителами или HBV- или EBV- позитивными антигенами, или тех, кто находился в контакте с HBV или EBV. Пациентов с любым из этих состояний можно лечить, вводя им эффективное HBV- или EBV-лечащее количество одного из описанных здесь активных соединений или их смеси, или фармацевтически приемлемого производного или его соли, выборочно, в фармацевтически приемлемом носителе или разбавителе. Активные вещества можно вводить любым подходящим способом, например, парэнтерально, перорально, внутривенно, подкожно, через кожу или наружно, в жидкой или твердой форме. Активное соединение включают в фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель в количестве, достаточном для доставки в организм пациента терапевтически эффективного количества, которое не вызывает серьезных токсических эффектов у проходящего лечение пациента. Предпочтительной дозой активного соединения для всех вышеперечисленных состояний будет доза в интервале от около 1 до 60 мг/кг, предпочтительно от 1 до 20 мг/кг веса тела в день, обычно от 0,1 до около 100 мг/кг веса тела в день. Эффективный интервал доз можно подсчитать на основании веса исходного нуклеозида, который следует внести. Если производное само проявляет активность, то эффективную дозу можно установить, как указано выше, используя вес производного, или другими методами, известными специалистам. В одном варианте активное соединение вводят в соответствии с указаниями на вкладыше к лекарственному продукту или в Physician's Desk Reference (Настольный справочник врача) по 3'-азидо-3'-деокситимидину (AZT), 2',3'-дидеоксиинозину (DDI), 2'3'-дидеоксицитидину (DDC) или 2',3'-дидеокси-2',3'-дидегидротимидину (D4T) для HIV индикации. Соединение обычно вводят в виде отдельной подходящей дозированной формы, включающей, но не ограничиваемой этим, дозу, содержащую от 7 до 3000 мг, предпочтительно, от 70 до 1400 мг активного ингредиента на единичную дозовую форму. Обычно удобна оральная доза 50-1000 мг. В идеале активный ингредиент следует вводить для достижения пиковой концентрации активного соединения в плазме от около 0,2 до 70 мкМ, предпочтительно от около 1,0 до 10 мкМ. Этого можно достичь, например, за счет внутривенного введения от 0,1 до 5% раствора активного ингредиента, как вариант, в физиологическом растворе или в виде пилюли с активным ингредиентом. Активное соединение можно приготовить в форме фармацевтически приемлемой соли. В том смысле, как здесь использован, термин фармацевтически приемлемые соли или комплексы, относится к солям или комплексам нуклеозидов, которые сохраняют нужную биологическую активность исходного соединения и демонстрируют минимальные, если вообще демонстрируют, нежелательные токсические эффекты. Нелимитирующими примерами таких солей могут служить (a) соли присоединения неорганических кислот (например, соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, азотной кислоты и т.п.) и соли таких органических кислот, как уксусной кислоты, щавелевой кислоты, виннокаменной кислоты, янтарной кислоты, малеиновой кислоты, аскорбиновой кислоты, бензойной кислоты, дубильной кислоты, памоевой кислоты, альгиновой кислоты, полиглутаминовой кислоты, нафталинсульфокислоты, нафталиндисульфоновой кислоты и полигалактуроновой кислоты; (b) соли присоединения оснований, образованные с такими катионами, как натрий, калий, цинк, кальций, висмут, барий, магний, алюминий, медь, кобальт, никель, кадмий и т.п., или с такими органическими катионами, как образованные N,N-дибензилэтилендиамином, аммиаком или этилендиамином; или (c) сочетанием (a) и (b), например, соль танната цинка и т.п. Модификации активного соединения, конкретно, по N6 или N4 и 5'-O положениям, могут повлиять на биоусвояемость и скорость метаболизма активных соединений, обеспечивая контроль за поступлением активного соединения. Концентрация активного соединения в лекарственной композиции зависит от скоростей абсорбции, инактивации и выделения лекарства, а также от других факторов, известных специалистам. Следует отметить, что величина дозы зависит от серьезности состояния пациента, которое следует облегчить. Также следует понимать, что для конкретного субъекта конкретный дозовый режим с течением времени должен изменяться в соответствии с индивидуальными потребностями и профессиональным опытом проводящего лечение врача, и приведенные здесь диапазоны концентраций являются лишь примерами и никоим образом не должны ограничивать объем изобретения или практическое применение заявленных композиций. Активный ингредиент можно принимать сразу или его можно разделить на несколько более мелких доз и принимать с различными интервалами между приемами. Предпочтительным способом введения активного соединения является оральный. Оральные композиции обычно включают инертный разбавитель или съедобный носитель. Они могут быть заключены в желатиновые капсулы или могут быть запрессованы в таблетки. Для целей орального терапевтического приема активное соединение может быть включено в эксципиенты и использовано в форме таблеток, лепешек или капсул. Частью композиции могут быть фармацевтически совместимые связующие агенты и/или адъюванты. Таблетки, пилюли, капсулы, лепешки и т. п. могут содержать любые из следующих ингредиентов или соединений аналогичной природы: такие связующие, как микрокристаллическая целлюлоза, смола трагаканта или желатин; такие эксципиенты, как крахмал или лактоза, такие разрыхлители, как альгининовая кислота, Примогель или кукурузный крахмал, такие скользящие вещества, как стеарат магния или Sterotes или коллоидная двуокись кремния; подслащивающий агент, такой как сахароза или сахарин; или вкусовые агенты, такие как мята, метилсалицилат или апельсиновый концентрат. Если единичная дозовая форма представляет собой капсулу, она может содержать, помимо указанных выше типов, также такой жидкий носитель, как жировое масло. Кроме того, дозированная единичная форма может содержать различные другие материалы, которые модифицируют форму единичной дозы, например, сахарные, шеллаковые или другие покрытия для приема внутрь. Активное соединение или его фармацевтически приемлемую соль, или его производное можно вводить как составную часть эликсира, суспензии, сиропа, вафель, жевательной резинки и т.п. Сироп может содержать, помимо активных соединений, сахарозу в качестве подслащивающего агента и некоторые консерванты, красители и отдушки. Активное соединение или фармацевтически приемлемое производное, или его соль можно также смешивать с другими активными материалами, которые не обладают желаемым действием, или материалами, которые дополняют нужное действие, например, с антибиотиками, противогрибковыми препаратами, противовоспалительными или другими антивирусными препаратами, включая анти-HBV, анти-EBV, антицитомегаловирус или анти-HIV или анти-EBV агенты. Растворы или суспензии, используемые для парэнтерального, внутрикожного, подкожного или наружного применения могут включать следующие компоненты; стерильные разбавители, такие как вода для инъекций, физиологический раствор, нелетучие масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль и другие синтетические растворители; такие антибактериальные агенты, как бензиловый спирт или метилпарабен; такие антиоксиданты, как аскорбиновая кислота или бисульфат натрия; такие хелатирующие агенты, как этилендиаминтетрауксусная кислота; такие буферы, как ацетаты, цитраты или фосфаты и такие агенты для регулирования тонуса, как хлорид натрия или декстроза. Препараты для парэнтерального введения могут быть заключены в ампулы, одноразовые шприцы или флаконы с многоразовыми дозами, изготовленные из стекла или пластика. Если препарат вводят внутривенно, предпочтительными носителями являются физиологический раствор или буферсодержащий физиологический раствор с фосфатным буфером (PBS). В предпочтительном варианте активное соединение готовят с такими носителями, которые защищали бы соединение от быстрого выведения из организма, например, в виде композиций с регулируемым выделением, включая имплантаты и микрокапсулированные системы доставки. Можно использовать биоразлагаемые биосовместимые полимеры, такие, как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевую кислоту, коллаген, полиортоэфиры и полимолочную кислоту. Способы получения таких композиций известны специалистам. Эти материалы можно также приобрести у Alza Corporation и Nova Pharmaceuticals, Inc. Липосомные суспензии (включая липосомы, мишенями для которых являются инфицированные клетки с моноклональными антителами к вирусным антигенам) также предпочтительны в качестве фармацевтически приемлемых носителей. Их можно получить в соответствии со способами, известными специалистам, например, как описано в патенте США N 4522811 (который включен в качестве ссылки). Так, например, липосомные композиции можно получить, растворяя соответствующий липид (липиды) (такой как стеароилфосфатидилэтаноламин, стеароилфосфатидилхолин, арахадоилфосфатидилхолин и холестерин) в неорганическом растворителе, который затем выпаривают, причем остается тонкая пленка сухого липида на поверхности сосуда. Затем в сосуд вводят водный раствор активного соединения или его монофосфатного, дифосфатного и/или трифосфатного производных. Затем этот сосуд вращают вручную, чтобы освободить липидный материал со стенок сосуда и диспергировать липидные фрагменты, в результате чего получают липосомную суспензию. Настоящее изобретение было раскрыто со ссылкой на его предпочтительные варианты. Другие варианты и модификации изобретения должны быть очевидны из предшествующего подробного описания изобретения. Все эти варианты и модификации входят в объем прилагаемой формулы изобретения.
Формула изобретения
![](https://img.poleznayamodel.ru/img_pat/40/401948.gif)
где R представляет собой остаток урацила, тимина, цитозина или пурина, который может быть замещен атомом галогена и алкилом;
R'' представляет собой атом водорода, ацил, алкил, монофосфат, дифосфат или трифосфат, или его фармацевтически приемлемые соли. 2. L-Нуклеозид формулы (1) по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль в качестве активного компонента фармацевтической композиции, обладающей анти-HBV или анти-EBV активностью. 3. L-Нуклеозид формулы (1) по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, обладающие анти-HBV или анти-EBV активностью. 4. L-Нуклеозид по п.1, который представляет собой 2'-фтор-5-метил-
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/946.gif)
РИСУНКИ
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21
Похожие патенты:
Изобретение относится к новым нуклеозидмонофосфатным производным с остатками липидных сложных эфиров общей формулы I, в которой R1, R2 представляют собой линейную или разветвленную насыщенную алкильную цепь, содержащую 1-20 атомов углерода; R3, R5 представляют собой водород, гидроксильные группы; R4 представляет собой гидроксильную группу; Х представляет собой атом серы, сульфинильную или сульфонильную группу; Y представляет собой атом кислорода; В представляет собой пуриновое и/или пиримидиновое основание при условии, что по крайней мере один из остатков R3 или R5 представляет собой водород; к их таутомерам, их оптически активным формам и рацемическим смесям, или их физиологически приемлемым солям неорганических и органических кислот и/или оснований, а также к способам их получения и к лекарственным средствам, содержащим упомянутые соединения
Изобретение относится к фармакологии, в частности к металлоорганическим соединениям, обладающим биологической активностью, которые могут найти применение в разработке лекарственных средств для профилактики и лечения ишемической болезни сердца
Изобретение относится к органической химии и может найти применение в биохимии, в медицине, в медикобиологических исследованиях
Изобретение относится к новым химическим соединениям - солям 3'-амидопроизводных (1'R, 5'R)-3'-аза-1'-(6-аминопуринил-9)-3'-дезоксигексопиранозил- 6'-дифосфата общей формулы где или Cat+ - катион щелочного металла, в качестве специфических флуоресцентных ингибиторов миозиновой аденозин-5'-трифосфатазы (АТФазы)
Способ получения рибонуклеозид-5'-фосфатов // 2091387
Изобретение относится к получению биологически активных веществ, конкретно рибонуклеозид-5'-фосфатов, находящих использование в медицине, биохимии, биологии
Изобретение относится к области биоорганической химии, в частности, к способу получения дезоксинуклеозил-51-трифосфатов общей формулы: где B - тимин-1-ил, цитозин-1-ил, аденин-1-ил или гуанин-1-ил, которые широко используются в молекулярной биологии, биотехнологии и медицине
Изобретение относится к сахарам, в частности к получению 2,2<SP POS="POST">1</SP>-0-ангидро-(1-β-D-арабинофуранозил) цитозина гидрохлорида, который обладает противовирусной и противолейкемийной активностью и используются в медицинской практике
Изобретение относится к новым нуклеозидмонофосфатным производным с остатками липидных сложных эфиров общей формулы I, в которой R1, R2 представляют собой линейную или разветвленную насыщенную алкильную цепь, содержащую 1-20 атомов углерода; R3, R5 представляют собой водород, гидроксильные группы; R4 представляет собой гидроксильную группу; Х представляет собой атом серы, сульфинильную или сульфонильную группу; Y представляет собой атом кислорода; В представляет собой пуриновое и/или пиримидиновое основание при условии, что по крайней мере один из остатков R3 или R5 представляет собой водород; к их таутомерам, их оптически активным формам и рацемическим смесям, или их физиологически приемлемым солям неорганических и органических кислот и/или оснований, а также к способам их получения и к лекарственным средствам, содержащим упомянутые соединения
Изобретение относится к способу получения аденозинтрифосфорной кислоты (АТФ) путем фосфорилирования аденозиндифосфорной кислоты (АДФ) в присутствии кислорода при температуре +37oС с помощью введения в водный раствор АДФ фосфористого водорода РН3, который в результате разложения и окисления дает фосфорную кислоту.
Изобретение относится к биоэнергетике
Изобретение относится к синтезу нуклеозидов и нуклеотидов и касается усовершенствованного способа фосфонирования 2', 3'-дидезоксинуклеозидов
Изобретение относится к моно-, ди- или три-сложным эфирам 2-амино-6-(C1-C5-алкокси)-9-( -D -арабинофуранозил)-9Н-пурина общей формулы (I) где арабинофуранозильный остаток замещен по 2'-, 3'- или 5'-положениям, а сложные эфиры образованы карбоновыми кислотами, в которых некарбонильная часть выбрана из н-пропила, трет-бутила, н-бутила, метоксиметила, бензила, феноксиметила, фенила, метансульфонила и сукцинила
Изобретение относится к области биоорганической химии, в частности, к способу получения дезоксинуклеозил-51-трифосфатов общей формулы: где B - тимин-1-ил, цитозин-1-ил, аденин-1-ил или гуанин-1-ил, которые широко используются в молекулярной биологии, биотехнологии и медицине
Изобретение относится к химии нуклеотидов, в частности к N-незащищенному 51-0- диметокситритилдезоксинуклеоэид-3 -Н-фосфонату ф-лы где В - аденозин, гуанозин или цитидин, который используют в качестве мономера в синтезе олигонуклеотидов Н-фосфонатным методом