Способ количественного определения сульфаниламидных лекарственных препаратов

 

СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУЛЬФАНИЛАМИДНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ путем Обработки анализируемой пробы растворг1ми соляной кислоты, нитрита натрия с последующим фотометрированием полученного раствора, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и точности, анализируемую пробу дополнительно обрабатывают раствором 3-(oL, /j-дикарбоксиэтил) роданина в присутствии боратного буферного раствора с рН 12.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1105791 А

3(511 G 01 N 21/78

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

FlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ф гдф q с

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ИаЬЯа., g ÿ

К АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3557433/23-04 (22) 22.02.83 (46) 30 ° 07,84. Бюл. М 28 (72). A.Ô.Ìûíêà, И.И.Копийчук, М.Л.Люта и A ° А.Биляк (71) Львовский государственный медицинский институт (53) 543.42.063 (088.8) (56) 1.Государственная фармакопея.

Х изд., 1968, с. 470-471, 646-648.

2.Коренман И.М. Фотометрический анализ. М., Химия, 1970, с.26-36 (прототнп). (54) (57) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУЛЬФАНИЛАМИДНЫХ ЛЕКАРСТВЕНHhIX I1PEIIAPAT0B TeM O P OT аНализируемой пробы растворами соляной кислоты, нитрита натрия с последующим фотометрированием полученного раствора, отличающийся тем, что, с целью повыаения чувствительности и точности, анализируемую пробу дополнительно обрабатывают раствором 3-(д., ф-дикарбоксиэтил) роданина в присутствии боратного буферного раствора с рН 12.

1105791

Изобретение относится к фармацевтическому анализу, касается количественного определения сульфаниламидных препаратов, например норсульфазола, сульфамонометоксина, стрептоцида в фармакопейных препаратах, лекарственных формах и биологических средахкрови и моче, и может быть использовано в центральных заводских лабораториях, контрольно-аналитических лабораториях аптекоупранлений, науч- 10 но-исследовательских .лабораториях для количественного определения сульфаниламидных препаратов в исследуемых объектах и изучения их метаболизма. 15

Известен способ определения сульфаниламидных лекарственных препаратов путем титрования раствора пробы анализируемого вещества нитритом натрия в присутствии индикатора j lj„

Недостатками данного способа являются его малая чувствительность (для одного анализа требуется 0,25 г вещества) и невысокая точность (A - "+ 3,5-4,5%) .

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату является способ количественного определения сульфаниламидных лекарственных препаратов путем последовательной обработки 30 анализируемой пробы растворами соляной кислоты, нитрита натрия, мочевины, тимола и щелочи с последующим фотометрированием полученного раствора f2 ) 55

Недостатками известного способа являются относительно невысокая чувствительность Ei малая его точность (А = 10,5%) . !

Цель изобретения — повышение чунст- 4() вительности и точности. способа.

Поставленная. цель достигается тем, что согласно способу количественного определения.сульфаниламидных лекарственных препаратов путем обработки анализируемой пробы растворами соляной кислоты, нитрита натрия с последующим фотометрированием полученного раствора анализируемую пробу дополнительно обрабатывают раствором

3-(oL,н-дикарбоксиэтил) роданина

I 1-в присутствии боратного буферного раствора с рН 12. 3-(oL,p-дикарбоксиэтил) роданин представляет собой светло-желтый кристаллический порошок, легко растворяющийся в ацетоне, диоксане, спирте в воде он малорастворим. Т.пл.

=140 С.

Пример 1. Количественное oiiределение сульфаниламидов н фармако-, мако- 60 пейных препаратах.

Точную нанеску 0,01 r исследуемого вещества (норсульфазола, стрептоцида или сульфамонометоксина) растворяют в 1 .н растворе соляной кислоты в мерной колбе на 25 мл. 0,1 мл полученного раствора помещают в другую мерную колбу на 25 мл, затем прибавляют 0,8 мл 1 н раствора хлоридной кислоты, 1 мл 1%-ного раствора нитрита натрия и 1 мл 0,1%-ного водного раствора реагента. Смесь хорошо взбалтывают и объем в колбе доводят до метки раствором боратного буфера и гидроксида натрия, при этом контролируют рН среды с помощью индикаторной бумаги, устанавливают рН 12. (способ приготовления боратного буфера описан ниже).

Окрашенный в красный цвет раствор колориметрируют на фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром при 1 - 500 нм, используют кювету с толщиной слоя 10,0 мм. Кювету сравнения заполняют раствором, состоящим из всех компонентов кроме исследуемого вещества. Содержание препарата в процентах рассчитывают по следующим формулам:

D — 0 005 100 25 10 п

НорC

1,6165 навеска(мг) D — 0,004

111 ст р

2,036

100 25 10 нанеска(мг) — D — Ор002 100 25 10 ш

С JR6(pOINOH .1,8122 .навеска(мг) где D — оптическая плотность (числа 0,005; 1,6165; 0,004; 2,036;

0,002; 1,8122 получены в результате математической обработки калибровочной кривой).

Для построения калибровочной кривой готонят стандартный раствор путем растворения. точной навески пре-. парата (0,01.г) н 25,0 мл 1 н раст-. вора соляной кислоты. 1 мл стандартного раствора содержит 0,4 мг.препарата. Исходя из стандартного раство-. ра готовят серию растворов с содержанием исследуемого вещества от 0„008 до 0,2 мг. Для этого в четыре колбы емкостью на 25 мл каждая помещают соответственно 0,02; 0,04; 0,06; 0,5 мл стандартного раствора. Для проведения реакции азосочетания к ним последонательно прибавляют

0,8 мл 1 н раствора соляной кислоты, 1,0 мл 1Ъ-ного раствора нитрита натрия и 1,0 мл 0,1Ъ-ного раствора реагента. Содержимое каждой колбочки хорошо взбалтывают и доводят до метки, используя смесь боратного буфера и гидроксида натрия. Для приготовления буферного раствора берут

12,367 r борной кислоты, растворяют ее в 100 мл 1 н раствора гидроксида натрия, доводят объем раствора до

1105791 ром при h = 500 нм, используют кювету с толщиной слоя 10,0 мм. Кювету сравнения заполняют раствором, состоящим из всех компонентов кроме исследуемого вещества.

5 Результаты для построения калибровочного графика приведены в табл.1.

Таблица 1

100,0 мл дистиллированной водой. К полученному раствору прибавляют

200 мл 0,1 н раствора гидроксида натрия °

Окрашенный в красный цвет раствор колориметрируют на фотоэлектроколориметре ФЕК-М с зеленым светофильтОптическая плотность (Р)

1 1

Концентрация, (С) МГ

Стрептоцид Сульфамонометоксин

Норсульфазол

0,015

0,008

0,016

0,03

0,024

0,20

Подчинение светопоглощения закону Бугера-Ламберта Вера сохраняется 35 в пределах концентраций 0,008

0,2 мг/мл для всех исследуемых лекарственных. препаратов.

П р и м. е р 2. Количественное определение сульфаниламидов в таб- 4О летках.

Точную навеску порошка таблеток норсульфазола, стрептоцида или сульфамонометоксина с содержанием препарата около 0,01 r растворяют в 1 н растворе соляной кислоты в мерной колбе на 25 мл. Спустя 30 мин смесь фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывают первые 5 мл фильтрата.

Из последующей порции отмеривают

0,1 мл и вносят в колбу на 25.мл. 50

Дальнейший анализ проводят аналогично .примеру 1.

Содержание препарата рассчитывают по формулам

Результаты количественного определения представлены в табл. 2.

Пример 3. Количественное определение сульфаниламидов в крови

Точный объем 0,5 мл сыворотки крови, содержащей 0,1-0,05 мг исследуемого препарата, помещают в пробирку с притертой пробкой и прибавляют

0,8 мл 1 н раствора соляной кислоты, 1 мл 1%-ного раствора нитрита натрия и 1 мл 0,1Ъ-ного раствора реагента.

Смесь хорошо взбалтывают и доводят . ее объем до 25 мл боратно-буферным раствором, при этом контролируют рН с помощью универсальной индикаторной бумаги, устанавливают рН 12. Окрашенный в красный цвет раствор колориметрируют на фотоэлектроколориметре

ФЕК-M аналогично примеру 1.

Содержание препарата в крови рассчитывают по формулам

D — 0,005 25.10 100 55

tn

1, 6165 навеска . препарата (мг) D — 0,005 норе

1,6165 V г/л

D — 0,004 25 10 100

D — 0,004

2,036 V

60 г/л стр

2,036 . навеска препарата(мг) D — 0,002

1,8122. V

D — 0,002 25 10 100 г/л навеска препарата(мг)65 с л аюн

0,040

0,080

0,120

0,140

0,160

0,180

0,045

0,070

0,135

0,20

0,250

0,260

0,300

0,330

0,020

0,035

0,050

0,085

0,170

0,250

0,290

0i330

0,370

0,410

0,020

0 i 030

0,045

0,075

0,145

0,220

0,255

0,295

0,330

0,365

1105791

Для анализа используют точный объем 0,1 .мл .мочи .с содержанием .препарата 0,08-0,04 мг и помещают в.пробирку .с притертой пробкой.

Дальнейший анализ проводят аналогично примеру 1..

Содержание препарата рассчитывают по формулам

D — 0,005

Норс

1,6165"0,1 мг/мл;

D — 0,004

Стр

2,036 0,1 мг/мл;

D — 0,002 мг/мл.

Al сУль Фс мо и

12,8122 0,1

Результаты количественного определения представлены в табл. 2.

Таблица 2.Neтрологические характеристики

Найдено

Препарат

Дано

В фармакопейном препарате мг/мл

0,0402

0,0395

0,0402

0,0804

0,0773

0,0804

0,0397

0,0407

0,0815

0,079

0,0815

0,0402

0,0991 0,0402

0,0789

0,0800 мг/мл п=6, х=100,15

0,04

100,50

98,75

Норсульфазол

0,04

6 =0,95,1-=0,42

100,50

100,50

0,04

0,08

0,08

1 = 1,07, А=+1,08%

0,08 п=5; х=100,70, 0,04

Стрептоцид

6 =1,566, 6- =0,70, 0,04

0,08

0,08

Эр =1,79, А=+1,78%

0 08

n=5, х=99,47

0,04

Сульфамонометоксин

6 =1,24, 6 — =0,55, 0,04

3 =1,42, А=+1,42ф

0,08

0,08 где Ч вЂ” объем сыворотки," мл. !

Результаты количественного определения представлены в табл. 2.

Пример 4. Количественное определение сульфаниламидов в крови животных

B желудок животных (крыс) предварительно вводят 0,5 г стрептоцида или норсульфазола,с помощью зонда.

Кровь от животных берут спустя 1,5 ч после приема. препарата. 30

Точный объем 1,0.мл сыворотки крови смешивают с 9,0 мл дистиллированной воды.

В колбу на 25 мл вносят 0,1 мл сыворотки, полученной при разбавле- 15 нии, и проводят анализ аналогично примеру 3.

Результаты определения представлены в табл, 2.

Пример 5. Количественное 2О . определение сульфаниламидных препаратов в моче, 96,62

100 50

99,25

101,75

101,87

98,75

101,87

100,50

97,75

100,50

98,62

100,00

1105791

Продолжение таблицы 2

4 (2

В лекарственных формах (таблетках) Норсульфазол

0,04

100,50

100,50

97,25

97,25

0,04

0,04

0,04

0,04

99,25

99,25

105,50

105,50

99,25

Стрептоцид тб ° 0,3 п=5, х=101,00

6 =2,73,6„- 1,21

Эр=3,09, A=+3,0%

0,04

0,04

0,04

0,04

Сульфамонометоксин тб. 0,5

100,50

100,50

97,75

100,50

97,75

0,0402

0,0402

0,0391

0,0402

0,0391

0,04

0,04

0,04 г/л г/л

n=5 х=102,30, 100,50

100,50

108,25

105,00

105,00

99,25

105,50

101,75

101,75

99,25

100,50

100,50

100,50

0,08

Норсульфазол

G =2,45,ь =1,09

0,08

0,08

0,08

0,08

n=5, х=101,5, 0,08

Стрептоцид

6=2,54,4 =1,13, )(0,08

0,08

0,08

0,08

n=5, х=99,15, 0,08

Сульфамонометоксин

6=3,02, 4=1,34 х

Oi08

0,08

020402

0,0402

0,0389

0,0888

0,0414

0,0397

0,0397

0,0422

0,0425

0,0397

В крови (in vitro) 0,0804

0,0804

0,0866

0,0840

0,0840

0,0794

0,0844

0 0814

0,0814

0,0794

0,0804

0,0804

0,0804

n=5, х=99,80, 2 63 6х 1,17, а p=2i99i A=+3.00%

n=5, х=99,40, 5 =1,51, б =0,674 а p=l I72, А=12,73% а =2,79, А =+2,73% ар=2,89 A=+2,85% а,=3,43 Л=т3,45%

1105791

Продолжение таблицы 2

0,08

93,75

100,50

0,0750

0,0804

0,08

В моче (in vitro) мг/мл

0,04

0,04

О 04

0,04

0,0414

0 04

103,50

93,25

0,04

Стрептоцид

99,25

99,25

97,00

97,00

0,04

0,04

0,04

0,04

100i50

96 50

100,50

97,75

97,75

0,04

В крови животных (крыс) Оптическая плотность мг/мл

8,04

О, 135

0i140

8,35

8,04

0 135

7,85

0,132

0,132

0,180

0,175

0,180

0,170

0,170

7,85

8,64

Стрептоцид

8,34

8,64

8,49

8,49

Норсульфазол

Сульфамонометоксин

Норсульфазол

0,04

0,04

0,04

0,04 мг/мл

0,0402

0,0402

0,0402

0,0414

0,0373

0,0397

0,0397

0,0388

0,0388

О, 0402

0,0386

0,0402

0 0391

0,0391

100,50

100,50

100,50

103,50 п=5, х =101,7, 6=1,48,G =0,66 х p=1 68, A=+1,65%

n=5, х=97,15, 6 =2,45, С =1,09, к

Зр=2,79, А= 2,73

n=5, х=98,04, /=1 80,5=0,80 х

Зр= 2,40, A=+2 06% х=8,02, п=5, 6 =О, 2046, х=8,02, n=5, 6 =0,2046, х = 0,0913, ) p=0ф 2337

n=5, х=8,53, 6=0,0970, х О 0434

3 =0,1108t

А=11,30%

1105791

Продолжение таблицы 2

В фармакопейном препарате (метод нитрометрии) норсульфазол

0,3

98,00

104,00

97,73

98,66

103,66

n=5, х=100,41, 6 =3,16

6-„= 1,41, 3 =3 60

A=+3,58%

0,3

0,3

0,3

0,3

0,25

Стрептоцид

98,80

100,00

92,08

102,00

96,00

n=5, х=97,77, б =3,85, х 3 =4, 37

A-- 4,46%

0,25

0,25

0,25

0,25

Таблица 3

Реактив

Форма

Название

3-(aL-ð-дикарбоксиэтил)роданил

Тимол

Пред. разбав

Открыв

i минимум

1:2500 1,79 1,78

100 1: 10000 10,5 11,3 40

Фармокопейный препарат

Стрептоцид

Составитель С.Хованская

Редактор Ю.Ковач Техред Ж.Кастелевич Корректор И.Муска

Заказ 5592/33 Тираж 823 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная,4

Применение предлагаемого способа приводит к повышению чувствительности реакции азосочетания в 2,5 раза, значительно повышает точность и специфичность метода, что позволяет проводить определение минимальных

0,2940

0,3120

0,2932

0,2960

0,3092

0,2470

0,2500

0,2302

0,2550

0,2400! количеств сульфаниламидов в лекарственных формах и биологических жидкостях без предварительного разделения смесей на компоненты.

Сравнительная характеристика методов приведена в табл. 3. йр A% Открыв Пред. J p AX мини- разбав мум