Штамм @ @ г04а200,используемый для приготовления бактерийных препаратов

 

Штамм Bifidobacterium adolescentis Г04а 200, ЦМПМ В-2169 (коллекция культур микроорганизмов ВИИИгенетика ), используемый для приготовления бактерийных препаратов.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН !

„„SU„„1013473

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМЪ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3343967/28-13 .(22 ) 29 09. 81

;.(46 ) 23.04.83. Бюл. N 15 (72) Н.П. Тарабрина, В.М. Коршунов, Б.В. Пинегин, Г.И. Гончарова и А.М. Лянная (71) 2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский институт им.:Н.И. Пирогова и Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.М. Габричевского (53) 5?6 85 (088.8) (56) 1. Гончарова Г.И., Ляиная А.М.

Культуральная, морфологическая и биохимическая характеристика.-Труды

МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского.

T. XW, M., 1969, с. 415-426.

2. Авторское свидетельство CCCP по заявке N 3237027/28-13, кл. С 12 1-00, 21.07.81 (прототип). з(ю С 12 Р 1/04; С 12 М 1/00;

С 12 P 1/04, С 12 Р 1/СО (54 ) lllTAHM BIFIDO13ACTKRIUN ADOKRS-.

СЕНТХ$ ГО4А 200, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ

ПРИГОТОВЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ, (57) Штамм Bifidobacterium adoles.centis ГО4а 200, ЦМПМ В-2169 (коллекция культур микроорганизмов ВНИИгенетика ), используемый для приготов,ления бактерийных препаратов.

3 2 зернистые формы. Грамположительны, иногда окрашиваются по Грану отрицательно, располагаются беспорядочно или в виде скоплений, напоминающих китайские иероглифы.

В высоком столбике полужидкого агара Блаурокка образуют колонии в виде пирамидок или дисков размером до 3-5 мм в диаметре в течение 3-

5 сут. В жидкой среде Блаурокка дают крошкообразный рост по всей пробирке, кроме зоны аэробиоза, На плотной и жидкой среде растут также в присутствии 50 мг/мл канамицина, 2 мг/мл гентамицина, 2 мг/мл мономицина и 200 мкгlмл ампициллина.

В жидкой среде в присутствии антибиотиков вырастают.на 4-е сутки, на плотной среде - на 4-5-е сутки. После лиофильного высушивания рост штаммов может замедляться.

Физиолого-биохимические сво ст1а.

Облигатный анаэроб, растет. в высоком столбике 0,73-ного агара или

10 мл жидкой среды в пробирке. Максимум роста при 37,5 С.

Сбраживает арабинозу, ксилозу, целлобиозу, инулин, манниб, салицин.

Антагонистические свойства.

Проявляют антагонистическую активность по отношению к Proteus morgani (штамм 12), энтеротоксигенным штаммам Escherichia coli 05, 0.15(штаммы 122 и 111 соответственно), Shigellа flexneri (штамм 170).

Чувствительность к антибиотикам представлена в таблице.

Культурально-морфологические признаки °

Клетки палочковидной формы, иногда с утолщениями или У-образными раздвоениями на одном или двух концах. В мазках часто обнаруживаются

Минимальные ингибирующие концентрации антибиотиков, мкг/мл или ЕД/мл антибиотик

Антибиотикоустойчивый штамм

ГО4а200

Исходный штамм

ГО-13

Стрептомицин

200

220

2200

Мономицин

100

502000

Канамицин

Ампициллин

100

0,1

220

Гентамицин

2200

Ф 101347

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается производства бактерийных лечебных препаратов.

Известен штамм Вас1ег&лп befundum для получения бификала и бифидум-бактерина (1 j .

Однако известный штамм не обладает устойчивостью к антибиотикам.

Известен штамм Befidobacterium

longum Д4а 200, для приготовления бактерийных препаратов, обладающий антибиотикоустойчивостью 1 2 1 .

Одна ко ба к те рийные препараты, приготовленные из известного штамма, эффективны только при лечении детей.

Целью изобретения является созда", ние штамма Bifidobacterium adolescentis Гфа 200, обладающего антибиотикоустойчивостью, эффективного для лечения взрослых.

Штамм ВiГИоЬас1ег&лп adolescentis ГО4а 200 выделен из исходного штамма В 1idobacterium айо1езсепМв

ГО-13 путем селекции. Штамм деПонирован в коллеции культур микроорганизмов ВНИИ-генетика номером

ЦМПМ В-21б9.

Штамм хараКтеризуются следующими свойствами.

1013473,4

Продолжение таблицы

Иинимальные ингибирующие концентрации антибиотиков, мкг/мл или ЕД/мл

Антибиотикоустойчивый штамм

ГО4а200

Исходный штамм

ГО-13

Антибиотик

Тетрациклин

Рифампицин

0,8

0,8

Хлорамфеникол

Линкомицин

0,1

0,1

Нистатин

100

100

Как видно из приведенных данных, штамм В. adolescentis ГО4а 200 с приобретением устойчивости к антибио- 2S тикам сохраняет свои основные свойст- ва, в том числе антагонистическую активность по отношению к патогенным энтеробактериям. Кроме того, лабораторная проверка его непатогенность 30 для экспериментальных животных (мышей; крыс, морских свинок ), а также для людей.

Штамм используют следующим образом. 3$

Пример 1 . Изучение влияния совместного применения антибиотикеустойчивых бифидобактерий и антибиотиков на выживаемость мышей при лучевой болезни.

С целью усиления лечебного эффекта антибиотиков и одновременной колонизации кишечника бифидобактериями мышам с постлучевым дисбактериозом вводили совместно два антибиотика

45 (ампициллин и гентамицин ) и антибиотикорезистентные бифидобактерии

В. adolescentis ГО4а200.

Беспородных мышей весом 18-18,5 г облучают на установке ГУБЭ-1200 дозой 700 P (мощность дозы облучения

180 Р/мин ). После облучения мышей разделяют на 4 равные группы по

15 животных .в каждой. Первая группа мышей получает ампициллин, гентамицин и бифидобактерии, вторая группа жи вотных получала только бифидобактерии, третья группа животных получала . только антибиотики (ампициллин, гентамицин ). Животным четвертой группы вместо лечебных препаратов вводят стерильный физиологический раствор хлористого натрия. Препараты вводят интрагастрально через зонд один раз в сутки. Суточная доза ампициллина составляла l мг, гентамицина - 20 мкг, бифидобактерий - 1х10 жизнеспособных клеток, Препараты вводят в объеме 0,25 мл.

Для лечения облученных животных используют следующую схему: антибиотики и бифидобактерии íà 1,3, 5,7,9,1Т,13,15,17,19,21 день после облучения (с интервалом 48 ч ). Совместное введение ампициллина, гентамицина и бифидобактерий (штамм ГО4а200 ) при лечении облученных мышей обеспечивает увеличение процента выживаемости этих животных по сравнению с . мышами, получавшими только антибиоти" ки, или нелеченными -мышами. На 1Я-й день после облучения процент выживаемости мышей в группе, получавшей ампициллин, гентамицин и антибиотико устойчивые бифидобактерии, в группе, получавшей только бифидобактерии, в группе, получавшей только ампициллин и гентамицин, и в группе мелеченых животных составляет соответственно 26,6;16,3; 13 3; и 10,0. На 30-й день после облучения процент выжи" маемости в 1-й, 2-й, 3"й и 4-й rpynпах соатавляет 26,6; 16,3; 13,3 и

6,6 соответственно, Выживаемость

e I-й группе была выше, чем в 4-й группе в 4 раза.

Составитель К. Овчинников

Редактор О. Половка Техред Л,Пекарь

Корректор,М. Лемчик

Заказ 2942/34 Тираж 521

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент",,r. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 10134

Таким образом, для эффективного лечения постлучевого дисбактериоэа наряду с антибиотиками целесообразно испольэовать бактериотерапию с применением антибиотикорезистентных э штаммов, что позволяет начинать бактериотерапию с самого начала лечения ч ( и одновременно со стерилизациеи желУ. дочно-кишечного тракта антибиотиками; проводить заселение его представите- te лями нормальной микрофлоры.

П р.и м е р 2 . Определение коло низационной активности бифидобактерии (штамм l 04a200 ) при введении их в желудочно-кишечный тракт. !5

Исследование проводят на 4 добро" вольцах (авторах ). 2-суточную культу ру бифидобактерий штамма Г04а 200, выросшую на жидкой среде Блаурокка, центрифугируют при 3,5 тыс., об/мин. 2о при 4 С в течение 20 мин. Осадок ресуспендируют в кипяченой и остужен- . ной до комнатной температуры воде, после чего с помощью оптическоro стандарта мутности определяют концен-2S трацию микробных тел в исходной суспензии, а затем разводят эту суспензию кипяченой водой таким образом, чтобы 1мл ее содержалось 1х10 клеток бифидобактерий. Все доброволь-зв цы принимали антибиотикорезистентные бифидобактерии через рот однократно в объеме 5,0 мл, запивая бактериаль73 4 ную суспенэию кипяченой водой. Перед приемом бифидобактерий, а также через 3 сут после приема бактерийного препарата у всех добровольцев определяют.в испражнениях общий уро-! вень бифидобактерий и уровень антибиоти кореэистентных бифидобактерий.

В результате проведенных исследо-! ваний было установлено, что до приема взвеси иэ бифидобактерий в испражнениях здоровых людей антибиотикоустойчивые штаммы бифидобактерий отсутствуют. На 4-й день после приема бифидоба кте ри и количество антибиотикоустойчивых бифидобактерий составляет s среднем 2,5х10+ клеток на 1 г испражнений ° Следует отметить, что. введение в кишечный тракт антибиотикореэистентных бифидобактерий приводит к повышению уровня эндогенных бифидобактерий, чувствительных к антибиотикам. Кроме того, прием ! взвеси антибиотикорезистентных бифидобактерий ни в одном случае не вызывает каких-либо побочных явлений со стороны желудочно-кишечного тракта, также как и со стороны всего организма в целом.

Использование штамма 13ii i6obacterium adolescentis ГО4а200 позволяет проводить лечение взрослых людей одновременно с антибиотиками.