Способ идентификации у.pseudo-тulеrеulоsis u у.ентеrосоliтiса

(72) Авторы изобретения

А.М. Королюк, Е.П. Сиволодский и А.fl. Ремезов

У .- ». (71) Заявитель (54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ Y.PSEUDOTUBERCULOS.IS

И Y. ENTегоCOLITICA

Изобретение относится к медицине, а именно микробиологии.

Известен способ идентификации.

Y pseudotuberculos s u Y entегоcolitica, основанный на их свойстве ферментировать мочевину f 1). s

Известен способ идентификации

Y. pseudotuberculosis u Y. entегоcolitica путем посева исследуемого материала на плотную селективную среду с последующим пересевом чистой культуры на цветную дифференциальную среду, содержащую мочевину, инкубацией и учетом результатов P2 ).

Однано известный способ является недостаточно точным и не позволяет диФференцировать Y. pseudotuberculoы s от Y entегоcol1tica.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Поставленная цель достигается.тем, что согласно способу идентификации

Y. pseudotuberculosis u Y. entегоcolitica путем посева исследуемого

2 материала на плотную селективную среду с последующим пересевом чистой культуры на цветную дифференциальную среду, содержащую мочевину, инкубацией и учетом результатов культуру, дополнительно пересеваат на питательный агар с содержанием 5,1-5,33 Май и питательный агар с содержанием

3,6-3,73 NaCg и при наличии ферментации мочевины на цветной дифференциальной среде и отсутствии роста на . обеих средах, содержащих NaCQ, идентифицируют Y рзеидойоЬегсо1ов(s, а при наличии ферментации мочевины на цветной дифференциальной среде и отсутствии роста на питательном агаре с содержанием 5,1 5,33 NaCf идентифицируют Y. entегоcolitica.

Пример. Производят посев фекалий больного на среду Энда. Колонию бактерий, выросшую на среде Эндо через 24 ч инкубации при 37 С, снимают петлей и суспендируют s капле

0,8Я-го стерильного раствора Май сектора питательного агара с различными концентрациями ЙаИ от 1,5 до

10 . Через 24 ч инкубации учитывают рост бактерий по ходу посева. Солевой питательный агар готовят на основе стандартного питательного агара из рыбного гидролизата, при этом при добавлении в среду NaCI! до требуемой концентрации учитывают его первона>О. чальное содержание (0,63 МаСГ) в сухом питательном агаре ° Среду стерилизуют при 120 С 20 мин и разливают

0 в стерильные чашки Петри, Рост всех исследуемых штаммов

Y. pseudotuberculosis u Y. entего=

co1itica подавляется при концентрациях в питательном агаре ИаСс 5,05,33, при которых все остальные энтеробактерии хорошо растут, их рост по20 давляется преимущественно при концентрации МаС6 7т93. Хлористый натрий в концентрации 5,0-5,34 в питательном агаре позволяет четко дифференцировать 1003 штаммов У. pseudotuberculo25

s i s u Y. entегоcol i t i ca от других видов энтеробактерий, ферментирующих мочевину. Хлористый натрий в концентрации 3,5-3,7 подавляет рост

100 штаммов У. pseudotuberculos u

36 4

4i штаммов У. entегоcol 1tiñà, т.е. испытание роста бактерий на питательном агаре с содержанием 3,5-3,7 NaCP позволяет провести дифференциацию

96 + 2,27. штаммов Y. entегоcolit-ica от Y. pseudotuberculosis.

Использование изобретения позволяет повысить точность идентификации в 3,6 раз и тем самым улучшить диагЮ ностику псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза, формула изобретения

Способ идентификации У. pseudotuberculosis u Y. entегоcolitica путем посева исследуемого материала на плотную селективную среду с последующим пересевом чистой культуры на цветную дифференциальную среду, содержащую мочевину, инкубацией и учетом результатов, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности, культуру дополнительно пересевают на питательный агар с содержанием 5,1-5,34 NaC7 и питательный агар с содержанием 3,6-3,74 Nag и при наличии ферментации мочевины на

3 988865 на стекле стерильной чашки Петри. Одну петлю взвеси бактерий засевают на скошенный столбик цветной дифференциальной среды, содержащей 900 мл

13-го агара Хоттингера и 100 мл раствора, представляющего собой глюкозу (1 г), лактозу (10 г), мочевину (10 r) комплексный индикатор, состоящий из индикатора Андреде (100 мл), бромтимолового синего (0,4 г) - 20 мл. Цветную дифференциальную среду готовят по известной методике $2 ).

Одновременно по одной петле взвеси бактерий засевают радиальным штрихом на сектор питательного агара с содержанием 5,33 NaCE и сектор питательного агара с содержанием 3,7

ИаС(в чашках Петри. Посевы выращивают при 37ОС 18-24 ч, после чего учитывают результаты. На цветной дифференциальной среде рост бактерий сопровождается синей окраской косячка и столбика, что свидетельствует о ферментации мочевины. На солевом питательном агаре с содержанием

5 33 МаС8 нет роста бактерий, на солевом -питательном агаре с содержанием 3,73 NaCE есть рост бактерий по ходу посева, следовательно, выделенный микроорганизм относится к виду

Y. entегоcolitica.

Изучена чувствительность к различным концентрациям NaCf в питательном агаре у 75 штаммов У. entегоcolitica (35 эталонных культур - 7 штаммов серогрупп IA, IB, 11, III, IV, V, VI, 28 штаммов серогрупп от 01 до

034 всех пяти биоваров) и 40 клинических штаммов преимущественно серогрупп 03 (IA) и 09 (V) 60 штаммов

Y. pseudotuberculosis (13 эталонных культур - 6 штаммов серогрупп IA, IB, II, lIl, IV, V, 7 штаммов тех же серогрупп из другой коллекции) и 47 клинических штаммов всех сероваров, преимущественно серовара IA, 124 клинических штамма всех видов Proteus и 39 клинических штаммов других энтеробактерий Klebs ella 50

pneumoniae, Citrobacter breunchi, Entегоbacter с1оасае, Serrat la marcescens. Указанные культуры засевают на среду Зндо дпя получения изолированных колоний и инкубируют при

37 С 24 ч. По одной колонии суспендио руют в капле 0,853-ro раствора NaCC и засевают по одной петле взвеси на

Составитель Е, Ярных

Редактор Е. Лазуренко Техред К.Мыцьо Корректор С. Шекмар

Тираж 521 Подписное

ВНИИПч Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Н-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 10992/34

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 988865 4 цветной дифференциальной среде и от- Источники информации, сутствии роста на обеих средах, со- принятые во .внимание при экспертизе держащих NaCE, идентифицируют Y.pseu- 1. Лабораторная диагностика псевdotuberculosis, а при наличии.фермен- дотуберкулеза. Методическое письмо. тации мочевины на цветной дифферен- i Владивосток, 1968, 12. циальной среде и отсутствии роста на 2, Методические рекомендации по питательном агаре с содержанием 5, 1- лабораторной диагностике кишечного

5,3ь NaCf идентифицируют Y, entего- иерсиниоза. Йркутск, l979, 8 (npoco1itica. тотип).