Штамм гриба реniсilliuм fеlluтаnuм,57699-продуцент пектинэстеразы

1 В. Л. Айзенберг, Т. И. Бнлай, В. Н. Васильев и В А. Вьюницкая (72) Авторы, изобретения

Ордена Трудового Красного Знамени институт и вирусологии им. Д., И. Заболотного

ДАДИ

Ю (7l) Заявитель

Изобретение относится к телнической микробиологии, в частности к производству ферментов, и может быть использо ван для подучения пектовой. кислоты, ооветления яблочного и лимонного соков, в винодельческой промышленности.

Известны штаммы микроорганизмовпродуцентов комплекса пектолитических

-ферментов.

Так известен штамм. гриба Мбрсгgif@l5

Мqeг, 12/355 - продуцент комплеж .а 10 пектолитическнх ферментов t 1 1 .

Недостатком данного штамма является .

его высокая пектинэстеразная активность.

Наиболее близким к предлагаемому по достигаемому положИтельному эффекту 1, является гриб Ьо+г 11в с3 пегес, 20продуцент комплекса пектолитических„, целлюлотических ферментов - с активно- . стью пектинэстеразы, равной 34,6 вф Ы °

Однако 5o4

Кроме того, ВоЬг в сюегйс, 20, значительно уступает предлагаемому штам му по величине пектинэстеразной активно сти.

К недостаткам штамма SotrgkiS c nerea, 20, .относится длительность его культивирования с целью максимального выхода ферментов 146 ч, а также способность к обильному спороношению на сус ловом агаре и других питательных сре дахЫель изобретения - получение нового штамма, *отвечающего требованиям современного производства, т.е. обладающе го повышенной способностью к биосинтезу фермента пектинэстеразы, для использования при получении пектовбй кислоты, ооветления яблочного и лимонного соков, в винодельческой промышленности.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве продуцента пектинэстеразы применяется гриб. Реп1с И1нт УеИоВаоие;

57699, обладающий повышенной способ ностью K биосинтезу фермента. (54) ШТАЩЩ РРИВА PPgqcq 9ВтОж ge39u4anum

57698 - ПРОДУЦЕНТ ПЕКТИНЭСТЕРАЗЫ

3 98502

,Штамм, Penic,Pfium feCQvkanufn, .57699 выделен из почвы Киевской области (УССР) .

Культура хранится в коллекции чистых культур отдела физиологии и систематики микромицетов института микробиологии и вирусологии им. Д. К. Заболотного

АН УССР и депонирован в центральном музее промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика" под коллекционным номером ЦМПМ F 152. Акт ность пектинэстеразы у данного штамма стабилизирована при многократных пересевах на агаризованные питательные среды а 15

Штамм, Реп1С)И1от ЕеИоМпор

57699„характеризуется следующими фи» знопого-морфологическими признаками .

Морфологические признаки гриба gg

PetliciИип fе00vtaпнтп Иц,ого.

Исследуют, рост гриба на 6 средах разразличного состава.

Среда Чапека

Колонии ограниченно растущие, состо- д ящие из плотного войлочного сплетения тонких гиф, в центральной части выпуклые, по краю радиально .складчатые, с узким растущим неровным краем (0,5см), в центральной части окрашены и беловато-сизый цвет, крайняя конидиеносная зона бледно-серовато-зеленая.

12, 18 24 33

26 34 48 56

16 24 32 36 апека

C ло-агар

Картофельный агар

28 34 46 54

16 27

36 46

36 46

58 66

Са буро

Ролена Тома

Обратная сторона колонии сероватозеленоватого цвета.

Конидиеносцы гладкие 60-80i2 0-2,3,и,, отходят от плотного мицелия, одномутовчатые, изредка с одной боковой веточкой. Стеригм в пучках по 6-8, ланцетовидные 8-10 2,0-2,4 и .

Конидии эллиптические, Около 2,5ф, гладкие, в массе тусклсь-зеленые, соеди иены в колонии.

Картофельно глюкозный

GFBP

2 ф

Сусло-агар

Колонии умеренно растущие, хорошо развиты, хлопьевидновойлочные. Растут концентрическими зонами, по центру плотновойлочные, но краю хлопьевидновойлочные. Края неровные. Растущая зона (18 мм) кремовато-белого цвета.

Обратная сторона колонии — темнокоричневого цвета. Спороношение сла бое.

Картофельный агар

Колония слабо растущая, низко плотновойлочная с неровными краями белого цвета. Обратная сторона телесного цве» та. Спороношение „отсутствует.

Картофельно-глюкозный агар

Колония умеренно растущая, хлопьевидновойлочная с концентрическими зонами роста. В центральной части серовато- дымчатого цвета, вьщуклая, растущий край желтовачо-розовый (3 5 мм) ровный. С возрастом приобретает сероватокоричневый оттенок. Спороношение хорошее, идентичное среде Чапека.

Среда Сабуро

Колония плотно хлоцьевидновойлочная, умеренно растущая. Цвет варьирует в пределах бледно-желхс -сероват -зеленого. Растет концентрическими зонами.

Растущий край неровный (0,5 мм), белого цвета. Обратная сторона колонии светло-коричневая. Спороношение слабое.

Среда Ролена Тома

Самый лучший рост. Колония войлочно-пушистая, с радиальными бороздами, и отдельными сегментами. Цвет колонии от светло-желто-сероватого до темносерого. Растущий край колонии неровный„ широкий (до 8 мм), кремового цвета. Обратная сторона колонии светло»коричневого цвета. Спороношение обильное.

В таблице показан линейный рост колоний в динамике.

985022 5

Физиологические признаки гриба, рЬп1 ci 66um Eef0utanvm Oi vt е.следующие.

Гриб усваивает гаокозу, галактозу, мвльтозу, фруктозу, сахарову, крахмал, инулин, сорбнт, маннит, янтарную и, яблочную кислоты, этанол и мвтвнол -. слабо. Слабо усваивает целлкмюзу. Ус» . ваиваеч нитратный и нитритный азот, особенно хорошо аммоннйнмй. Из органических источников азота ассимулкрует мочеви- 10 ну, пелтон, кукурузный экстракт, солодовые ростки.

Растет в широких пределах рН 2,5-9.

Аэроб. В процессе роста подкисляет сре . ду до величины рН 2,2 2,3. Температу- и рв оптимадьного росга 26-28 С, Максимальное образование фермента в культур-ной жидкости при росте на жидкой питательной среде с индуктором и минвраль ными солями в условиях глубинного куль, щ тивирования наблюдается после 70 ч.

Гриб Реэ с Иое ЕеИм а ощ,57699, свободен от целлюлотических и ксилолитическнх ферментов, не обладает активностью - в лактозицаэы, не содержит кислой.протеинаэы.

При хранении и пассировании на суоло-агаре высокий уровень ферментатинной .активности штамма не снижается и сохраняется в течение 3-х лет.

При культивировании на жидкой пита.- зв

:тельной среде определенного состава штамм Реп1сПВою ЮейМа ер,57699, синтезирует пектинэстераэу.

Пример . Посевной материал вььращивают при 28 С в колбах емкостью

750 мл на круговой качалке 220 об/мин З в течение 40 ч на среде, содержащей, %: аммоний сернокислый 0,7; калий фосфорнокислый однозамещенный О, 1; магний сернокислый 0,05; пектинсодержвший ин дуктоя свекловичный жом 4,0 а также

40 воду дистиллйровмпгую 100 мп.

Посевной материал, составляющий

10% от общего объема среды, добавляют в среду, содержащую те же компоненты и в твх жв количествах, что и при при готовлении посевного материала, и засеянную среду культивируют при 28 С в течение 66 ч в колбах емкостмо 750 мл на качалках 220 об/мин илн в производственных ферментерах.

Из культуральной жидхости гриба, оа деленной от биомассы и неиспользованного субстрата, получают ферментный препарат пектинэстервзы осажцением 2,5 объемами на объем культурального фильт- Б рата, охлажденного до 4 С ацетона. Осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/

/мин в течение 10 мин и лиофилизируют.

Активность ферментного препарата пектю зстеразы гриба определяют цо гоо» тироввнной методике в стандартных условиях (Препараты ферментные.. Методы . определения пехтолитической активности.

ГОСТ 20263-74, Госстандарт СССР, 1975) и выражают в мнкроэквивалентах, прогидролиэованных сложноэфирных связей в молекуле пектина за 1 мин при 30 С.

Величина активности фермвнтйого препарата пектннэстеразы гриба Penfci И1отп

e09utanvm, 57699, равняется 172,S180,Оеар/г, Штамм Penici_#_ium getl?vkagunj57699. характеризуется признаком преимущест венного содержания фермента пектинэо терезы и низким содержанием других ферментов пектолитического комнпексввидо и экзополигалактуронвзыа Гак, активность энцо по лягала ктуроиа» зы, определяемая в ферментном прецарвте указанного гриба по гостированноф методике, равняется, -18,0-20,0 е+;. экзополигалвктуроназы — 82,0-85,5 ед общая пектолитичусквя акгивность 48,4-S0,2 ед ь,.

В то же время продупент комплекса пе1столитических ферментов производственного значения КрегцМВиэ ЕоеНйць " вырабатывает в значительных ко-. личествах эидополигалактуроназу (200,0

-800,0 ед/г), акзаполигалактуроназу (400,0-500,0 ед/r),а в фермер ных прецаратах е пектофоетиннд Г 10 х . и пектофоетидин II 10 х, активность пеи» тинэстераэы в комплексе составляет всв го 7,030,0 ед/г, т.е. в 26-5 рвэ ни-же, чем у штамма PeniciCRiuw ФеЯв(арэщ, 57699.

Штамм гриба реп1с1 ЕЬ е fe99ut num, 57699, проверен на патогенность в m двлв антибиотиков института микробиологии и вирусологии AH УССР.

Таким образом, штамм РеИсИИоге

gtfgvtPnurPr576S9, по сравнению с иэ. вестным обладает повышенной способиоо» тью к биосинтезу фермента пектиэстеразы и представляет собой новую к вы уру со стойвими физиолог мор юлогическнми свойствами.

Штамм PeniciOium fe00u nuq,57699, является перспективным для ромыпиюнности и может быть использован в качестве продупента фврментного препарата пектофеллутвнина.

Ф о р м у и а и з"-о б р е т е н и я

1 Штамм гриба Penici Еевич йеИИеву», I57699> (коллекция Бентрального музея .

7 " 985022 8 ..; та ВНИИгенетика, коллекционный ao- № 488850, кл. С 12 8 1/14 1973. мер QNHNf -152) - продуцент пектинэс 3 щмийВ» 2. Авторское свидетельство СССР

Источники информапии, > ¹ 293846, кл. С 12 и 9/14, 1970

«рииятые эо внимание при экспертизе (neman).

Составители, В. Айзенберг

Редактор Н. Кешеля Телред Л.Пекарь . Корректор И. Ватрушкнна

Заказ 10082/31 Тираж,505 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4