Способ определения @ -глобулинов сыворотки крови

 

(iii953562

Союз Советски к

Социалистические

Республик

Оп ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6l) Дополнительное к авт. свнд-ву (22)Заявлено 12.12.80 (21) 3214457/30-15 с присоединением заявки,% (23) Приоритет

Опубликовано 23.08.82, Бюллетень № 31

Дата опубликования описания 23.08.82. (5I )M. Кл.

G 01 М 33/16

Теаударстееиный комитет

СССР ао делам изобретений н открытий (») УДК 547.962..4(088.8} (72) Автор изобретения

Г.Я.Нечеса

Б ;;*; ов Одвт:ва

Научно-исследовательский институт пушного и кролиководства (71) Заявитель (54} СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ б -П10БУЛИНОВ

СЫВОРОТКИ КРОВИ

Изобретение относится к лабораторным исследованиям, в частности способам исследования крови и люминесцентному анализу.

Известен способ определения ф -глобулинов в сыворотке крови путем раз5 деления белков на фракции. Для этих целей используют методы электрофореза, фракционирование через слой геля сефадекса, а также осаждение белков растворами солей. Затем определяют количество белка в каждой фракции отдельно, предварительно определив количество общего белка, содержащегося в сыворотке крови, по оптической плотности, коэффициенту рефракции, специфической окраске белков красителями $1), Известен также способ определения белков в биологических жидкостях о по флуоресценции триптофана и тирозина, который заключается в том, что флуоресценцию возбуждают ультра;фиолетовыми лучами в области спектров поглощения ароматических аминокислот и измеряют суммарное их излучение Pj ..

Тирозин и триптофан входят в состав альбуминов и глобулинов, поотому этим способом измеряют только об" щую концентрацию белков в сыворотке, Разделение же их на фракции для определения -глобулинов требует срав" нительно длительного времени, большого количества сыворотки и дорогостоящих химических реактивов.

Цель изоЬретения - ускорение процесса определения -глобулинов.

Поставленная цель достигается тем, что интенсивность флуоресценции три" птофана измеряют в 14-16-ном раство". ре иодистого калия, при длине волны возбуждения 286-306 нм и длине волны эмиссии 340-370 нм.

При выЬранных условиях измерений флуоресцируют в основном только внутренние остатки триптофана, которых много ву-глобулинах и нет в 3 95 альбуминах, поэтому альбумины и другие белковые фракции не мешают апре" делению -глобулинов.

П р и м в р 1. С целью определить погрешность метода, влияние других белковых фракций на флуоресценцию -глобулинов отбирают 17 сывороток крови норок, у которых содержание белковых фракций, определенных методом электрофореза, колеблется в широких пределах: альбуминов от

2„18 до 3,85 г 3, -глобулинов от

0,63 до 2,49 г 3, g -глобулинов от

1,35 до 2,63 г 4, " -глобулинов от

0,29 до 4,25 г 4. Сыворотку крови разводят в 153-ном растворе иодистого калия.

Результаты определения "-глобулина представлены в табл. 1.

Установлено, что в присутствии тушителя поверхностных остатков триптофана (Kt) g-глобулины корректируют в высокой степени с флуоресценцией сывороток (г =0,98, P (0,001).

Другие белковые фракции не влияют на интенсивность флуоресценции, на что указывают их низкие коэффициенты корреляции (r ), которые не до" стоверны и близки к коэффициентам корреляции белковых фракций с у -глобулинами, определенных методом электрофореза (г- -) .

Результаты испытаний позволяют считать возможным определение р -глобулинов по флуоресценции внутренних остатков триптофана при выбранных условиях измерения, которые указаны

3562 4 в заявке со средней относительной ошибкой 93.

Пример 2. Количество f -глобулинов в сыворотках крови 17 норок определяют предлагаемым способом по уравнению: у=0,065, х=4,51 где уконцентрация "-глобулинов, г 4, х - интенсивность флуоресценции сыворотки крови, в 154-ном. растворе

t0 иодистого калия (разведение 1:400 „ измеренной в относительных единицах на спектрофлуориметре ИРГ-3 при чувствительности 1 и полуширине щелей

10 нм, длине волны возбуждения 296 нм

ts- длине волны эмиссии 350 нм.

Результаты определения f-глобулинов сывороток крови предлагаемым способом в сравнении с известным методом - зональным электрофорезом

zp представлены в табл. 2.

Средняя относительная ошибка

+Д=8,6 при колебании белковых фракций в сыворотке крови: альбуминов от 2,18 до 3,85 г i, ф -глобулинов

25 от 0,63 до 2,49 г /, )г-глобулинов от 1,35 до 2,63 г i.

По сравнению с известными лабораторными методами определения у -глобулинов флуорометрический способ отзв личается экспрессностью экономией дорогостоящих реактивов, минимальными затратами труда, включающими разведение сыворотки (плазмы) раствором тушителя и флуорометрию.

Предлагаемый способ. является ультрамикрометодом - для анализа достаточно. одного капилляра крови.

Таблица 1

3,85

2,45 .

2,18

3 32

2,64

3,28

2,25

2,29

3,67

2,67

1,22

2,47

2,49

1,15

1,33

0,63

1,88

1,45

1,14

1,22

1,83

1,35

1 51

2,11

2,10

2,63

1,63

2,15

2,23

2,23

0,55 81

0,62 81

0,29 74

0,88 88

0,64 78

0,63 76

0,42 77

0,51 76

1,14 83

2,03 107

953562

Продолжение табл. 1

Белковые фракции

М проб

Интенсивность флуоресценции отн. ед.

Глобулины, г Ф

ы Jr )т

Альбумины, г 4

1,15

3 19

2,72

3,34

3,07

3,07

3,22

3,07

2 17 0 49 77

1,91 1,35 89

2,04 0,61 81

1,57 0,55 76

1,79 0,48 77168 0 86 81

1,31 4,25 129

1,02

1,01

1,86

1,43

1,01

1,33, 13

15

17

Коэффициент корреляции г +0,08 -0,19

-0,23 +0,98 . (р(< 0,001) Коэффициент корреляции г +0,09

+0,98

-0,20 -0,24

o,76

0,76

0,10

0.,07

0,01

0,17

0,04

0,10

0,04

0,04

0,13

0,21

0,00

0,04

0,08

0,06

0,01

16

0,30

1,21 .о,56

0,43

0 50

0,43

0,89

2,45

0,50

1,28 а,76

0,43

0,50

19

7

13

° 0

12

81

81. 74

78

77

83

107

89 81

77

0 55

0,62

0,29

0,88

0,64

0,63

0,42

0,51

1, 14

2,03

0,49

1,35

0,61

0,55

0,48

Таблица 2, 8 . Продолжение табл. 2

953562

Абсолютная ошиб

< +h

f -глобулины, г Ф

Относитель ная ошибкаЬ, Ф

Интенсивность флу оресценции

Электрофорез,флуорометрия

81 0,76 0,86 0,05 6

129 3,88 4,25 0,18 4

Формула изобретения

Составитель М. Белоусова

Редактор А.Козориз Техред И, Рейвес Корректор Н. KoPo b

Заказ 2 9 73 Тираж 7 Подписное

ВНИИПИ Государст венного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ЛПП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 1. Способ определенияT -глобулинов сыворотки крови, включающий измерение интенсивности флуоресценции триптофана, о т л и. ч а юшийся тем, что, с целью ускорения процесса определения, интенсивность флуоресценции триптофана измеряют в 14- 16 рвстворе иодистого калия.

2. Способ-по и. 1, о т л и ч ашийся тем, что интенсивность

I флуоресценции триптофана измеряют

: при длине волны возбуждения 28615 306 нм и д и е волны эмиссии 340370 нм.

Источники информации, принятые so внимание при экспертизе го

1. Биохимические методы исследования в клинике. Под ред. А.А.Покровского, 1969, с. 58-76..

2. Авторское свидетельство СССР

N 122339, кл. G 01 N 33/04, 1959.