Способ определения сульфгидрильных групп в белках

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Соретскик

Социалистических

Реслублик

Ь.

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 23.12. 80 (21) 2965715/28-13 151) М. КЛ. с присоединением заявки ¹

G 01 N 33/48

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 150882, Бюллетень №30

Дата опубликованмя описания 15.08.82 (531 УДК 616. 07 (088. 8) (72) Авторы изобретения

Т. М. Керимов, Ш. В. Мамедов и P . .Б. Асланов

1 т-; !

Г1

ИЙЯи 1" (71) Заявитель

Научный центр биологических исследов

AH Азербайджанской CCP (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУЛЬФГИДРИЛЬНЫХ ГРУПП

В БЕЛКАХ

Изобретение относится к биофизике и может быть использовано при изучения физико-химических и механических свойств нерастворимых в воде белков, например фиброина, кератина и других белков, имеющих аналогичную структуру.

Известен способ определения сульф"гидрильных групп в белках, при осуществлении которого в водную среду, содержащую белок, добавляют спинме- . ченный иодацетамид, полученную смесь инкубируют, затем спинбелковый комплекс очищают от свободной метки методом диализа и определяют сульфгид- 15 рильные группы методом электронного парамагнитного резонанса ми (11.

Недостатком данного спЬсоба является невозможность определения им сульфгидрильной группы в нераствори- 20 мых в воде белках.

Цель изобретения - определение сульфгидрильных групп в водонерастворимых белках.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения сульфгидрильных групп в белках путем добавления в водную среду, содержащую белок, спинмеченного подацетамида с последующим инкубированием полученной смеси, очисткой спин- белкового комплекса от свободной метки и определения сульфгидрильных групп методом электронного парамагнитного резонанса, в водную среду дополнительно вносят 5-10 мкл этилового спирта, в очистку спинбелкового комплекса от свободной метки проводят промыванием в 10-30 мл дистиллированной воды, а затем в 5-10 мл этилового спирта, Способ осуществляют следующим образом.

В 5 мл воды вводят 10 мг выделенного из шелковой нити фиброина ° Затем добавляют 10 мкл спиртового раствора спинмеченного иодацетамида

10 м. Добавлением NaOH доводят рН = 9. Затем проводят инкубированяе в течение 15 мин в стеклянной пробирке. Удалив.рфиброин из пробирки„ промывают его в объеме 10 мл дистиллированной воды. Промывание повторяют 3 раза. Затем в течение

30 мин фиброин высушивают при температуре воздуха 20 С. Высушенный фиброин вводят в 5 мл спирта и промывают от свободной метки. Промывание в спирте проводят 2 раза. Затем фиброин вновь высушивают в течение

951119

Составитель Л.Соловьев

Техред Ж. Кастелевич Корректор Н.Король

Редактор A.Ãóëüêî

Заказ 5933/46 Тираж 887 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент". г Ужгород, ул. Проектная, 4

10 мин при 20ОС. Полученный препарат фиброина содержит спиновые метки, которые ковалентно связываются с

SH-группами. Препарат вводится в кварцевую трубку для регистрации сигнала электронного парамагнитного резонанса (ЭПР) на радиоспектрометре

РЗ-1306 (CCCP) . Условия регистрации сигнала ЭПР: СВЧ мощность 10 м Вт, амплитуды ВЧ (100 кГц) модуляции

3 1с, развертка магнитного поля 10

2,5 Гс/мин, постоянная времени

Офз су температура 20ОС. При наличии сигнала ЭПР, связанного спинмеченного иодацетамида, можно судить о наличии и, следовательно, о коли-честве SH-группы в фиброине.

Использование предлагаемого способа позволяет определить сульфгидрильную группу в водонерастворимых белках, например фиброине, что очень важно при определении их структуры, выяснении связи между структурой и механическими свойствами, а также при регуляции различных физико-химических и механических свойств белков.

Формула изобретения

Способ определения сульфгидрильных групп в белках путем добавления в водную среду, содержащую белок, спинмеченного иодацетамида с последукщим инкубированием полученной смеси, очисткой спинбелкового комплекса от свободной метки и определения сульфгидрильных групп методом электронного парамагнитного резонанса, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью определения сульфгидрильных групп в водонерастворимых белках, в водную среду дополнительно вносят 510 мкл этилового спирта, а очистку спинбелкового комплекса от свободной метки проводят промыванием в 10-30 мч

«дистиллированной воды, а эагем в

5-10 мл этилового спирта.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Игнатьева Л.Г., Серегина Т.М., Блюменфельд Л.A., Рууге Э.К., Артюх Р.И., Постникова Т,Б, Исследование ферментативной активности миози" на методом спиновой метки. вЂ” "Биофизика", 1972, 17., Р 3, с. 533-536.

Способ определения сульфгидрильных групп в белках

Способ определения холиномиметических и холиноблокирующих свойств фармакологических средств холинергической природы // 947767

Способ определения анилина в биологических объектах // 947766

Способ активации свертываемости крови человека // 947765

Способ обработки мезенхимальных тканей для гистологического исследования // 947686

Способ выявления следов пальцев на поверхности предметов // 947058

Способ приготовления комплексов днк с белком для электронно- микроскопического исследования // 946517

Способ определения давности пребывания трупа в воде // 946498

Способ диагностики беременности // 945724

Способ определения суточной дозы гепарина // 943578

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750