Способ количественного определения п-хлорфенилового эфира гераниола в зерне,воде,почве и зеленых листьях

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 17.04.80 (21) 2914313/30-15 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (51) М. Кл з

G 01 N 31/08

Гооударстееииык комитет по делам иэобретеиий и открытий (53) УДК 543.86 (088.8) Опубликовано 30.12.81. Бюллетень №48

Дата опубликования описания 30.12.81 (72) Авторы изобретения

Г. Ф. Вылегжанина и И. А. Албул

Всесоюзный научно-исследовательский ийституг биологических методов зашиты растений (71) Заявитель (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ и-ХЛОРФЕНИЛОВОГО ЭФИРА ГЕРАНИОЛА В ЗЕРНЕ, ВОДЕ, ПОЧВЕ И ЗЕЛЕНЫХ ЛИСТЬЯХ

Изобретение относится к анализу материалов химическими способами путем хроматографии и может быть использовано для контроля за остаточными количествами ихлорфенилового эфира гераниола (аналога ювенильного ro мона) р

СН,— С = СН вЂ” СН,—; С=СН-Сн;О -(п сЕ I

CH Нз в объектах окружающей среды, продуктах питания и кормах с целью защиты окружающей среды от загрязнения химическими веществами.

Известен способ определения (4 †(6,7-эпокси-3-этил-7-метил-2-ноненил)окси)-1,2 (метилен-диокси) бензола (ENT †701) и

ES

6,7-эпокси-1- (и-этилфенокси) -3,7-диметил-2-октена (ENT — 70221) в питательной среде для разведения Stomoxys calcitrans (L). Питательная среда представляет собой смесь измельченной мякоти сахарного тростника, пшеничной муки, рыбного белка и воды (1).

Методика включает стадии экстракции смесью бензол-метанол в аппарате Сокслета, очистки методом колоночной хроматографии на комбинированном сорбенте и анализа первого из указанных соединений методом газожидкостной хроматографии (ГЖ)() и второго спектрофотофлуометрическим методом. Пределы определения соответственно равны 6,0 и 1,0 мг/кг. Они настолько высоки, что могут превышать исходную концентрацию действующего вещества. Кроме того, применение в качестве экстрагента смеси бензол-метанол обеспечивает извлечение, наряду с действующим веществом, большого количества коэкстрактивных веществ-примесей, существенно затрудняющих анализ.

Известен также способ количественного определения и-хлорфенилового эфи(а гераниола в зерне, воде, почве, и зеленых листьях, включающий экстрагирование органическими растворителями, очистку и хроматографический анализ.

Способ предусматривает четырехкратную экстракцию смесью диэтиловый эфиргексан (3:7), упаривание, очистку на колонке с окисью алюминия при последовательном промывании ее смесями диэтиловый эфир-гексан различного состава; определе894561

5 1 0

3 ние проводится методом жидкостной хроматографии с УФ-детектированием в пределах 0,5 — 1,0 мг/кг (2).

Однако известный способ имеет низкую чувствительность определения и трудоемкость.

Он пригоден лишь для исследовательских целей по изучению метаболизма, продолжительности сохранения и прочего и непригоден для анализа остатков в реальных условиях, поскольку реальные дозы действующего вещества значительно ниже. Например, исходные концентрации при обработке воды составляют примерно 0,02 — 1,0 мг/кг, зерна 1 — 10 мг/кг, рекомендуемые нормы поверхностной обработки 100 †3 г/га.

Цель изобретения — повышение чувствительности определения и снижение затрат.

Поставленная цель достигается тем, что очистку проводят методом препаративной хроматографии на окиси алюминия, а хроматографический анализ осуществляют путем газожидкостной хроматографии.

В качестве органического растворителя используют гексан для зерна, воды и зеленыхх л истье в.

В качестве органического растворителя используют диэтиловый эфир для почвы.

Чувствительность способа оценивается как нижний предел обнаружения и-хлорфени лового эфира гераниола в объекте. Нижний предел определяется двумя факторами . минимально обнаруживаемым количеством вещества на хроматографе (0,01 мкг); наличием оставшихся после очистки коэкстрактивных веществ, которые не мешают определению и-хлорфенилового эфира гераниола

Пример, Оценка нижнего предела обнаружения для зерна.

Минимально определяемое количество вещества на хроматографе 0,01 мкг, что соответствует концентрации 5 мкг/мл (ввод пробы 2 мкл), а наличие коэкстрактивных веществ не позволяет увеличить размер пробы (свыше 50 кг) или уменьшить объем конечного анализируемого раствора (менее 1 мл).

Таким образом, нижний предел обнаружения в зерне для данного способа 0,1 мг/кг.

Аналогичным образом определяются пределы для остальных объектов.

Для метода тонкослойной хроматографии (ТСХ) предел обнаружения также определяется двумя факторами: минимально обнаруживаемым количеством вещества на пластине (0,5 мкг на силуфоле и 1,0 мкг на окиси алюминия); наличием оставшихся после очистки коэкстрактивных веществ, которые не мешают определнию и-хлорфенилового эфира гераниола. Поэтому при анализе зерна и листьев на пластину наносят не всю пробу, а ее часть, так как в противном случае оставшиеся коэкстрактивные вещества -мешают определению.

З0

4

Пример 1. Количественное определение

h-хлорфенилового эфира гераниола в зерне. (для нижних пределов обнаружения этим определяется заданное в пробу количество и-хлорфенилового эфира гераниола) .

Берут 5 навесок зерна пшеницы по 50 r каждая, экстрагируют 70 мл гексана при встряхивании в течение 1 ч. Одна используется как контроль, остальные содержат по 4,8 мкг и-хлорфенилового эфира гераниола, заданных в данные навески. По окончании растворитель сливают и дважы промывают зерно гексаном порциями по 30 мл.

Объединенный экстракт сушат безводным сульфатом натрия, упаривают до объема

1 — 2 мл.

Для количественного определения и-хлорфенилового эфира гераниола остаток. переносят на пластину с окисью алюминий, которую элюируют циклогексаном. Зону, соответствующую и-хлорфениловому эфиру гераниола, трижды промывают подогретым до

40 С гексаном, экстракт упаривают до 1 мл и анализируют методом ГЖХ на фазе SE-301

Контроль при времени удерживания Т.

= 4,11 мин пика не имеет. В остальных пробах обнаружено, %: 72,9; 67,4; 73,3; 73,0 внесенного вещества (средний процент обнаружения 71,9) . Стандартное отклонение

2,8%, доверительный интервал 4,4% при уровне надежности р = 0,95.

Пример 2. Количественное определение

h-хлорфенилового эфира гераниола в воде.

Параллельно анализируют 5 проб, каждая объемом 1 л. Одну используют как контроль, в остальные задано по 2,015 мкг вещества. Пробу воды помещают в делительную воронку объемом 2 л, добавляют 150 мл гексана и энергично встряхивают в течение 2 мин, органический слой отделяют и повторяют экстракцию 80 мл гексана. Объединенный экстракт сушат и очищают так же, как в предыдущем случае. Контроль пика не имеет, в остальных пробах обнаружено,%:

67,5; 70,6; 71,7; 65,0 внесенного вещества (в среднем 68,7%), стандартное отклонение

3,0%, доверительный интервал 4,8%, при уров не н адеж иост и р = 0,95.

Пример 3. Количественное определение и-хлорфенилового эфира гераниола в почве.

Параллельно анализируют 4 пробы весом по 100 г каждая. Одну используют как контроль, в остальные задано по 4,8 мкг вещества. К измельченной пробе добавляют

150 мл диэтилового эфира и встряхивают в течение 1ч, растворитель сливают и экстракцию повторяют еще 2 раза порциями по 70 мл в течение 15 мин. Объединенный экстракт сушат и очищают как описано в примере 1.

Контроль пика не имеет, в остальных пробах обнаружено, %; 79,9; 76,3; 75,4 внесенного вещества (в среднем 77,2%), стандартное отклояение 2,4%, доверительный интервал 5,9% при уровне надежности р=0,95.

894561 Таблица 1

Стандартное отДоверительный интервал, 7.

Обнаружено веще- Х >, ства X X

Анализируемый объект

Задано в пробу, мкг/г про— бы клонение, X (ьх) (х) 72,9

67,4

4,8/50

4,4

2,8

71,6

73,3

Зерно

73,0

67,5

70,6

2,015/1000 71,7

68,7

4,8

Вода

3,0

65,0

79,9

76,3

4,8/100

75,4

Почва

2,4

77,2

5,9

78,6

84,0

4,8/20

75,9

Листья

76,2

12,7

8,0

78,6

Пример 4.. Количественное определение

h-хлорфенилового эфира гераниола в зеленых листьях.

Параллельно анализируют 5 проб весом

20 г каждая. Одну используют как контроль, в остальные задано по 4,8 мкг вещества. К измельченной пробе листьев добавляют 70 мл гексана и встряхивают 40 мин.

Экстракт сливают и промывают листья двумя порциями гексана по 70 мл каждая.

Объединенный экстракт сушат и очищают как описано в примере 1. Контроль пика не имеет, в остальные пробах обнаружено, /0. 78,6; 84,0 75,9; 78,6 внесенного вещества (в среднем 76,2%), стандартное отклонение 8,0О/O,äîâåðèòåëüíûé интервал 12,7 при уровне надежности р = 0,95.

Результаты количественного определения п-хлорфенилового эфира гераниола представлены в табл. 1.

5 В табл. 2 показаны нижние пределы определения и-хлорфенилового эфира гераниола известным и предложенным способом, Количество реагентов, необходимых для проведения анализа, уменьшается. В известном способе для очистки на одну колонку требуется 22 г окиси алюминия,5 мл диэтилового эфира и 55 мл гексана, а в предлагаемом для пластины — 13 r окиси алюминия, 30 мл циклогексана и 20 мл гексана.

894561

Таблица 2

Нижний предел обнаружения в способе, мг/кг

Объект известном предлагаемом

Г/КХ ТСХ

Мука пшенич0,5 ная

0,1

0,04

Зерно пшеницы

0,001

0,02

0,002

Вода

0,05

Почва

0,25

0,5

Листья

Формула изобретения

Составитель Т. Роденкова

Редактор Н. Грншанова Техред А. Бойкас Корректор Г. Огар

Заказ 11476/71 Тираж 910 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

1, Способ количественного определения п-хлорфенилового эфира гераниола в зерне, воде, почве и зеленых листьях, включающий экстрагирование органическим растворителем, очистку и хломатографический анализ, отличающийся тем, что, с целью повыщения чувствительности определения и снижения затрат, очистку проводят методом препаративной хроматографии на окиси алюминия, а хроматографический анализ осуществляют путем газожидкостной хроматографии.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют гексан для зерна, воды и зеле25 ных листьев.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют диэтиловый эфир для почвы.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Bowman М. С., Wright 1. Е., Bегоza М. Determination of Two Juvenile Hormone-Active Compounds and Their Stability

in Stable F1y Medium. 1. of Econ. Entom, 1973, 66, № 2, р. 301.

2. Redfern R Е. et aIL Activity and

Persistance of the insect juvenile hormone

mimic IH-25 in flour. J. of Econ. Entom., 1975, № 3, р. 377.