Питательная среда для культивирования фага мs2 еsсноriснiа coli к-12

 

Союз Советскнк

Социвпистическик

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Ы АВТОРСЫОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

<„885251 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 18. 03. 80 (21) 2894812/28-13 с присоединением заявки ¹â€” (51) М. Кл.з

С 12 М 7/00

Государственный комитет

СССР по елам изобретений и открытий (23) Приоритет—

Опубликовано 30.1181. Бюллетень Но 44

Дата опубликования описания 301181 (53) У,ЦК 578.8. .093.1(088 ° 87 (72) Авторы изобретения

Г.Н.Никовская, Л.И.Глоба, М.Н.Ротмистров ("

Институт коллоидной химии и химии воды

АН Украинской ССР (71) Заявитель (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА. ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ .

ФАГА MS2 ESCHERICHIA COLI К-12

7,00

Na HPO4

КН Р04

ИН, С1

Mg S04 ° 7Н О

СаС1

Глюкоза

Тиамин бромид

NaC1

7,0-7,1

3,0-3,1

1,0-1, 1

О, 03-0, 031

0,02-0,021

4,0-4,5

1,00

0,03-0,09

0,50-0,51

Изобретение относится к микробиологии..

Известна питательная среда для культивирования фага МБ2 Escherichia

Со!i К-12, содержащая NagHP04 KHgP041

NaC1; NH4CI; MgSO4 7Но0; CaCI, глюкозу и воду (11.

Однако известная питательная среда не обеспечивает получения высококонцентрированного фага MS2.

Цель изобретения — повышение концентрации фага.

Указанная цель достигается тем, что питательная среда для культивирования фага MS2 Escherichia Coli К-12>15 содержащая Мао НР04, KH вР04; NaC1;

МН4С1; М9904 7Н 0; СаС1, глюкозу и воду, дополнительно содержит тиамин бромид при следующем количественном соотношении компонентов, г/л воды: 20

Пример . Фагом М52 заражают с множественностью 10:1 трехчасо вую культуру E.Coli К-12, выращенную при рН 7,4 на среде, которую готовят следующим образом. Отдельно готовят растворы 1 и 2, которые стерилиэуют автоклавированием при 0,05 МПа (0,5 атм.) в течение 15 мин.

Раствор 1. Составляют раствор следующего состава;

Дистиллированная вода, мл 50

Натрий фосфорнокислый двухэамещенный, г

Калий фосфорнокислый однозамещенный, r 3,00

Натрий хлористый,г 0,50

Раствор 2. Составляют раствор следующего состава:

Дистиллированная вода, мл 50

Глюкоза, r 4,00

Кальций хлористый, г 0,02

Алюминий хлористый, г

Магний сернокислый семиводный, r 0,О3

885251

Растворы 1 и 2 смешивают с 900 мя стерильной дистиллированной воды, устанавливают рН 7,4 при помощи стерильного 1 н. раствора едкого натра и вводят 0,06 г тиамида бромида (в виде 6Ъ-ного ампульного раствора).

Культивирование фага MS2 производят при рН 7,4 и аэрации на качалке (128 об./мин при 37 C) в течение 3 ч.

Концентрация фага B отстоянном в течение 12-14 ч при 22 тС лизате, определенная методом Грациа, составляет

1, 5 10 БОЕ/мл.

Для определения влияния добавки тиамина бромида и величины рН на концентрацию фага М92 в полученной культуре проводят опыты, идентичные примеру. Данные, полученные в результате этих опытов, приведены в табл.1.

Таблица 1

Концентрация фага NS2 (T e H pH, HOE/ìä) Концентрация тиамива бро мида, г/л ((7,Э

7,4 7,5 7,6

7,0

7,3

9,0 10

9, 0 ° 1.0

9,2 10

9,2 10

1,0 10

1,2 10

0,01 .

0,03

1 4. 10+2 1 3. 10

9,0 ° 10

1, 5 ° 10 2

1,5 10

9,8-10

1,0 ° 10

0,06

0,09

0,10

0,20

1,0 ° 10

1,0.10

1,0.10

1,0 10

1,2 109

1,0 10

Как видно из данных табл.1, культура фага MS2 с наиболее высокой кон- З5 центрацией инфекционного фага может быть получена на среде, содержащей

0,03-0,06 г/л тиамина бромида при рН 7,3-7,4. Концентрация фага MS2 в культуре, полученной на среде по предлагаемому способу, аналогична 40 концентрации фага в культурах, полученных на известных средах, содержащих белковые вещества.

Использование предложенной среды обеспечивает получение культуры фага

MS2 устойчивой при длительном хранении, о чем свидетельствуют данные табл.2.

Таблица 2

Время хранения культуры 0 фага, мес.

18

Концентрация фага, БОЕ/мл 1,5.10 1,5 10

1, 2 ° 10 1, 3 ° 10 "2 1, 2 -10 "2 1, 3-10"

Как следует из приведенных в табл. 2 55 результатов исследований, полученная на предлагаемой среде культура фага

МЬ2 E.Coli К-12 сохраняет свои инфекционные свойства при 4 С в течение

12-18 мес., что.в 2-3 раза превышает продолжительность хранения культуры фага, полученной на богатой питательной среде. предлагаемая среда повышает генетическую стабильность культуры 65

E.Coli К-12 и в результате применения этой среды можно работать с фагом MS2 s течение 1,5-2 лет без проведения дополнительной селекции бактериальной культуры на компетентность к фагу MS2 °

Стоимость 1 л предлагаемой среды 0 2 р., что в 300 раз ниже стоимости известной питательной среды.

8,0 ° 10

9,0 ° 108

9,0 10

1,2 10

1,2 10

1,0 10

9,0 10

9,8.108

9,2 10

9,8 10

1,0.10

1,2.109

1,5 10

1, 3 10

1, 0 10 "

9,8. 10

8,8 10

9,0 10

9,0 10

9,6 10

9,8 10

9,0 10

8,0 10

885251

Формула изобретения

1,0-1,1

0,03-0,031

0,02-0,021

4,0-4,5

0,03-0,09

0,50-0,51

Составитель С.Малютина

Редактор М.Лысогорова Техред Ж. Кастелевич Корректор,N.КосТа

Заказ 10446/33 Тираж 531, Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðîä, ул.Проектная,4

Пит атель н ая среда для культивирования фага MS2 Escher i ch а Со1 i K-12, содержащая NagHP04, КН2РО4; NaC I;

НН4С1; MgS04 7Н10; СаС lg,глюкозу и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения концентрации фага, она дополнительно содержит тиамин бромид при следующем количественном соотношении компонентов, г/л воды:

Иа НРО4 7,0-7,1

КН 1РО 4 3,0-3,1

НН4 С!

MgSO4. УН О

СаС ln

Глюкоза

Тиамин

5 бромид

ИаС1

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Тихоненко A.Ñ. Ультраструктура вирусов бактерий. И., "Наука", 1968, с.12-13.