Способ получения ацетилированных водорастворимых экстрактов, обладающих иммуностимулирующим действием

з= т и н,. -. он . м з14 . А > "

Союз Советских

Социалистическик

Республик

«»710503

К ПАТЕНТУ (6I ) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 050575(21) 2131286/28-.13 (23) Приоритет — (32) 060574 (51) М. Кл.

A 61 К 39/02

Госуд а рс r вен н ы и ком нтет

СССР ио делам изобретений и отнрнтий (3I) 7415571 (33) Франция (®) УЙК 615. 45: Ь

576. 8, .097. 2 (088. 8) Опубликовано 150180, Бюллетень № 2

Дата опубликования описаиия180180 (72) Авторы изобретения

Пьер Жолль (Швейцария) и Даниель Миглиор-Самур (Франция) Иностранная фирма (71) Заявитель " Ажанс Насьональ де Валоризасьон де ля Решерш (АНВАР) (Франция ) (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЦЕТИЛИРОВАННЫХ ВОДОРАСТВОРИМЫХ

ЭКСТРАКТОВ, ОБЛАДАЮЩИХ ИММУНОСТИМУЛИРУЮШИМ

ДЕЙСТВИЕМ

Изобретение относится к химико фармацевтической пюомышпенности, к получению лекарственных препаратов, применяемых в медицине.

Известен способ получения ацети-. лированных водорастворимых экстрахтов, обладаюоих иммуностимулируюшим действием, путем обработки обезжиренных остатков бактерий смесью пиридина и уксусного ангидрида с последующей экстракцией целевого продукта этанолом, водой, выделением и очисткой физико-химическими методами Ц3.

Однако известный способ не позволяет получить экстракт с высокими иммуностимулирующими свойствами.

Целью изобретения является усиление иммуностимулирующих свойств и сопротивления инфекциям вирусного происхождения, Эта цель достигается тем, что в качестве исходного материала используют псевдодифтерийные палочки Согъ— пЕЬас1еГ1цттт рагчиттт.

Способ осуществляют следующим образом, Клетки псевдодифтерийных палочек предварительно подвергают обеэжириванию, затем ацетилируют путем обработки уксусным ангидридом в присутствии пиридина.

Потом выделяют водорастворимые экстракты путем экстракции спиртом с последующей экстракцией водой.

Водорастворимые экстракты выделяют путем обработки спиртом (этанолом) реакционной среды, полученной после ацетилирования, отделяют нерастворившуюся часть центрифугированием, концентрируют спиртовой раствор.

Затем обрабатывают полученный остаток дистиллированной водой, отделяют нерастворимые в воде фракции центрифугированием и лиофилизируют верхний водный слой, который содержит ацетилированные водорастворимые экстракты, растворимые одновременно в смеси спирт — пиридин и в воде.

В качестве смеси спирт — пиридин используют смесь этанола и пиридина (примерно в соотношении 10: Ц по объему. Все этапы центрифугирования проводят при низкой температуре„ предпочтительно при 0-6 С.

Водорастворимые экстракты могут быть очищены и выделены соответствующими физико-химическими способами о и °"

Формула изобретения и

/. "к !Ф»," ", Ф уГ """ 7105

„ф

Ус,» м а именно хоомахого, фина» адиева» бентах, таких как фЯ4Е-Ъ1одбф АА, или путем фильтроэани1„" например,. через гель полиакриламйда с использованием Bioget Р10, В(одеЕ Рб или

3 op е (Р4. 5

Сырой (неочищенный) водорастворимый экстракт, полученный после Фильтрования, затем хроматографии, элюированный растворителями, такими как разбавленная уксусная кислота или 10 смесь пиридин- уксусная кислота, образован совокупностью ацетилированных веществ, включающих ацетилированный дисахарид-тетрапептид, ацетилированный тетрасахарид-гептапептид, также его димеры, тримеры и тетрамеры, в известных случаях ассоциированные с неаминированными ацетилированными редуцируюшими сахарами. B процессе фильтрования и хроматогра.фии водораствориьые вещества выделяются в порядке .возрастающих молекулярных весов, Активность водорастворимых экстрактов связана с присутствием диаминопимелиновой кислоты.

Ацетилированные водорастворимые экстракты, полученные предлагаемым спо собом,обладают усиленным ию уностимулирующим свойством и сопротивлением инфекциям вирусного происхождения. ЗО

Так у морской свинки водорастворимые экстракты вызывают увеличение процентного содержания антител при дозах выше или равныМ 0,1мг подкожно.

Водорастворимые экстракты совмест- 35 но с добавками, например антибиотиками, можно использовать как средства, уменьшающие -прилив крови. В этих композициях процентное содержание ацетилированных водорастворимых экс- щ трактов обычно выше 0,1%.

Композиции могут быть применены перорально, ректально, парентерально или в виде аэрозолей.

Для взрослого человека дозы составляют 10-50 мг в день. 45

Пример 1. 20 г бактериальных обезжиренных остатков, полученных из клеток Со упеЬас ег1итп

parvum,перемешивают в течение 66 ч при 28ОС в 500 смз смеси уксусный ан- 50 гидридпиридин (2-3 по объему) .затем добавляют 5000 смэ этанола,потом еще перемешивают 5 ч. Нерастворимую часть отделяют центрифугированием (4000 o6/мин). Верхний слой концен- 55 трируют досуха при пониженном давлении, Остаток извлекают 100 см З дистиллированной воды. Нерастворимую в воде часть. отделяют центрифугированием (4000 об/мин) . Верхний слой лиофилизируют. Получают таким образом 3,280 г сырого ацетилированного. водорастворимого экстракта.

ЦНИИПИ Заказ 8785/53

Филиал ППП . Патент, r. У

Пример 2. Ацетилированный водорастворимый сырой экстракт, полученный в примере 1, очищают путем Фильтрования на колонне с

BjojreEP10, собирая фракции по 1,5 см

М 1-500, причем элюирование осуществляют с помощью 0,1 н.уксусной кислоты и затем оптически контролируют на спектрофотометре при 220 и 280 нм.

Фракции Р 293-340 объединяют и диофилизируют. Получают таким образом

0,195 r .водорастворимого экстракта, который очищают хроматографией на DE AE- ElogeR А уравновешенном 0,01 М раствором пиридина с рН 7,7. Элюируя 0,01 М раствором пиридина, получают 0,110 r вещества, обогащенного диаминопимелиновой кислотой, затем, элюируя градиентом растворителя от 0,01 до 0,2 M раствора пиридина с рН от 7,7 до 5,5, получают 0,080 г ацетилированного водорастворимого экстракта.

Водораствориьый экстракт представляет собой порошок желтоватого цвета, включает следующие аминокислоты: алании, глутаминовая кислота, диаминопимелиновая кислота, аспарагиновая кислота и глицин; аминосахара: N-ацетилглюкозамин, я -ацетилмураминовая кислота; редуцирующие неаминированные сахара: манноза, глюкоза и следы галактозы. 1олекулярный вес (считая на основание с 3 остатками аланина в молекуле) 3750+250, Процентное содержание аминокислот 22+33| аминосахаров 26+2%.

Предлагаемый способ позволяет получить ацетилированные водорастворимке экстракты, которые обладают усиленными иммуностимулирующими свойствами и сопротивлением инфекциям вирусного происхождения и могут быть использованы в терапии человека или в ветеринарии.

Способ получения.ацетилированных водорастворимых экстрактов, обладающих иммуностимулирующим действием, путем обработки обезжиренных остатков бактерий смесью пиридина и уксусного ангидрида с последующей экстракцией целевого продукта этанолом, водой, выделением и очисткой Физикохимическими методами, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью усиления иммуностимулирующих свойств и сопротивления инфекциям вирусного происхождения, в качестве исходного материала используют псевдодифтерийные палочки Cor one Üàñ1Åã îò parture

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент СССР по заявке 91937749/

28-13, кл, A 61 К 39/02, 1973.

Тираж 673 Подписное жгород, ул. Проектная,4