Способ получения растворимого антигена

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. саид-ву(22) Заявлено 071277(2т) 2558971/28-13 (54)М. Кл,2

А 61 К 39/02 с присоединением заявки ¹

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет (З) УДК 616-097 (088. 8) Опубликовано 1505.79. Бюллетень № 18

Дата опубликования описания 150579 (72) Авторы изобретения

В.С. Самсонова, Н.л. Бакулина, Е.A.Ìàìàåéа и E. Н;Сулимов

Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИИЯ РЛСТВОРИМОГO АНТИГЕНА

Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано для дифференциальной диагностики коклюша и паракоклюша.

Известен способ получения растворимого антигена для изготовления эритроцитарного диагностикума йутем экстракции сухой биомассы С последующим осаждением из экстракта целевого продукта спиртом 11) .:

Однако известный способ не обес- печивает получейия высокоспецифи.ческого двухкомпонентного паракоклюшного антигена. с

Целью изобретения является получение высокоспецифического двухкомпонентного паракоклюшного антигена °

Цель достигается тем, что по предлагаемому способу экстракцию ведут соленым раствором, целевой продукт осаждают 4, 5-5,5 объемами спирта, далее проводят переосаждение 1,5-2,5 объемами спирта и затем прогревают и обрабатывают формалином.

Кроме того, целевой продукт iipoгревают в течение 15-45 мин на кипящей водяной бане.

Способ осуществляют следующим образом.

П р и м Е" р. К 1 r сухой микробной массы (во Флаконе на 500 мл) добавляют 1,00 мл 0,85%-ного раствора хлористого натрия рН 7,2, 40 r микробус, взвесЬ тщатею(ьиб перемешивают и рН взвеси доводят до 7,3 с помощью "индикатора" бромтимолблау.

Затем флаконы со взвесью микробов встряхивают в течение 4 ч на шуттельаппарате (1000-2000 колеб./мин) при +6 = +10 С. После встряхивания суспензию выпивают, центриФугируют (для отделения неразрушенных микробов) при 3-5 тыс. об/мин в течение

30 мин при 0 — +6 C. Полученный центрифугат (солевой экстракт) используют для осаждения. спиртом.

К охлажденному солевому экстракту (температура +6-+10 С) добавляют

5 объемов охлажденного до температуры -15 С --20оС спирта и смесь о оставляют в холодильннке на 1,5-2 ч для формирования осадка. Затем выпавший осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин в течение

20 мин при температуре — боС. Недостаточную жидкость сливают, а осадок растворяют в забуференном фиэи3 662 ологическом растворе рН 7,2 в объеме, равном объему экстракта, взятого для осаждения. Нерастворившийся осадок отделяют центрифугированием при 30005000 об/мин в течение 20 мин при

О С-+6 C, осадок отбрасывают, а центрифугат используют для повторного 5 осаждения спиртом.

К охлажденному центрифугату (+6—

+10 С) добавляют два объема охлаждено ного спирта, (-15О C- -2 Оо С) и смесь оставляют в холодильнике на 1-1,5 ч. 10

Выпавший осадоК отделяют центри» фугированием при 3000 об/мин в тече- ние 20 мин при температуре -6ОC.

Надооадочную жидкость сливают, а осадок раотворяют в забуференном фи- 15 зиологическом растворе рН 7,2 в обьаме, равйом объему центрйфугата, . в з ят ого длй " о с ажд ения., Нерастворившийся осадок " бтделя-" ют центрифугированием при 30005000 об/мин в течение 20 мин при"

0 +6 С, осадок отбрасывают, а цент; рифугат -используют для дальнейшей обработки.

Полученный центрифугат нагревают на кипящей водяной бане в течение

15-45 мин. Выпавший осадок-"отделяЮт центрифугированием, отбрасывают„ а центрифугат (растворимый паракоклюшный антиген) подвергают дальнейшей обработке. Затем к раствору антигена добавляют раствор коммерческого нейтрального формалина в количестве

1Ъ по отношеяию к объему антигена. ьнтиген, обработанный Формалином,. прййеняют при изготовлении эритро- . цитарного паракоклюшного диагности104 кума. Раствор антигена хранят в холодильнике при +6 С-+10 С.

Предлагаемый способ позволяет получать растворимый антиген, содержащий два антигенных компонента, который может быть использован для приготовления высокоспецифического паракоклюшного эритроцитарного диагностикума, необходимого для дифференциальной диагностики коклюша и паракоклюша.

Формула изобретения

1. Способ .получения раствориМого антигена для изготовления эритроцитарного "диагностикума путем экстракции сухой биомассы с после дующим оса>к)(ением из экстракта целевого продукта"спиртом, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью получения высокоспецифического двухкомпонентного паракоклюшного антигена,- экстракцию ведут солевым раствором, целевой продукт осаждают

4,5-5,5 объемами спирта, далее проводят переосаждение 1,5-2,5,объемами спирта и затем прогревают и обрабатывают формалнном, 2. Способ по п.1, о т л и ч а ю- шийся тем, что целевой продукт прогревают в течение 15-45 минут на кипящей водяной бане.

Источники информации, прийятые во внимание при экспертизе

1. Тезисы докладов конференции по эпидемиологии и микробиологии коклюша, М., 1968, с.108.

Составитель С.Малютина

Редактор В.Трубченко Техред 3. Фанта КорректорЕ.Папп

Заказ 2545/Ь Тираж 671 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и Открытий

113035 Москва Ж-35д Раушская наб ° д.4 5

Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.11роектная,4