СССР по дмам нзобретен ай н открытий (72) Авторы Н,М. Голощапов, Э.Ф. Лаврецкая, Л.Т. Чаморовская, ИЗОбрЕтЕиия B.B. Чугунов, Б. Е. Иванов, B. С ° Резник, Н.Г. Пашкуров, Н.Н. Буслаева, Г.Ф. Заика и Ю.С. Бутов

2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский (71) залвйт@ли институт им. н. и. пирогова и научно-исследовательский институт по биологическим испытаниям химических соединений

4-AMHHO-4 -ДИФЕНИЛСУЛЬФОНАММОНИЕВАЯ СОЛЬ

6-МЕТИЛ-2,4-ДИОКСО-1,2,3,4-ТЕТРАГИДРОПИРИМИДИНА, ОБЛАДАЮ(|Д Я ПРОТИВОЛЕПРОЗНОЙ

И ПРОТИВОСУДОРОЖНОЙ АКТИВНОСТЬЮ (54) Изобретение относится к новому производному диаминодифенилсульфона, обладающему противолепрозной и противосудорожной активностью.

Известно применение для лечения лепры диаминодифенилсульфона {lj и {2)

Однако это средство токсично.

Цель изобретения вЂ” расширение ас- сортимента средств воздействия на организм и снижение их токсичности,.

Это достигается 4-амино-4 -дифенилсульфонаммониевой солью 6-метил -2, 4-диок с о-l, 2, 3, 4-тетрагидропиримидина формулы

-н цО, н,. н обладающей противолепроэной и противосудорожной активностью.

Такую соль получают взаимодейстФ вием 4,4 -диаминодифенилсульфона с эквивалентным количеством б-метилурацила при температуре 240-260 С или в растворителе при кипячении, например в бензоле °

Способ аналогичен известному взаимодействию органических оснований с кислотами Льюиса-Бернстеда {2) .

Пример 1. Смесь 2 48 r (О, 01 моль) 4, 4 -диаминодифенилсульфона (ДДС) и 1, 26 г (О, 01 моль ) б-метилурацила нагревают на масляной бане при 240 С в течение 15 мин, периодически в збалтыва я. Прозрачный расплав охлаждают и получают 3, 74 4-амино-4 -дифенилсульфонаммониевой соли б-метил-2, 4-диоксо-l 2, 3, 4-тетрагидрэпиримидина (выход количественный) .

Полученная соль представляет собой белый мелкокристаллический порошок без запаха, горьковатый на вкус, ус15 тойчивый на воздухе. Т.пл.2бдоС;выдер- живает сухую стерилизацию при 100 С. о

В ИК-спек тре имеютс я полосы в области 2700-2900 см-, характерные для поглощения NH, которые отсутствуют

20 в исходных соединениях, т.е. в ДДС и б-метилурациле.

Найдено,Ъ: С..46,1; Н 4,3; N 35,2

Czz Н|у Н Сзд ° CsH Ир Oz

Вычислено,Ъ: C 46,4; H 4,1; N 35,0 °

Пример 2 ° Смесь 2 48 г (О, 01 моль) 4,4 -диаминодифенилсульфона и 1,26 r (0,01 моль), б-метилурацила кипятят при перемешивании в течение 30 мин в 50.мл бенэола. Фильтруют, ЗО сушат и получают 3,74 г 4-амино-4 687074

-дифенилсульфонаммониевой соли 6-метил-2, 4-диоксо-l, 2, 3, 4-тетрагидропиримидина.

Пример 3. Смесь 2,48 г (0,01 моль) 4,4 -диаминодифенилсульфонаf 1,26 r (0,01 моль) 6-метилурацила нагревают на масляной бане при

260 С в течение 10 мин, периодически

Ю взбалтывается. По охлаждении получают

Ф кристаллы 4-амино-4 -дифенилсульфонаммониевой соли 6-метилурацила (выход количественный).

В эксперименте на мышах-самцах весом 18-22 г и крысах-самцах 180200 г изучены противосудорожные и психотропные свойства 4-амико-4 вЂ”

-дифенилсульфонаммониевой соли 6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидина. Изучено влияние вещества на действие судорожных агентов, максимального электрошока (50мА, 0,2 сек„

50 гц для мышей и 150мА, 0,2 сек, 50 гц для крыс), коразола 110,мг/кг подкожно или 1%-ный раствор внутривенно, стрихнина (1,4 мг/кг),никотина (7, мг/кг), ареколина (25 мг/кг), на активность эпилептического очага, созданного аппликацией пенициллина на сенсемоторную кору головного мозга крыс (50 ед. в 0,001 мл) через вживленную канюлю, запись ЭЭГ через электроды, вживленные в кору и гипокамп. Сравнение проводили с эталонными противосудорожными фенобарбиталом и бензоналом.

Изучено также влияние препарата на поведение животных и эффекты взаимо- 3S действия со стимуляторами и блокаторами медиаторных структур мозга: фенамином (6 мг/кг), апоморфином (10 мг/кг), Л-ДОФИН (300 мг/кг), ареколином (25 мг/кг), резерпином 40 (2,5 мг/кг) . В случае обнаружения положительного противосудорожного эффекта вычисляли средние эффективные дозы ЭДу (по,методу Литчфильда и Уилькоксона, 1949) 45

Обнаружено, что препарат обладает выраженной противосудорожной актив,ностью. Особенно четко она проявляется в тестах с электросудорожным припадком, в других тестах препарат эффективно защищает животных от тонической фазы припадка. По широте терапевтического действия он значительно превосходит эталонные противосудорожные препараты.

Препарат повышает пороговую дозу коразола на 30-60%, а при введении его животньм в дозе 110-80 мг/кг тонико-экстензорная фаза не развивается совершенно. При изучении пенициллинового эпилептического очага оказалось, что препарат не предупреждает развитие очага, но ослабляет его активность, уменьшая количество припадков и межприступных разрядов на ЭЭГ на 40-60%. В этом он уступает действию диазепама и фенобарбитала, которые в дозе 3 и 10 мг/кг соответственно полностью подавляют активность эпилептического очага.

Исследуемый препарат не влияет на гиперкенез, вызванный холиномиметиками никотином и ареколином.

В противоположность противосудорожным типа фенобарбитала, бензонала препарат не оказывает седативного действия на животных, не вызывает нарушения координации движений и мышечного расслабления. В больших дозах (450-500 мг/кг) он дает возбуждающий эффект, усиливает двигательную активность животных. В дозах, проявляющих противосудорожную активность, препарат потенцирует действие снотворных, продлевает стереотепию, вызванную фенамином, апоморфином,Л-ДОФИН, ослабляет птоз и гипотермию, вызванную резерпином. Это сближает его с группой актидепресантов.

Таким образом, действие предлагаемого препарата обеспечивает сочетание своеобразных противосудорожных и психотропных свойств, поэтому применение его в клинике для лечения больных эпилепсией с эффективными нарушениями перспективно.

Противолепрозная активность проверялась на белых мышах, зараженных микобактериями, взятыми от больного лепрой человека (штамм 166), Эти комплексы испытывают на 40 мы- шах., зараженных в пах и в ламку подкожно микобактериями штамма 166, выделенного от больных. животных лечат 4-амино-4 -дифенилсульфонаммониевой солью б-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидина перорально, начиная со дня заражения, В каждой серии по 20 мышей.

В качестве контроля берут две группы мышей по 20 мышей в каждой, зараженных одновременно с опытными мышами тем же штаммом микобактерий, той же дозой подкожно в лапку и в пах. Контрольных мышей содержат в одинаковых условиях с опытными, ио не получают каких-либо препаратов.

В контрольной группе животных, зараженных в пах, к концу третьего месяца заражения в месте инокуляции сформировались подкожные лепромы размером 0,5 х 1 см, а у животных, зараженных подкожно в лапку, появилась эритематозность кожи и припухлость.

При бактериоскопическом исследовании органов поражения животных обеих контрольных групп выявлено громадное количество микобактерий.

В группе животных, получавших исследуемый препарат, развитие лепром и поражение лап ни в одном случае не наблюдалось.

При бактериоскопическом исследовании ткани,из мест инокуляции в не687074

Таблица 1

Токсичность 4-амино-4 -дифенилсульфонамчониевой соли! б-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидина и ДДС при введении внутрь бельм мышам.

0 0

1 2

2 3

3 4

5 5

500 10

1000 10

2000 10

Исследуемая соль

3000 10

4000 10

0 0 1/9 650

0 0 6/4 (500+645) мг/кг

0 Q 10/0

0 1

2 4

5 5

500 10

1000 10

2000 10 которых полях зрения отмечались единичные микобактерии, представляющие собой, по-видимому, остатки инокулированного материала.

Результаты экспериментов показали, что 4-амино-4 -дифенилсульфонаммониевая соль б-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4тетрагидропиримидина полностью задерживает размножение введенных микобактерий и развитие у мышей клинических и бактериоскопичеСких проявлений инфекционного процесса. Полученные данные позволяют рекомендовать его для клинического испытания.

Острую токсичность определяют на белых мышах-самцах весом 18-20 г и на наркотизированных кошках при введении препарата внутрь (зондом в желудок) в виде 10 и 20% водной взвеси.

При однократном введении внутрь ненаркотизированным кошкам препарат в дозе 100 мг/кг никаких видимых изменений в.поведении и общем состоянии животных не наблюдается. В дозе

500 мг/кг соли через 30, 60, 90 мин после введения наблюдается рвота и легкое беспокойство, затем у животных развивается стереотипия, которая отмечается и на следующие сутки после введения препарата; на 3-ьи сутки стереотипия постепенно ослабевает, на 4-е сутки состояние животных нормализуется.

Ьелым крысам обоего пола весом

160-180 r препарат вводят внутрь (зондом в желудок) в виде водной взвеси в течение 3 месяцев ежедневно

Мышам препарат вводят в дозах 500, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000 мг/кг.

Каждую дозу испытывают на 10 животных. лаблюдение проводят в течение

5 суток.

Установлено, что через 20-25 мин после введения препарата мьаГам у всех животных отмечается легкое, постепенно усиливающееся возбуждение, через 90-120 мин мыяи начинают метаться по клетке иэ стороны в стор< ну, вскакивать на задние лапки, координация движений нарушается, животные были возбуждены и на следующие сутки; на третьи сутки животные постепенно успокаиваются. Результаты исследований острой токсичности препаратов на мышах приведены в табл. 1 (ЛД рассчитывают по Литчфилду и ,уилькоксону) .

0 0 0

0 0 3/7 1800

0 0 5/5 (130042520) мг/к r

0 0 7/3

0 0 10/О (кроме субботы и воскресенья) иэ расчета 400 и 800 мг/кг и 150 и 300 мг/кг

ДДС (соответственно 1/4 и 1/2 ЛД р ,для мышей) . Каждую дозу исследуют на

20 животных (10 вЂ” самцов и 10 вЂ” самок); 20 крыс (10 самцов и 10 самок) оставляют как контрольных животных.

В течение опыта ведут наблюдение за весом, общим состоянием и поведением животных, картиной периферической крови (гемоглобин, эритроциты, лейкоциты) .

Наблюдения показали, что изучаемая соль в дозе 4430 мг/кг на протяжении всего опыта не вызывала сувЂ” щественных изменений в поведении и общем состоянии животных. От большой дозы (800 мг/кг) у крыс возникает

687074

12-й день введения препарата животные этой группы стали более подвижными, состояние их постепенно улучшилось и в дальнейшем их поведение существенно не отличалось от поведения контрольных животных (см. табл. 2 и 3) °

Та блица 2 соли и ДДС на привес крыс. цианоэ слизистых и кожного покрова лапок. На 3-й день введения одна самка пала, на 4-й день пали еще 3 самки, после 8-го и 9-ro дня введения препарата пало 5 самцов. на вскрытии обнаружили резкое увеличение надпочечников, кахексия. На 10Влияние изучаемой

400 0

800 0

99 22,2

100 l14,9

102+20,8

95+29,8

Соль

93+15,9

30 5,5

70 22,0

27- 5,5

150 0

300 0

10 100- 12,2

10 95+13,7

Контроль 0

Таблица 3

Влияние соли и ДДС на картину периферической крови

400 5

0 12,6 8100 5210000 15,4 11200 5110000

0 13,6 9500 5400000 13,0 13700 4290000

Соль

0 ll 5 14000 3000000 14,0 17500 4500000

0 12,7 9000 4030000 10,6 16000 4410000

0 14,0 11000

0 15 0 12000

0 14,8 11000

0 14,6 10000

Как видно из данных табл. 2 животные, получавшие соль в дозе 500 мг/кг, по привесу существенно не отличаются от контрольных. Привес контрольных животных отличается от привеса крыссамок, получавших ДЦС в дозах 150 и

300 мг/кг. Эти животные отстают в весе от контрольных более, чем в 3 раза. Картина периферической крови при введении препаратов существенно не изменилась только у самок, получавших ДДС: наблюдается небольшая тенденция к гипохромной анемии.

800 5

150 5

300 5

4900000 13,5 7600 4600000

5000000 12,2 7000 4000000

2800000 12,5 8200 4600000

5200000 10,0 8000 4000000

После. окончания введения препаратов животные были забиты путем декапитации, часть сразу, часть через

2 недели.

При микроскопическом исследовании крыс, получавших внутрь в течение трех месяцев соль в дозе 800 мг/кг и диаминодифенилсульфон в дозе

300 мг/кг, каких-либо изменений не обнаружено.

При микроскопическом исследовании срезов головного мозга, гипофиза, легких, сердца, почек, желудка, селе687074

Составитель Н. Орлов

Редактор и ; Данилович Техред 3.Фанта Корректор М. Пако .

Тираж 513 Подписное

ЦНИИПИ Государственного ксмитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, E-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 5654/24

Филиал ППП Патент, г.- Ужгород, ул. Проектная, 4 зенки, костного мозга, гонад, надпочечников, окрашенных гематоксилинэозином, патологических изменений не обнаружено. В печени живОтных обеих групп выявлены дистрофические изменения,-наиболее выраженные у животных, получавших диаминодифенилсульфон °

Таким образом, проведенные испытания показывают, что 4-амино-4 -дифенилсульфонаммониевая соль .6-метил-2 4-диоксо-1 2Ф3.4-тетраги р пири - 10 дина значительно (в 5-7 раэ) менее токсична, чем диаминодифенилсульфон при хроническом введении в эквитоксических дозах, токсические явления (уменьшение веса и патоморфологические изменения в печени) более выражены у животных, получавших ДДС.

Формула изобретения

4-Амино-4 -дифенилсульфонаммоние вая соль 6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидина 20

М н 50,, 4) .

О " сН обладающая противолепрозной и противосудорожной активностью.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М., Медицина, 1977, ч. 2, стр. 277.

2. Несмеянов A.H. и Несмеянов Н.A.

Начало органической химии. М., Химия, 1970, стр. 84.