Способ получения производных соматостатина

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Сова Советских

Социалистических

Республик (1 е) 58683 7

К ПАТЕНХУ (61) Дополнительный к патенту (51) М. Кло

С 07 С 103/52 (22) Заявлено09. 12.74 (21) 2093830/04 (23) Приоритет — (32) 10. 12.73

0 1.08.74 (31) 423352,493595 (33) CEA

Государственный комитет

Соаата Мнннстроа СССР оо делам изооретеннй и открытий (43) Опубликовано30. 12.77.Бюллетень ¹ 48 (53) УДК 547.964. .4.07(088. 8) (4б) Дата опубликования описания 04.01.78

Иностранцы

Ганс Уэли Иммер, Казимир Сестань, Вернер Роберт Нельсон и Манфред Карл Готц (Канада) (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма

Ауэрст Маккенна энд Харрисон Лимитед (Канада) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ СОМАТОСТАТИНА

Изобретение относится к улучшенному спо- собу синтеза производных соматостатина, физиологически активных соединений, применяемых в клинической фармакологии для лечения акромегалии и управления ювенильным диабетом, Известны способы синтеза соматостатина с использованием твердофазного метода заключающегося в том, что исходную ам«нокислоту ковалентно связывают с последу- то ющим наращиванием пептидной цепи путем конденсации с соответствующей аминокислотой 1 1, (2).

Однако при таком методе конечный продукт получают недостаточно чистым, посколь» 15 ку очистка возможна лишь на заключительной стадии синтеза, поэтому этот метод не может быть использован в крупномасштабном производстве пептидов, молекулы которых со размерны с мопекупами соматостатина. Кро-Qp ме того, в указанном методе обязательна зашита вторичных функциональных групп, например сульфидной, амннной или гидроксильной, которые являются очеиь стойкими группами и по, завершении процесса удаляются 26 в жестких условиях, что также приводит к загрязнению конечного продукта.

С целью улучшения качества продукта и возможности его крупномасштабного синтеза предлагается способ получения соматостатина и его производных, обладаюших активностью природного гормона, с использованием азидного метода синтеза пептидов (3)

Способ получения производных соматостатина обшей формулы

СЦа СНф-ГОГли-Цнс- Л из-Асн-Фен-фен«Трп-Лиз-Трн-Фен-Трн-Сер- .K HCHR -СН (Q, ф.—

Э где g — водород или аминогруппа;

К - водород или карбоксип, есль

R< -аминогруппа, R -карбоксил, то символ ,.Лнз в положении 4 и 9 может также представлять Р Лиз, с использованием конденсации соответствующих аминокислот и удалением блокируюших групп, заключается в том, что проводят реакцию сочетания азииным методом гептапептида общей формулы

СНа СНйа-СO-Гли-Бис(4 ) Лиз(Бок)-Асн-феи Фен-КН КН (Il)> где R — водород или БокКН, еС -Апмили Трт, с гептапептидом формулы 86837

Н-ТрпЛиз(Бок)-Трн(P )-Фен-Трн(" )-Сер(p )- К Н-CHR -СН $ —,6 (.1И) где R имеет указанные значения; г, y > и p - водород или группа Бут;

/3 — группа Ацм или Трт, 5 и полученное линейное производное обшей формулы

CH CHR -СО-Гли-Цис(d )-Лиз(Бок)-Асн-Фен-фен-Трп-Лиз(Бок)-Трио )-Фен-Трн(y )-Сер()-КН»СНК -СН,5- Ф(® где R R3 gL Д, f ) и имеют с а 10 указанные значения, окисляют йодом или тиоцианогеном в соответствуюшее циклическое дисульфидное производное общей о м ы

СН CHRIS-»СО-Гли-Цис-Л из (Бок)-Асн 35

-феп-Фен-Трп Низ(Бок)-Трн ()-фен-Трн (1)-Сер(у" )-NH -CHR -СНя {U) с последуюшим удалением всех оставшихся блокируюших грулп в кислых условиях и вы- 20 делением производных соматостатина общей формулы (1 ).

Пример 1, Трет-бутилоксикарбонилаланилглицинметиловый эфир (Бок-лла-Гли,-ОМе).

25 о

В охлажденный до 0 С раствор 14,18 г трет-бутилоксикарбонилаланина (0,075 моль) и 10,1 r 1-оксибензотриазола (0,075 моль) в 150 мл диметилформамида (ДМФ) при перемешивании добавляют 18,2 г (0,088 моль)30 дициклогексилкарбодиимида (ДЦК). Затем раствор перемешивают 1 ч при 0 С и 1 ч о при комнатной температуре. В полученную смесь добавляют раствор 10 r (0,0798 моль) хлоргидрата глицинметилового эфира в 3S

400 мл ДМФ и 12, 8 мл этилморфолина и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Выпавший осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают досуха. Остаток растворяют в этилацетате, удаляют нерастворившуюся часть фильтрованием, Расг вор промывают 100 о-ным водным раствором лимонной кислоты (3x75 мл), насьпценным раствором бикарбоната натрия (Зх100 мл), насьпценным раствором хлористого натрия 45 (2х50 мл), сушат над сульфатом магния, растворитель отгоняют и получают целевое соединение в виде л1асла, ЯМ Р-спектр (СЮС() Й 1, 3 3 (Ь 3 Н ), 1,42 (S, 9H), 3,75 ($, ЗН), 50

Пример 2, Трет-бутипоксихарбонипани лглицин (Бок-А па-Гли-ОН }.

При иеремешивании к раствору 86 r трет-6утил оксикарб онил алан илгл инин метил ового эфира (0,33 л1оль), полученного в 5% примере 1, в 600 мл метоксиэтанола добавляют по каплям 350 мл 1 н. раствора гидрата окиси натрия в твчение нескольких минут, смесь перемешивают 2 ч, охлаждают и осторожно 60 мл 50%,-ной лимонной кислоты доводят рН до 4. Растворитель от» гоняют, остаток растворяют в этилацетате, нерастворившиеся компоненты удаляют фильтрованием, фильтрат сушат над сульфатом * магния, растворитель отгоняют, сырой продукт перекристаллизовывают из смеси этилацетата с петролейным эфиром при 60о

80 С и получают целевое соединение, Ь"-) >-9 6 (с 1 ДМФ) т пл 128оС (разл)

Пример 3. Трет-бутилоксикарбонилаланилглицин-2,4,5-трихлорфениловый эфир . (Бок-Ала-Гли-ОТхл ), В охлажденный до температуры от -1 0; до -150Ñ раствор 56 г трет»бутилокси карбонилаланилглицина (0,227 моль), полученный в примере 2, и 58,5 r 2,4,5.-трихлорфенола (0,237 моль) в сухом этилацетате (600 мл) по каплям при перемешивании добавляют раствор 61 г ДЦК (0,295 моль) в 100 мл этилацетата, Смесь перемешивают 2 ч при -10 С, 2 ч. при о

0 С и в течение ночи при комнатной температуре, Выпавший осадок отфильтровывают, растворитель отгоняют, остаток растворяют в этилацетате, удаляя нерастворившиеся компоненты фильтрованием, растворитель отгоняют, остаток кристаллизуют вначале из серного эфира, затем иб смеси этилацетата с петролейным эфиром и получают целевое соединение, т,пл. 109-111 С, о (<) g -18,7 (с 1; ДМФ).

Пример 4. Трет-бутилоксикарбонилфенилаланилфенилаланилм етил овый эфн р (Бок-Фен-ф ен-ОМ е ), о

В охлажденный до 0 С раствор 21,2 г (0,08 моль) трвт-бутилоксикарбонилфенилаланина (Бок-Фен-ОН) и 10,8 г (0,08 моль)

1-оксибензотриазола в 120 мл ДМФ при перемешивании добавляют 18,3 r (0,089 моль) о

QUK. Смесь перемешивают при 0 С 2 ч и добавляют к ней раствор 17,6 г (0,082 моль) хлоргидрата фенилаланинметилового эфира в

240 мл БМФ и 14 мл этилморфолина, зао тем перемешивают в течение i ночи при 25 С.

Осадок отфильтровывают, фильтрат,упарива- ют при пониженном давлении, остаток растворяют в этилацетате, раствор промывают

10%-ным водным раствором пимонной кисло: ты (2х160мл),насыщеннымрастворомбикарбоната натрия (ЗХ200 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия (2Х120 мл), сушат над сульфатом магния, упаривают, остаток кристаллизуют из смеси этилацетата с петролейным эфиром и получают целевое соединение, т.пл. 123-124 С fag -13,4 (с 1; ДМФ).

Пример 5. Трифторацетат фенипанилфенилаланинметилового эфира (Н-фен-Феы-ОМе СГ СООН).

586837

25 г (0,058 моль) трет-бутипоксикарбонилфени апанилфен илаланинметип ового эфира, полученного в примере 4, растворяют в холодной трифторуксусной кислоте при 0 С, раствор перемешивают 1,5 ч, кислоту оттоняют при пониженном давлении, к остатку добавляют 1-5 мл метанола, продукт осаждают эфиром, отфильтровывают, промывают эфиоом и получают целевое соединение, т. пл. 250 С (разп; метанол-изопропиповый 1о спирт), f4) 10,6 (с 1; ДМФ).

Пример 6. Трет-бутилоксикарбониласпарагинилфенипаланипфенипаланин метиловый эфир (Бок-Асн-фен-фен-ОМе).

К раствору 23,7 r (0,054 моль) Н- 15

-Фен-Фен-ОМе CF -COOH, полученного в примере 5, в 100" мл ДМФ добавляют, 7,84 мл:H -этилморфолина и 22,6 r (0,055 моль) трет-бутипоксикарбонипаспарагинтрнхпорфенилового эфира. Смесь вьщер- 20 о жйвают при 0 С 3,5 дня, растворитель отгоняют" к остатку добавляют эфир и растирают в порошок, который отфильтровывают. Перекристаллизацией из метанола получают целевоесоеаинение,т. пл. 194-195 С f4) -34,0 25 (с 1; ДМФ).

Пример 7, Бензилоксикарбонил- Я6

-тре ь -бутилоксикарбониплизипаспарагинилфенилаланипфенилаланинметил овый эфир (3-Л из-(Бок) -Асн-Фен-Фен-OMe j . 30

22,5 r (0,0417 моль) Бок-Асн«фен-Фен-ОМе, полученного в примере 6, растворяют в холодной трифторуксусной кислоте (150 мл), перемешивают при 0 С 1 ч, растворитель отгоняют, остаток растворяют в метаноле и эфиром осаждают соединение .формулы Н-Асн-Фен-Фен-ОМе CF СООН, в о ь охлажденный до О С раствор О,5 r (0,0172 моль) которого в 70 мл ДМФ при перемешиваний добавляют 2,4 мп К -этилморфолина и раствор 10 r соединения формулы 3 Лиз-(Бок)-ОК р (0,02 моль) в 50мл

ДМФ. Смесь выдерживают при 0 С 2 дня, о растворитель отгоняют при пониженном давлении, остаток перекристаллизовывают из ме-45 танола и получают целевое соединение, т.пл. выше 200 С.

Вычислено,%: С 63,79; Н 6,66; М 10,88i

Найдено,%: С 62,94; Н 6,71; М 10,49.

Пример 8. Дициклогексиламиновая соль И -(а -фенил-5-хлор-2-оксибензипиден)- I5 -ацетамидометилцистенна (СЯ-Цис(Ацм)- ОН КН (С,Н, ) Д.

К раствору 19,6 r (0,085 моль) хлорranрата Я цетамидометипцистеина и б

19,7 г (О, Хьб моль) 5-хлор-2-оксибензофенона в растворе гидрата окиси тетраметиламмония в метаноле (340 мл, 0 S ммопь) добавляют 5 r гидратирован60

Його алюмосиликата щелочного металла (молекулярные сита ЗА), смесь перел ешииют

1 день при комнатной телшературе. Твердые продукты отфильтровывают, фипьтрат упаривают досуха, остаток растворяют в

800 мл смеси воду со льдом и непрореагировавший кетон отфильтровывают. Маточник охлаждают, подкиспяют твердой лимоннои кислотой до рН 4 и экстрагируют этилацетатом (ЗХ200 мл). Экстракт прол ывают хоподнои водой, сушат над сульфатом магния, сульфат магния отфильтровывают, к фильтрату добавляют раствор 15,5 г (0,085 моль) дициклогексиламина в 50 мл этипацетата и получают целевое соединение . в виде кристаллов, т.пл. 161-163 С.

Пример 9. Гидрат — R — (Ы. -фенип-5-хл ор-2-оксибензил иден ) — S -ацетамид ометипцистеинип- Я -трет-бутнпоксикарбониппизиласпарагин илфенилаланипфенилаланинметиловый эфир (СМ-Цис (Ацм )-Лиз (Бок)-Асн-Фен-Фен-ОМе Н О3.

Дициклогексипаминовую соль N. -(Ф фенил-5-хлор-2-оксибензилиден) — S -ацетамидометилцистеина (12,0 г; 20,4 ммопь) суспендируют в 200 мп воды, 55 мл 10%- ной пимонной кислоты доводят рН суспензии до 4. Свободную кислоту экстрагируют этипацетатом, экстракт промывают водой и сушат в течение ночи над безводным сульфатом маг. ния при 0-10 С (при комнатной температуре: происходит разложение), Растворитель отгоняют, остаток растворяют в 150 мл ДМФ и получают раствор свободного цистеинового производного.

Раствор 11,7 г,(0,0152 мопь) гетра пептида с блокированными группами формулы

3-Л из(Бок) -Асн-Фен-фен-ОМе, полученного в примере 7, в 210 мп сухого дистиллиро- ванного ДМФ и 210 мл ледяной уксусной кислоты гидрогенизируют в присутствии

1,7 г катализатора (5% Рц/С) (восстановление:завершается(в течение 2 ч). Катализатор1отфильтровывают, растворитель отгоняют, остаток растворяют в метаноле, осаждают серным эфиром и получают тетрапептид, не содержащий блокирующих групп, формулы Н Лиз(Бок)-Асн-фен-фен-ОМе.

В полученный раствор цистеинового производного с блокированными группами в

ДМФ; прибавляют . 2,7 г (0,02 моль) 1-оксибензотриазопа, затем в охлажденную до о

-10 С смесь при перемешивании добавляют

4.1 r (0,02 моль) - QUK и выдерживают при д о

-10 С 30 мин, при 0 С 1 ч и при комнатной температуре 1 ч. Раствор тетрадекапептида, не содержащего блокирующих групп, в 200 мл ДМФ и 2,6 мл К-этипморфолина о добавляют в охлажденную до 0 С смесь и

586837

8 непрерывно перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, Выпавший осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают досуха, остаток растворяют в метаноле, осаждают эфиром и продукт кристаллизуют из смеси метанола с водой, получая целевое соединение, Ы р-33,3 (с 1; ДМФ), ЯМР -спектр (CD С ), 4:1,35 (S., 98), 1»8(S»»3H)» 3»55 (4 » ЗН)» 1 0 1 6 (от, 6Н), ip

Пример 10. Трет-бутилоксикарбонилаланилглицип- Q -ацетамидометилцистеинил- и -трет-бутилоксикарбониллизиле, аспа оагинилфенилаланилфенилаланинметиловый эфир (Бок-Ала-Гли-Цис(Ацм)-Лиз(Бок)- 15

- сн-фен-фен-ОМе), 13»8 г (Q,Q127 моль) пенгапепгида с блокированными группами формулы Сд Ь-GHc (Ацм ) -Л иэ (Бок ) -Асн-фен-фен-ОМе, полученного в примере 9, растворяют в

500 мл 80%-ного раствора уксусной кислоты, раствор перемешивают 20 ч, растворитель отгоняют при пониженном давлении, остаток растворяют в метаноле и осаждают эфиром, получая соединение формулы 25

Н-Цис- (Ацм)-Лиз(Бок) -Асн-Фен-Фен-ОМе (оЦ -19,1 (c 1; ДМФ), . в холодный раствор которого в 185 мл ДМФ при 0 С добавляют 2 мл И -(тнлморфолина (рН раствора 8) и, продолжая охлаждение, 30 раствор трет-бутилоксикарбонилаланилглицин-2,4,5-трихлорфенилового эфира (7,5 rg

0,0176 моль). Полученный раствор выдерживают в ледяной бане 2 дня, растворитель отгоняют, остаток растворяют в этаноле, 35 осаждают эфиром и перекристаллиэовывают . иэ метанола, получая, целевое> соединение, Г 4 р-30,9 (с 1; ДМФ).

ЯМР-спектр (CDСВ y ), О, 1,38: (f 18Н) 3 58) (Х,ЗН), 7,25 (2п» 4э

1OH)1

Аминокислотный анализ: Ала 1,05

Асп 1,16; Usc 0,174; Гли 1,00; Лиэ 1»21»

Пример ll. Трет-бутилоксикарбонилаланилглицил- K -ацетамидометилцистеинил- К -трет- бутилоксикарбониллизилае спарагинипфенипапанкйфеиипапанингидразид (Бок-Ала-Гли-Цис (Ацм): -Л из (Бок) -Асн-фен-50

-фен М -Н М НД.

В раствор 2,0 г (1,87 ммоль) гепта- пептидного эфира формулы Бок-Ала-Гпи-Цис(Ацм) Лиз(Бок)-Асн-фен-фен-ОМе, полученного в примере 10, в 8 мл диметип- й5 сульфоксида (ДМСО), добавляют 2 мл г (41,3 ммоль) гидраэингидрага. Полученную смесь перемешивают 8 ч, оаЬщают

1 150 мл воды, фильтруют, сушат и попучают целевое соединение. 60(Аминокислотный анализ: Лиз 0,98;

Асп 1,04; Гли 1,0; Ала 1,01; 1/2 Цис

0,37; Фен 2,12, Пример 12. К,$-дигригипцисгенницЯ вЂ” трет-сутилоксикарбониллиэиласпарае гин илфенилаланилфенилаланин метил овый эфир (Трт-Цис(Трт) Лиэ(Бок)-Асн-Фен-фен-OM e ) .

К охлажденной до 0 С смеси 100 мл

» этилацетата с 400 мл 5%-ного водного раствора лимонной «ислоты при перемешивании добавляют 15,82 r (0,023 моль)

К, $ -дигритипцистеиндиэгиламиновой сопи„

\ о перемешивают при 0 С 30 мин, расслаивая смесь. Водный слой отделяют, экстрагируют этилацетатом, обьединенную органическую фазу промывают холодной 2 5%-ной лимонной кислотой и насыщенным раствором хлористого натрия. Органическую фазу . супгач над безводным сульфатом магния, растворитель отгоняют и получают К, $ -дитритилцистеин, в раствор которого (0,023 моль) в 100 мл ДМф добавляют 3,75 г (0,027) моль) ,l-оксибензотриаэола, охлаждают до 0 С и при перемешевании вносят 4,81 г (0,233 моль)

ДЦК, затем перемешивают еше при 0 С 2 ч и пэи комнатной температуре 1 ч. Раствор вновь охлаждают до 0 C и, перемешивая, добавляют раствор 14 r (0,0175 моль) сое:динения формулы Н Лиз(Бок)-Асн-Фен-Фен-ОМе в 254 мл ДМФ и 2,43 мл К-этилморфолина. Полученную смесь перемешивают о

l6 ч при 25 С, растворитель отгоняют до

».100 мл, выпавший осадок отфильтровывают» фильтрат упаривают досуха, остаток растворяют в 400 мл этилацетата, фильтруют, фильтрат промывают 2,5%-ным водным раствором лимонной кислоты (Зк100 мл), 7%-ным раствором бикарбоната натрия (3x100 мл) и насыщенным раствором хлористого натрия (2х50 мл), раствор сушат над безводным супьфагоммагния и расгворигепь оггоняюг., Остаток перекрисгаппиэовываюг из смеси этилацетата с петролейным эфиром, получая целевое соединение, т.пл. 180-181 С, о (ОС 17,9о (с 1» ДМФ)

Пример 13. Трат-бутилоксикарбонилапанипгпицив-; S -тритилцистеинил- К е

-чрат-бутилоксикарбониллиэиласпарагинилфенилаланилфенилаланинметил эфир(Бок-Ала-Гли-Цис(Трт) Лиэ(Бок)-Асн-фен-Фен-ОМе).

В раствор 13,5 r (10,7 ммоль) соединения формулы Трт-Цис(Трт) Лиэ(Бок)Асн-фен-фен-ОМе, полученного в примере 12, в 800 мл ледяной уксусной кислоты по каплям при комнатной температуре добавляют 200 мл воды Полученный раствор перемешивают при 45 С 2 ч, затем разбавляют 1 мл воды, выпавший осадок отфильтро586837

9 вывают,. фильтрат упаривают досуха, остаток растворяют в метаноле, осаждают эфиром и получают Н-Цис(Трт)-Лиз(Бок)-Фен-фен-ОМе, в раствор 10,2 г (9,48 ммоль} которого в 79 мл ДМФ, охлажденный до о

О С, добавляют 1,5 мл К зтилморфолина, раствор 5,64 r (13,3 моль)трет-бутилоксикарбонилаланилглицин-2,4,5-трихлорфенилового эфира, полученного в примере 3, в

25 мл ДМФ и 0,5 r 1-оксибензотриазола. i0

Полученный раствор выдерживают 3 дня при о

0 С, растворитель отгоняют, остаток растворяют в метаноле и осаждают эфиром. Перекристаллизацией полученного продукта из метанола получают целевое соединение, (Ф) - 5

20,7 (с 1; ДМФ).

Аминокислотный анализ: Лиз 0,95, Асп 0,94; Гли 1,0; Ала 0,98; Цис 0,52;

Фен 1,92, Пример 14. Треъ-бутилоксикарбони- 20 лаланилглицил- $ -тритилцистеинил- К трет-бутилоксикарб ониллизиласпарагинилфенипаланилфенипапанингидразид> (Бок Ала

-Гли-Цис (Трт) -Л из (Бок) -Асн-Фен-Фен,Н-Н Н НН1.

В раствор 6,5 r (5,25 ммоль) сложного метилового эфира гептапептида формулы

Бок-Ала-Гли-Цис (Трт)-И из (Бок)-Асн-фен-Фен-ОМе, полученного в примере 13, в

410 мл метанола, охлажденного в ледяноя бане, по каплям добавляют 8,8 мл (0,179 моль) гидразингидрата. Смесь перемешивают при о

0 С 20 мин, затем при комнатной температуре 4 дня. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают холодным метанолом, су- 35 шат и получают целевое соединение.

Аминокислотный анализ: Ииз 0,95;

Асп 1,0; Гли 1,0; Ала 0,98; Цис 0,90; фен 2,03. 40

Пример 15. Бензилоксикарбонилтреонилсеринметиловый эфир (3-Три-Сер-ОМе) .

Раствор 3,22 г (6,43 ммоль) бензилоксикарбонилтреонинпентахлорфенилового эфи- 45 pa в 20 мп ДМФ добавляют в раствор

1,0 г (6,43 ммоль) хлоргидрата метипового эфира серина в 15 мл ДМФ и 0,95 мл тризтиламина при 0 С. Полученную смесь пе» ремешивают 20 ч при комнатной температу-50 ре, осадок отфильтровывают, фильтрат концентрируют при пониженном давлении, остаток растирают в порошок в смеси эфира с петролейным эфиром (1:1) до полного удаления пентахпорфенойа. Нерастворившийся ос- 55 таток кристаллизуют из смеси этипацетата с изопропиловым .эфиром и получают целевое о соединение, т.пл. 133-135 С.

ЯМР-спектр (СЬС(5 ), 6 : 3,75 (ЗН), 5,1 (2Н) и 7,3 (5Н). Ю

А. Бензилоксикарбонил-О-трет-бутил)тре он ил-(О-трет«б утиц ) -серинметил овый эфир (З-Три(бут)>-Сер(Бут)-ОМе).

К смеси 13,3 г (43 ммоль) метилового эфира Оберет-бутилсерина с 14,4 г (46,8 ммоль) бензилоксикарбонила-(О-трет-бутил)-траонина и 5,33 мл (43 ммоль)

® -этилморфолина в 100 мл сухого тетрагидрофурана (ТГФ), охлажденной до О С, добавляют по каплям охлажденный раствор

9,3 г (45,1 ммоль) ДЦК в 25 мл ТГФ, перемешивают 45 мин при 0 С и 90 мин при о

25 C. Осадок отфильтровывают, ТГФ отгоо няют при пониженном давлении при 25 С, остаток растворяют; в эфире, фильтруют, фильтрат зкстрагируют последовательно насышенным раствором бикарбоната натрия, на сышенным раствором хлористого натрия, охлажденнной льдом 1 н. лимонной кислотой, водой, насьпценным раствором бикарбоната натрия, водой и насышенным раствором хлористого натрия. Органический экстракт сушат над сульфатом магния и упаривают при пониженном давлении. Остаток чистят хрома тографией на нейтральной окиси алюминия, злюируют бензолом, упаривают и получают целевое соединение в виде масла.

ЯМР-спектр (С ЬС(5 ), 6 : 1,2 (т,21Н)

3,74(5, ЗН), 5,15 (5, 2Н), 7,35 (5, 5Н) °

Пример 16.Метиловьгй эфир бензоипоксикарбонипфенипа пани лтреонипсерина (3-Ф ен-Три-Сер-ОМ е) °

Смесь 1,72 r (4,86 ммоль) метилового эфира бензилоксикарбонилтреонилсерина, полученного в примере 15, в 15 мл 15%-нойуксусной кислоты с 15 мл метанола, 5,34мл (5>34 ммоль) 1 н. соляной кислоты и

0,15 г катализатора (5% Рс(/С) перемешивают в атмосфере водорода 20 ч. Смесь фильтруют через диатомовую землю (целит) фильтрат упаривают досуха и получают х оргидрат метилового эфира треонилсерина (Н-Три-Сер-ОМе>НС ), в раствор 1,24 r (4,86 ммоль) которого в 15 мл ДМФ и

4 о

0,623 мл триэтипамина при О С добавляют раствор 2,32 г (4,86 ммоль) бензилоксикарб онипфенилаланин-2,4,5-трихл орфенил ового эфира в 30 мл ДМФ. Смесь перемешивают 20 ч, фильтруют, фипьтрат. концентрируют при пониженном давленйи, остаток растирают в порошок в смеси эфира с гексаном до полного удаления трихлорфенола. Остаток кристаллизуют из смеси этилацетата с изопропиловым эфиром и получают целевое соединение, т.пл. 167-171 С.

ЯМР-спектр (СЪС 5 ) д : 3,7 (ЗН), 5,03 (2Н), 7,2 и 7,3 (10H).

А. Метиповый эфир бензипоксиквобонвтфенилалан ил-(О-Тр6Т-Оутип ) ре онил-(О»

5868

11 трет-бутип ) -серина (3-Фен-Три (Бут)-Сер (Бут) -ОМе)

14,4 г (30,8 ммоль) соединения 4ормулы 3-Три(Бут}-Сер(Бут)-ОМе, полученного в примере 15 А, растворенного в 120 мл метан ода, совместно с 3,56 r (30, 8 ммопь) пиридинхлоргидрата гидрогенизируют в присутствии 700 г катализатора (5% Р<), /С) и получают соединение формулы Н-Трн(Бут)-Сер-(Бут)-ОМе, которое и 14,7 r (30,8мопь)10

3-Фен-ОТцп растворяют в 150 мл этилао цетата, охлаждают до 0, С и затем к охлажденному раствору добавляют 3,96 мл (30 8 ммоль) К-этилморфолина, Смесь вые о держиваютпри 5 С 3 дня, осадок отфильтро- 15 вывают, фильтрат экстрагируют аналогично примеру 15А. Промытый экстракт сушат и упаривают при пониженном давлении. Остаток чистят хроматографией на силикагеле (1 кг), вымывая 20%-ным раствором этилацетата в бензоле, Элюат упаривают, остаток кристаппизуют из смеси эфира с гексаном и получают целевое соединение, т. пп. 101-103 С l l> 94 (с 1,ДМФ).

Пример, 17. Метилоный эфир бенбензоилка рб он илтре он илфен илаланилтре онилсерина (3-Трн-Фен-Трн-Сер-ОМе ) .

Смесь 1,7 г метилового эфира бензилоксикарбонилфенилаланилтреонилсерина, полученного в примере 16, в 15 мл 15%-ной зр уксусной кислоты и 15 мл метанола совместно с 0,15 г катализатора (5% Pd /С) быстро перемешивают в атмосфере водорода 4- ч. Смесь фипьтруют через диатомовую землю (целит), фильтрами концентрируют 3S досуха и получают соединение Н-Фен-Трн-Сер-OMe в форме кислого аддукта с уксусной кислотой, к раствору 1,4 г (3,4 моль) которого в 20 мл ДМФ и 0,48 мл триэо таноламина при 0 С добавляют раствор л0

1,7 1 r (3,4 ммоль) бензилоксикарбонилтреонинпентахлорфенилового эфира в 150 мл

ДМФ. Полученный раствор перемешивают

20 ч при комнатной температуре, затем растворитель отгоняют, остаток растирают 4S в порошок в эфире до полного удаления пентахлорфенола, Осадок христаллизуют из смеси этилацетата с изопропиловым эфиром и получают целевое соединение в виде его о моногидрата, т.пл. 195-197 С. 50

Вычислено,%: С 56,12; Н 6,49; К9,02.

С Н еМ О,с Н 0

Найдено,%: С 56,06,: Н 6,29; К 8,84.

А, Метиловый эфир бензилоксикарбонип-(О-трет-бутил)-треонилфенилаланил-(О-трет- И

-бутил)-треонил-(О-трет-бутил)-серина (3-Три(Бчт)-феи-Трн(Бут)-Сер(Бут)-ОМе), г

10,5 r (17,1 ммоль) соединения формулы (3-Фен-Трн(Бут)-Cep(Бут)-ОМе) гид12 рогенизируют в ледяной уксусной кислоте (100 мл) в присутствии катализатора (5% Pcl/С). После завершения реакции (контроль по TCX) катализатор отфильтровывают и фильтрат концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток Н-фен«Трн(Бут)-Сер(Бут)-ОМе растворяют в бензоле и раствор упаривают при пониженном давлении (дважды) с последуюшей сушкой гидрата окиси калия также при пониженном давлении. В 100 мл сухого ТГФ растворяют

5,3 г (17,1 ммоль) соединения формулы

3-Трн(Бут)-ОН и 4,61 r (34,2 ммоль)

1-оксибензотриазола. Затем при перемешивао нии при 0 C по каплям в полученный раствор добавляют 3,52 г (17,1 ммоль) ДЦК в виде охлажденного раствора в 30 мл ТГФ. о

Перемешивают еще 1 ч при 0 С и 1 ч при о

25 С. Полученный продукт гидрогенолиза растворяют в 35 мл ТГФ, который содержит

2,19 мл (17,1 ммоль),М-этилморфолина, Затем этот раствор добавляют в раствор активированного сложного эфира. Смесь пео ремешивают при -25 С 1 ч, фильтруют, фильтрат упаривают при пониженном давлении, остаток растворяют в серном эфире, фильтруют и фильтрат экстрагируют холодной 1 н, лимонной кислотой, водой, насы щенным раствором бикарбоната натрия и насышенным раствором хлористого натрия. Остаток, полученный после сушки и отгонки эфира, хроматографируют на силикагеле (1 кг), вымывая 20%-ным раствором этилацетата в бензоле. Элюат упаривают, остаток кристаллизуют из смеси эфира с гексаном и получают целевое соединение, т.пл. 110-

113 С, (я(1 27,5 (с 1; ДМФ).

Пример 18. Метиловый эфир бензилоксикарбонил- Я -трет-бутилоксикарбо8 ниллизилтреонилфенилаланилтре онилсерина (3-Лиз (Бок)-Трн-фен-Три-Сер-ОМе).

Смесь 1,3 г осоединения формулы 3-Трн-Фея-Трн-Сер-ОМе, полученного в примере

17, в 30 мл метанола с 0,15 г катализатора (5% P d /С) быстро перемешивают в атмосфере водорода 20 ч. Затем фильтруют через диатомовую землю и концентрируют до сухого состояния, получая соединения формулы H-Тре-фен-Тре-Сер-ОМе, в раствор

1,0 г (2, 18 ммоль) которого в 15 мл ДМФ и 0,1 мл триэтиламина при 0 С добавляют раствор бензилоксикарбонил- Н -трет-буФ тилоксикарбониллизин-и. -нитрофенилового эфира в 150 мл ДМФ и перемешивают еше

20 ч. Растворитель отгоняют при пониженном давлении, остаток растворяют в 3 мл метанола и к раствору осторожно добавляют

100 мл эфира. Выпавший осадок собирают и кристаллизуют из метанола, получая цвпео вое соединение, т.пл. 169-171 С.

586837

13

ЯМР-спектр (Q Я0-1 ), ; 1,36 (9Н), 3,65 (3), 505 (2H), 7,3 (OH).

А. Метиловый эфир бензипоксикарбонил„ът Е

-М -бутилоксикарбониллизип- (О-трет-бутил ) -треонилфенилаланил-(О-тре г-бутил)- 5 .треонил — (О-трет-бутил)-серина 13-Лиз(Бок-)

-Трн (Бут) -фен-Трн(Бут) -Сер(Бут) -ОМе). . 8,52 г (11,05 ммоль) соединения формулы З-Трн (Бут)-Фен-Трн (Бут)-Сер (Бут)«Оме, полученного в примере 17А, подвер- 10 гают гидрогенолизу в уксусной кислоте, затем обрабатывают аналогично примеру 17А.

Полученный трипептид формулы Н-Трн(Бут)-фен-Трн(Бут)-ОМе растворяют в 50 мл

ДМФ и добавляют к раствору 1,14 г 35 (11,05 ммоль) N -этилморфолина. Раствор охлаждают до 0 С, добавляют 5,54 r (11,06 ммоль) соединения формулы 3 Лиз (Бок)-ОЯ, и выдерживают при 5 С о

70 ч, Затем при пониженном давлении и о

20-30 С отгоняют ДМФ, остаток хроматографпруют на силикагеле (1 кг), вымывая хлороформом, содержашим 2% метанола.

Эпюат упаривают и получают целевое соедио нение, т.пл. 81-85 С (серный эфир-пет- . р one йный эфир ), ЯМР (CDCf >), 8: 0,99 1,43 (), 3,71 (S, ЗН). 5,13 (s,2H), 7,22 и 7,33 (2х g, 10Н).

36

Пример 19. Метиловый эфир > . аС -диметип- 3,5-дпметоксибензилоксикарбонилтриптофил- К -трет-бутилоксикарбо8 н илл изилтреоп ипфенилалан илтре онилсе рина

j Ддз-Трп-Л из (Бок) — Трн-Фен-Трн-Сер-ОМе

Сл есь 1,61 г соединения формулы

З-Лиз(Бок)-Трн-фен-Трн-Сер-ОМе, попученного в примере 18, в 15 мл 15%-ной уксусной кислоты и 15 мл метанола совместнос 0,15 r . катализатора (5% Р d, /С) быстро перемешивают в атмосфере водорода 20 ч. Смесь фильтруют через диатомовую землю, фильтрат упаривают досуха и получают соединение формулы H-Лиз(Бок)-Трн«фен-Трн-Сер ОМе. Затем раствор 0,653 r

45 (1,53 ммоль ) а, g — диметил — 3,5

-диметоксибензилоксикарбонилтриптофена, 0,345 г (3,0 ммоль) Я -оксисукцинимида и 0,315 г (1,53 ммоль) ДЦК в 13 мл о 50 сухого ТГФ перемешивают 1 ч при 0 С и о, 1 ч при 25 С. В раствор добавляют;.попученный ранее раствор 1,159 r (1,53 ммоль) соединения формулы Н-Лиз(Бок)-Трн-ФенТрн-Сер-ОМе с 0,22 мл триэтиламина в о 55

10 мл ТГФ, перемешивают при 25 С 3 ч, фильтруют, фильтрат упаривают, остаток хрол4атографируют на силикагепе (100 г), вымывая смесью хпоооформ-метаноп-пиридий (90:10;1), элюат упаривают и получают

60 целевое соединение Д„„(в метаноле), нм,289 (Е 5,310), 282 (6 7,410), 274 (Е 7,070), 219 (Е 43,700).

ЯМР-спектр (С Р С (5), 6 1,40 (9Н ), 3,74 (9Н).

А. Метиловый эфир рС, K -диметил"3,5-диметоксибензипоксикарбонилтриптофилЕ

- M -бутил оксикарб ониллиз ил-(О-трет-бутил )—

-треонилфенилаланид -(О-трет-бутил)-треонил.(О-трет-бутил)-серина t Ддз-Трп Лиз(Бок)-Трн (Бут ) -фен-Трн (Бут) -Сер (Бут ) -OMe).

Раствор 7,3 г (7,3 ммоль) соединения формулы 3-Лиз(Бок)-Трн(Бут)-Фен-Трн(Бут).Сер(Бут)-ОМе, полученного в примере 18А, в уксусной кислоте гидрогенизируют и обрабатывают аналогично примеру 17А. Полученный остаток 1 Н-Лиз(Бок)-Трн(Бут)-ФенГрн(Бут)-Сер(Бут)-ОМе) растворяют в

20мл ТГФи добавляют 0,935 мл (7,3ммоль)

К -этилморфолина (смесь 1 ). 3,11 r (7,3 ммоль) соединения формулы Ддз-Tpn ÎH растворяют в 55 мп сухого ТГФ, добавляют 1,97 г (14,6 ммоль) 1-оксибензоо триазола, раствор охлаждают до 0 С и по каплям добавляют охлажденный раствор

1,5 г QUK (7,3 ммоль) в 15 мл ТГФ. о

Смесь перемешивают 1 ч при 0 С и 1 ч о при 20-25 С (смесь 2). Затем смесь 1 добавляют при перемешивании к смеси 2, перемешивают еше 1 ч при 20-25 С, охо паждают до 0 С, фильтруют и фильтрат упа-

4, ривают досуха. Остаток растворяют в этилацетате, раствор промывают последователь но насыщенным раствором .бикарбоната натрия, насышенным раствором хлористого натрия, сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют. Остаток хроматографируют на силикагеле (1 кг), элюат упаривают и получают целевое соединение, т.пл. 112о

114 С (серный эфир — петролейный эфир), (о() > 10,1 (с 1; ДМФ).

П р и л4 е р 20. oC, eL -Диметил«3,5-диметоксибензилоксикарбонилтриптофпл-Я -трет-бутил окс икарбон илл изилтре он ил F. фен илаланилтреонилсерингидразид (Ддз-Трп Пиз(Бок)-Трн-Фен-Трн-Сер- Я IMH>).

Раствор 1,05 г (0,95 ммоль) соединения формулы Ддз-Трн-Лиз(Бок)-Трн-Фен«Трн-Сер-ОМе, полученного в примере 19, и 1,2 мл гидразингидрата в 50 мл метаноо ла черемешивают при 0 С 2 дня. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают метанолом и получают целевой продукт, т.пл. 203206 С.

А. с(, 4 -Диметил-3, 5-д уетоксибензипохсикарбониптриптофип,— М -4зутилоксикарбон изил- (О-трет-бутил ) -треонилфе нипапанип- (О-уречбутип)-треонип-(О-трет-бутил1-серингидразин (Ддз-Трн-Лиз(Бок).»Трн-(Бут)-Фен-Три(Бут)-Сер (Буг)-:КЯКН ).

586837

Раствор 3,71 г 29,1 ммопь) соединения формулы Ддз-Трн-Лиз{Бок)-Трн{Бут)-фен-Трн(Бут)-Сер(Бут)-ОМе, полученного в примере 19А, в 25 мп ДМФ смешивают с 5 мп гидразингидрата, смесь выдерживают, не перемешивая, 3 дня при комнатной температуре, добавпяют воду, выпавший1 осадок отдепяют, п рекристаллизовывают из

„метанопа и получают целевое соединение, .т.пп. 189-191 С.

Пример 21. о(,, аС -Диметип«3,5-дыметипоксибензилоксикарбониптрипто-, фип- Ц -трет-бутилоксикарбонилпизиптреЕ

° онипфенипапанилтреонилсерил:- 3 -ацетаjQII3 TPII -ЛH3(BOK)-- 15

«Трн-фен-Трн-Сер- Цис(Ацм) -ОН .

В раствор 0,800 г (0,724 ммопь) соединения формулы Ддз-Трп-Лиз(Бок)-Трн-фен-Трн-Сер- NН Я Н, полученного в о примере 20, в 30 мп ДМФ при -20 С 20 добавляют 0,824 мл (1,81 ммоль) 2,2 н. раствора безводной соляной кислоты в этилацетате и 0,125 мл (1,68 ммоль) трето бутилнитрипа и перемешивают при -15 С

15 мин. Затем по каплям при о -15 С к раствору добавляют смесь 0,165 г

) (0,724 мм оль) ф -ацетамид ометипцистеина и 0,354 мп (2,53 ммоль) триэтипамина в

15 мл ДМФ. Затем раствор перемешивают .при -15 С 1 чи 20 ч при 5 С. ПриI ЗВ

I пониженном давлении отгоняют растворитель, остаток растворяют в 5 мл метанола и осторожно вводят в 400 мл серного эфира, Выпавший осадок отфильтровывают, растворяют в 5 мп метанола и осторожно добав- 55 ляют в 100 мп охлажденного 0,5 М раствора лимонной кислоты. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой (2х20 мп), осадок кристаллизуют из смеси метанолэтипацетат-изопропиловый эфир и получают о целевое соединение, т.пл. 139-142 С.

ЯМР-спектр (9 М 30= с(), 6 :, 1,35 (9Н), 1,55 (6Н), 1,83 (ЗН), 3,70 {GH).

А. C(, х. -Д иметил- 3,5-диметоксибензилоксикарбониптриптофип- МЯ -трет-бути- 45 локсикарбониплизиптреонилфенипаланилтреонилсерил- S -тритилцистеин (Ддз-Tpn- JI из (Бок ) -Трн-Фен-Трн-Сер-Цис (Трт ) -ОН).

К раствору .,6 г (1,45 ммопь) соединенияия формулы Ддз-Трп-Л из (Бок)—

-Трн-Фен-Три- -Сер-ЯН NH, полученного в примере 20, в 50 мп ДМФ прп -20 С добавляют 1,62 мл (2,26 ммоль) 2,24н. безводного раствора соляной кислоты в этипацетате, затем 0,253 мл (2,18 ммо ь) трет-бутил-ни грига, смесь перемешивают

6 при -15 С 15 мин. В полученный раствор при о

-15 С по ыаппям добавпают раствор 0,527г (1,45 мм опь) S -трити децис теипа и 0,7 2 мп (5,07 ммопь) триэтипамица а80мп ДМФ, 16 затем смесь перемешивают при-15 С 1 ч и о

20ч при 5 С, растворитепьудапяют при пониженномдавлении, остаток кристалпизуютиз метанола и попучают цеаевое соединение, т пп. 205-2 08 С.

ЯМР-спектр ())+$Q=J ) Ж 1,40- (9Н)

1,60 (6Н), 3,75 (6Н), 7,40 (20Н).

Б. К, сС -Диметип-3,5-диметоксибензипоксикарбониптриптофип- g -трет.-бутипоксикарбониплизил-(О-трет-бутил)-треонипфенилаланип- (О-трет-бутип)-треонил-(О.трет-бутип)-серил- 8 -ацетомндометилцистеин 1Ддз-Трп-Лиз (Бок) -Трн (Бут) -ФенТрн (Бут)-Сер(Бут)-Цис(Ацм)-OHj .

1,27 г (1 ммопь) соединения формулы

Ддз-Трп-Л из (Бок) -Тре (Бут ) -Фен-Трн (Бут) . Сер(Бут)-п(Н М Н>, полученного в примере

20А, растворяют в 25 мл сухого дистиппио рованного ДМФ, раствор охпаждают до -20 С . и прибавляют 2,5 мл 1 н. раствора соляной кислоты в этилацетате, затем 0,138 мп

4 (1,2 ммопь) трет-бутипнитрита и перемео шивают 15 мин при -15 С. Раствор 228мг (1 ммоль) хлоргидрата 5 -ацетамидометип. цистеина в 20 мп ДМФ и O 49мл (3 5 ммопь) э триэтиламина охлаждают до -15 С и добавляют в полученную реакционную смесь, о затем перемешивают при -15 С 1 ч при комнатной температуре в течение ночи. Вы . паривают при пониженном давлении, остаток растирают в порошок в воде, осадок собирают, промывают водой и сушат, получая целевое соединение.

ЯМР-спектр (С))С(), У: 1,12, 1,20 и

1,27 (27Н), 1,45 (9Н), 1,63 (6Н), 1,95 (ЗН), 3,68 (6Н).

Аминокислотный анализ: Лиз 1,0 Трн 2,0>

Сер 0,76; UIIc 0,6, Фен 1,0.

В. с(, Ы. -Диметил- 3,5-диметоксибензилокспкарбониптриптофил- Й -трет-бутиЕ л оксикарб онтлпизил-(О-трет-бутип ) -треонипфенипаланип- (О-трет-бутил) -треонип-(О«трат-бутпл)-серил- 8 -тритилцистеин

1Ддз-Трп-Лиз (Бок)-Три(Бут)-Фен-Три(Бут) -Сер(Бут)-Цис(Трт)-ОН3, 1,27 г (1 ммоль) соединения формулы

Ддз-Трп-Л из (Бок) -Трн (Бут) -Фен-Трн (Бут )—

«Сер(Бут) — g Н5f Н, полученного в примере 20А, растворяют в 20 мл сухого перегнанного ДМФ, раствор охлаждают до -20 С о и прибавляют 1,25 мп 2н, раствора соляной кислоты в этипацетате, затем 0,137 мл (1,2 ммоль) трет-бутилнитрита и перемео шивают 15 мин при -15 С, Раствор

0,363 г (1 ммоль) соединения формулы Н 14ис(Трт)-ОН в 35 мп ДМФ и 0,49 мп

{3,5 ммопь) триэтипамина охлаждают до о

-15 С и добавпяют в полученную реакцион ную смесь, затем перемешивают при -15 C о

f о ,1 ч и при 20-25 С в течение ночи. Раст586837

17

18 l5 ь:>оитепь о тгэняют при пониженном давпе о пии (0,2 мм рт,ст.) и 35 С, остаток расти-! ан т в порошок в охлажденном льдом 1 н. растворе лимонной кислоты, фильтруют, прэлэь>1я» >т водой, сушат, сухой продукт расти-.

5 рают о порошок в гексане, отфильтровывают и вновь сушат. Получают целевое соединен ие.

ЯМР-спектр (COCA ) 8: 1,13, 1,17 и

1,23 (27Н), 1,47 (9H), 1,74 {6Н), fo

3,78 (6Н).

Пример 22. Триптофип- К -третбутипоксикарбоничп изиптреонипфенипапанилтреонипсерип- $ -ацетамидометилцистеинацетата !" Н-Трп-Лиз(Бок)-Трн-Фен-Трн-Сер-Цис(Ацм)-OH . АсОН!

Раствор 0,465 r (0,367 ммопь) соединенияформупы Ддз-Трп-Лиз(Бок)-Трн-Фен-Трн-Сер-Цис (Ацм ) -ОН, полученного в примере 21, в 25 мл 80 о-ной уксусной 20 кислоты перемешивают при комнатной температуре 27 ч, растворитепь отгоняют при пониженном давлении, остаток растворяют в

3 мл уксусной кислоты и осторожно вносят в 300 мп серного эфира. Осадок собирают, 25 сушат и получают целевое соединение.

ЯМР-спектр (Х) М SQ d „), о ; 1,34 (9Н)

1,90 (ЗН).

А. Триптофил- Я -трет-бутппоксикарбониппизиптреонипфенилалаииптреонил- 8 -три-36 типцистеинацетат Е-Е ТрпЛиз(Бок) Трн

Фен — Трн-Сер-Цис(Грт) -OH. AcOH) .

Раствор 1,02 г (0,710 ммопь) соедине>эия формулы Ддз-Трп-Лиз(Бок)-Тэ>н-ФенТрн-Сер-Цис(Трт)-ОН, полученного в при.эе- 35 ре 21А, в 50 мп 80" -ной уксусной кислоты перемешивают при комнатной температуре 27 ч, добавляют 100 мп воды, выпавший осад >к собирают, промывают серным эфиром, сушат и получают полевое соединение, 4О

ЯМР-спектр (DMSO- dе), 8: 1,40 (9Н)

7,35 (20I I ) °

Б, риптофип- H -бутилоксикарбониплиhF

;.э ил- (О-трет-бутип ) -треон ипфен ипаланил- (О-трет — бутэш )-треон ил (О-трет — бутип)-серип- 45

-апета мидометилцистеин (f Е-Трп-Л из (Бок)-Трн(Бут)-Фен-Трп(Бут)-Сер (Бут)-U,. (А лэ)-(>if)

1,50 г (1,045 ммопь) соединения формулы Дп:э-ТЕ>п /Еиз(Бок)- рн(Бут)-Фен-Трн (Бут)-Сер(Бут)-Цис(Ацм)-Off, полученногп в примере 21, растворяют в 12 мп охпажд >пней смеси уксусная кислота-муравьи .—

>эая кисл ота-вода (7: 1:2), раствор перемешивают в течение ночи при комнатной темпе-5

fMTQf» > РасTBOf>HTPJIB OTI оняют, OCTA TOK p&CI«воряют в метаноле и концентрированным раствором гицрата окиси аммония доводят

f>il Е>аствора до 6,5. Затем добавляют воду, ;>Са>Э>ца>Э ПРОДУКТ> KOTOPbIH ОТДЕЛЯЮТ> СУШЛТ, - вновь растворяют в метаноле и осаждают холодным серным эфиром. Получают целевое с оед ин ение.

ЯМР-спектр (C QC C ) > А 1, 17, 1,20 и 1,27 (27Н), 1,41 (9Н), 1,91 (ЗН).

Аминокислотный анализ: Лиз 1,0;

Трн 2,2; Сер 0,65; 1/2 Цис 0,69; Фен 1,1.

В. Триптофип- К -трет-бутип оксикарЕ

6 он илп из ил-(0-трет-6 утип ) -тре он ипфенипаланип-(О-трет-бутип)-треонил-(О-трет-бутип)-серил- S -тритипцистеин $H-Трп-Лиз(Бок)-Трн (Бут ) -4> ен-Трн (Бут) -Сер (Бут ) -Цис (Трт )—

ОН ) .

5,13 г (3,2 ммопь) соединения формупы Ддз-Трп-Лиз(Бок)-Трн(Бут)-Фен-Трн (Бут)-Сер(Бут) — Цис(Трт)-ОН, полученного в примере 21В, растворяют в смеси (56 мп) уксусная кислота- муравьиная кислота- вода {7: 1:2), полученный раствор перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, растворнтепь отгоняют, остаток растворяют в 26 мл метанола, концентрированным раствором аммиака доводят рН до 6,5.

Полученный раствор по каплям добавляют к холодной воде, выпавший осадок собирают, сушат в эксикаторе над пятиокисью фосфора.

Твердый материал растирают в порошок несколько раз в петропейном эфире и вновь сушат, поучая целевое соединение.

Аминокислотный анализ: Лнз 1,0; Трн

2,12; Сер 0,67; Цис 0,16; Фен 1,12.

Пример 23, Грет-бутипоксикаЕ>бо-, нипапан ппгл иц ил — Ь -ацета м ид эметээл и истеъгЕ ипил- К -трет-оутипоксикарбониллизипаснара ин ил фен ил алан ил фен ил алан ил три птофээлт(Е . «Ч -трет-бутилоксикарбоээиллнзиптреонипфенилапаниптреэнппсерип- .> -ацеталэидолэетилцистеин (Бок-Апа-Гпи-Цпс(Ацм )-Лиз (Бок)Асн-Феп-Фен-Трп-Л из (Бок) -Трн-Фен-ТрнСер-Цис (Ацм ) -Of f)

В раствор 0,327 г (0,305 ммоль) первого гептапептида формулы Бок-Апа-! пи-Цис(Ацм)-Лиз(Бок) — Асн-Фен-Феп- К l l Nfl>, полученного в примере 1 1, в 10 мп ДМСО и 10 мл ДМФ при -15 С добавляют

0,39 мп (0,763 ммопь) 1,92 и. раствоЕ>а безводного хлористого водорода в этипацетате, затем 0,043 мп (0,397 ммопь) о трет-оутипнитрита, перемешивают при -15 С

15 мип, добавляют 0,105 мп (0,76 ммопь) триэтииамина и к полученной смеси прибаво, пяют при -15 С раствор 0,337 r (0,305 ммопь) второго гептапептида формулы Н-Трп-Лиз(Бок)-Трн-Фен-Трн-Сер.-.Цис(Ацм)-ОН, полученного в примере 22, . в 5 ми ДМСО, 5 ми ДМФ и О, 039 ми триэ ти иамина. Раствор перемешивают при-15 С 1 ч о о»

IIðH 0 С 30 i«IIII, затем при 25 С 3 ч.

Растворитепь отгоняют при пониженном давлении, остаток постепенно вводят в 100 >«>I

586837

20 серного эфира. В =садок выпадает целевой т тетраде капептид.

Аминокислотный анализ: Лпэ 2,09;.

Асп 1,04; Трн 2,08; Сер 0,86; Гли 1,00;

Ала 1,05; Цис 0,54; фен 2,89.

А. Трет-бугипоксикарбонипапанипгпицип- S -тритилцистеин- Я -трет-бутилоксикарбон иллиз иласпарагинилфен илаланилфенилаланилтриптофил- И -трет-бутилоксикарбов ниллизилтреонилфенилаланилтреонилсерил— 8 -тритилцистеин) Бок-Ала-Гли-Цис(Трт)Л из (Бок) -А си-Фен-Фен-Трп-Л из (Бок) -ТрнФен-Трн-Сер-Цис(Трт)-ОН (.

Аналогично примеру 23, но в качестве первого гептапептида берут соединение формулы Бок-Ала-Гли-Цис(Трт)-Лиз(Бок)-Асн-фен-Фен- ЯН Я Н, полученное в примере 14, а в качестве . второго гептапептида берут соединение формулы Н-Трп Лиз(Бок)=Трн-фен-Трн-Сер-Цис(Трт)-ОН, полученное в примере 22 А, получают целевой линейный гетрадекапепгид..

Аминокислотный анализ. Лиз 2,01; Асп

1,02; Трн 1,92; Сер 1,01, Гли 1,0; Ала

0,99; Цис — 0,6 1; Фен 3,03.

Б.Трет-бутил оксикарбонилаланилглицилв S -ацетамидометилцистеиннл-Ц трег

-ют в

- бутил оксикарбониллизипаспарагинилфенилаланилфенилаланилтриптофил- N -трат-бутиЕ л окс икарб он ил-(О-трет-6утил ) -треонилфенилаланил- (О-трет-бутил) -треонил-(О-третбутил)-серил- S -ацетамидометилцистеин (Бок-Ала-Гли-Цис (Ацм ) -Л из (Бок) -Асп-Фенфен-Трп-Лиэ(Бок)-Трн (Бут)-Фен-Трн (Бут) -Сер(Бут) -Цис (Ацм ) -ОН) .

Аналогично примеру 23В с использованием первого гентапентида, а в качестве второго берут соединение формулы Н-Трп-Лиз (Бок)-Три (Бут)-Фен-Трн (Бут)-Сер(Бут)—

-Цис(Ацм)-ОН, полученное в примере 22 Б, получают целевой линейный тетрадекапептид, который выделяют из реакционной смеси, упаривая растворитель, растирая в порошок остаток в воде. Осадок отфильтровывают, сушат и перекристаллиэовывают иэ метанола.

Полученный продукт используют на последую« шей стадии без дальнейшей очистки.

Аминокислотный анализ:,. Лиз 1,98;

Асп 1,02; Трн 1,82; Сер 0,93; Гли 1,0;

Ала 0,97; Цис 0,25; Фен 3,02.

В. Трет-бутилоксикарбонилаланилглицил- S -тритилцистеин- Я -трет-бутилоксикарб он илл из ила сна раг инилфенилалан ил фен илапанкпгрипгофип- К-трет-бутипоксикарбониплизил- (О-трет-бутил ) -треонилфенилаланил-(О-трвт-бутил ) -треонил-(О-трет-бутил ) -серил- 3 -тритилцистеин (Бок-Ала-Гли-Цис(Трт)-Л из(Бок)-Асн-Фен-Фен-Трп-Лиз(Бок)-Трн (Бут ) -Фен-Трн (Бут ) -Сер(Еут ) -Цис (Трт)ОН) .

Аналогично примеру 23, но в качестве первого гептапептида берут соединение форм лы Бок-Ала-Гли-Цис(Трт)-Лиз(Бок)-Аснфен-Фен- Ц Н К Н, полученное в примере

14, а в качестве второго гептапептида берут соединение, формулы Н-Трп-Лиз(Бок)-Трн (Бут)-Фен-Трн(Бут)-Сер(Бут)-11èñ(Трт)—

-ОН, описанное в примере 22В, получают целевой линейный тетрадекапептид. Реакционную смесь упаривают, остаток растворяют в метаноле, полученный раствор добавляют по каплям в 5%-ный водный раствор лимонной кислоты, выпавший осадок отфиль

Трн-Фен-Трн-Сер-Цис-ОН) Раствор 0,635 г (0,305 ммоль) соединения формулы Бок-Ала-Гли-Цис (Ацм)—

-Лиз (Бок) -Асн-Фен-Фен-Трп-Л из (Бок) -ТрнМ

Фен-Трн-Сер-Цис(Ацм) ОН, полученного в примере 23, в 700 мл метанола добавляют в течение 1 ч в раствор 0,778 г (3,05 ммоль) йода в 156 мл метанола при

35 комнатной температуре и перемешивают при этой температуре 45 мин. Полученный расто вор охлаждают до 0 С и постепенно в него добавляют раствор 1,34 г (6,1 ммоль) тиосульфата натрия в 25 мл воды. Конечный раствор унаривают почти досуха, к остатку

40 добавляют 100 мл воды, осадок отфильтровывают, промывают водой, сушат и получают целевое соединение.

Целевое соединение получают способом, 45 описанным в данном примере, но в качестве исходного соединения берут эквивалентное количество соединения, полученного в примере 23А. В этом случае растворителем является смесь метанол-бензол (3:1).

Таким же образом переводят соединения, полученные в примерах 23 и 2ЗА, в целевое соединение по методу Хиски и Смита.

А, Циклический дисульфид трет-бутилоксикарбонипапанипгпиципцистеинин- Я -трет

-бутип оксикарбониппизиласпарагинипфенипаланилфенилаланилтрипто- Я -трет--буе тилоксикарбониллиэпл- (О-трет-бутилтреонилфенилаланил- (О-трет-бутил) -треонил- (О-трет-бутил ) -серилцистеина (БокАла-Гли-Цис-Л из (Бок) -Асн-ч>ен-Фен-Трптровывают, сушат. Продукт используют в следуюшей стадии, Аминокислотный анализ: Лиэ 2,03;

Асп 1,18; Трн 1,37) Сер 0,54; Гли 1,0;

Ала 1,0; Цис 0,15; фен 2,96.

Пример 24, Циклический дисульфид20

-трет-бутил оксикарбон илалан илгл ицилцисте инин- Я -трет-бутилоксикарбониллиэиласЕ парагинилфенипаланилфенилалан илтриптофил- P.

- И -TpBT-бутилоксикарбониллиэилтреонилфенилаланилтреонилсерилцистеина Бок-Ала25,. :-Гни-Цис-Лиэ(Бок)-Асн-Фен-Фен-Трн-Лиэ (Бок)586837

l

21

-Лиз(Бок)-Трн(Бут) сРен-Трн(Бут)-Сер(Бут)Цис-ОН) .

1,0 г (0,445 ммоль) линейного тетрадекапептида формулы Бок-Ала-Гли-Цис(Ацм)

-Л из (Бок) -Асн-Фен-Фен-Трн Л из(Бок) -Трн 5 (Бут) -Фен-Трн (Бут) -Сер (Бут)-Цис (Ацм )—

ОН, полученного в примере 23, растворяют в 900 мл горячего метанола. Раствор фильтруют, удаляя нерастворимую часть продукта, охлаждают до комнатной температуры и по 10

- каплям добавляют раствор 1,13 г(4,45 ммоль) йода в 500 мл метанола в течение 1 ч.

Смесь перемешивают еще 1 ч, охлаждают до 0 С и добавляют раствор 2,2 г о (8,9 ммоль) тиосульфата натрия в 20 мл воды. Растворитель упаривают, остаток растирают в порошок в 200 мл воды, осадок отфильтровывают, промывают и сушат. Сырой продукт растворяют в 15 мл метанола.

Нерастворившиеся компоненты отфильтровывают, фильтрат упаривают досуха, полученный продукт может быть использован без дополнительной очистки в последующей стадии. Часть продукта чистят фильтрованием через адсорбент, приготовленный на основе поперечно защитного декстрана (сефздекс

Н-20), получают очищенную фракцию целевого соединения.

Аминокислотный анализ: Лиз 2 2

I u

Асп 1,0; Сер 0,98; Цис 1,1; Трн 2,0

Гли 1,0; фен 3,5, Целевое соединение можно получить путем повторения процесса данного примера, но в качества исходного соединения берут эквивалентноекопичествосоединения,полученного в примере 23В, а в качестве растворителя — смесь метанол-бензол (4: 1).

Таким же образом проводят конверсию линейного тетрадекапептидного соединения примеров 23 и 23В в целевое соединение

40 по методу Хиски и Смита.

Пример 25. Соматостатин, циклический дисульфид аланилглицилцистеинлизиласпарагинилфенилаланилфенипаланилтрипто- 45 филлизилтреонилфенилаланилтреонилсерилцистенва 1Н-Апа-Гпи-Нис-Лиз-Аси-Феи-Феирп-Лаз- ри-Феи-Три-Сер-Лис-ОН.

Раствор 0,368 г (0,19 ммоль) БокАпа-Гл и-Цис Л из (Бок) -А си-фен-Фен-Трп. Лиз(Бок)-Трн-фен-Трн-Сер-Цис-ОН, полученноговпримере 24,,в 16,,4 мп концент рированной соляной кислоты перемешивают в атмосфере азота 8 мин при 0 С, затем о добавляют 164 мл ледяной уксусной кисло55 ты и сушат вымораживанием. Остаток растворяют в 60 мл воды и вновь сушат вымораживанием. Конечный остаток растворяют в 50 мл воды, пропускают через сколонку (2x20 см), заполненную карбоксиметилцел60 люлозой (Уатман СМ-23) и элюируют

0,100 моляльным буферным раствором ацетата аммония.. Очищенное соединение в количестве 0,065 г диофилизируют из воды и получают белый твердый продукт в виде его кислого аддукта с уксусной кислотой, Я,, (в метаноле), нм: 274 (Я 5,730)

281 (Я 6,060), 289 (E5,410).

Аминокислотный анализ: Лиз 2,24, Три 2,31; Сер 1,0; Гли 1,0 Асп 0,05;

Ала 0,95; Цис 1,11; фен 3,17 уксусная кислота 3,09 экв.

Лиофилизация полученного продукта из разбавленной соляной кислоты дает соответствующий кислый аддукт с соляной кислотой: Лиз 2,16; Трн 2,09 Сер 0,96;

Гли 1,0; Асп 1,05; Ала 1,0; сер 1,06;

Цис 0,81 фен 2,9.

Целевое соединение (соматостатин) получают также путем повторения процесса данного примера, но в качестве исходного циклического дисупьфида берут эквивалентное количество циклического дисульфида, полученного в поимере 24А.

Пример 26. Аланилглицилцистеинилл из ила спа рагин илфен илалан ил фен илалан илтриптофиппизилтреонипфенилапаниптреонилсерицистеин (Н-Ала-Гли-Цис-Лиз-Асн-Фен-Фен-Трп-Л из-Трн-фен-Трн-Сер-Цис-ОН3.

Аналогично примеру 25, но в качестве циклического дисульфида берут эквивалентн ое кол ичеств о соединения формулы Бок-Ала-Гли-Цис (Трт) -Л из(Бок) -Асн-Фен-Фен=Трп-Лиз(Бок) — Трн Фен-Трн-Сер ljnc(Трт)-OH, описанного в примере 23, получают целевое соединение.

Аминокислотный анализ: Лиз 1,83;

Асп 0,91; Трн 2,31; Сер 1,08; Гли 1,0;

Ала 0,86; Цис 0,38; Фен 2,64.

Аналогично получают целевое соединение, применяя продукт, полученный в примере

23В.

Пример 27. Пропионилглицин-2,4

5-трихлорфениловый эфир (СНЗСН -СО-Гли-Отцп ) .

В раствор 5,24 г (40 ммоль) пропионилглицина в 50 мл ДМФ добавляют 8 г (41 ммоль) 2,4,5-трихлорфенола. Раствор охлаждают в ледяной бане и добавляют

8,2 r (41 ммоль) l1UK. Смесь перемешивают при 0 С 1 ч и при 25 С 18 ч. Осао о док удаляют фильтрованием, растворитель упаривают, остаток кристаллизуют из этю ацетата и получают целевое соединение, т.пл. 171-173 С.

ЯМР-спектр: ())МСО- ct ) 8; 1,05 (t,ÇH)

2,27 (Я, 2Н), 4,46 (+,2Í) 7,81 и

8.1 (3..,2Н)., Пример 28. Пропионилглицил- 8-тритилцистеинил- g к -тречбутилоксикар586837

23 бониллиэиласпа рагин илфенилаланилфенилаланинметиловый эфир (СН5СНй-СО-Г и-Цис-(Тр) -Л из (Бок) -Асн-Фен-Фен-ОМе) .

В раствор 4,3 г (4 ммоль) соединения

Н-Цис(Трт)-Лиз(Бок)-Асн-Фен Фен-ONе, полученного в примере 13, и 0,56 мл Кэтилморфолина в 20 мл ЙМФ при 0 С доо бавпяют холодный раствор 1,5 r (4,85 ммопь) i соединения формулы СН СН««СО-Гли-Отцп, полученного в примере 27, и 200 мг 1- »«»

-оксибензотриазола в 15 мл ДМФ, раствор выдерживают в бане со льдом 3 дня. Расгворитель упаривают, остаток растворяют в метаноле и продукт осаждают серным эфиром.

Осадок отдели»от фильтрованием и кристалли- 15 зуют из смеси метанола с изопропиловым эфиром, получая ц елевое соединение, т.пл.

210-213 С, (сЯ »-22,9 (C 1; ЙМФ).

Пример 29. Пропионил- 3 -тритил- цистеинил- «». -трет-бутил оксика рбон ил- 20

f лизиласпарагинилфенилаланилфенилаланингид— раэид СН5СНк-CO-Гли-Цис (Трт)-Лиз(Бок) Асн-Фен-Фен- ЯН КН ).

В раствор 4,1 г (3,6 ммоль) соединения формулы СН СН -СО-Гли-Ц««с(Трт)-Лиз(Бок)- 5

Асн-фен-фен-ОМе, полученного в примере

28, в 300 мл метанола добавляют 6,4 мл (0,13 моль) гидраэингидрата, смесь перемешивают 2 дня при комнатной температуре, выпавший осадок отфильтровывают, промывают холодным метанолом и кристаллиэуют из метанола, получая целевое соединение, «т. пп. 218 С (разп.), fd)1«-26,1 (с 1; ДМФ).

Пример 30. Пропионилглицил- 3

-тритилцистеинил- И -трев-бутилоксикарбо35 нилл иэиласпа рагинилфенилаланилфенилаланилтриптофил- К -трет-бутил окс яка рбон илли6 зил-(О-трет-бутил )-треонилфенилаланил(О-трет-бутил ) -треонил-(О-трет-бутил ) -серил- S -тритилцистеин HACH СН «-СО-ГлиЦис{Трт)-Лйз(Бок)-Асн-Фен-Фен-Трп Лиз (Бок)-Три(Бут)-Фен(-Трн(Бут)-Сер (Бут).Цис-(Трт)-бН3.

К раствор"у 0,564 г (0,5 ммопь) сое45 динения формулы (СН СНй-СО-Гли-Цис(Трт)Лиз(Бок)-Асн-фен-Фен- HH М НД, полученного в примере 29, в 6 мл ДМФ при -10«, и перемешивайии добавляют 0,56 ми (1,28 ммоль) 2,3 н. раствора хлористого водорода в этилацетате, смесь охлаждают

D до -15 С и добавляют к ней 0,07 мл (0,6 ммоль) трет-бутил-нитрита, перемео шивают при -10 С 15 мин, охлаждают до

-15оС и прибавляют 0,166 мл (0,97 ммоль), Й -этилдииэопропиламина и раствор О,ИЭОмг. (0,67 ммоль) соединения формулы Н-Трп-Лиз (Бок)-Трн-(Бут)-Фен-Трин(Бут)-Сер(Бут)-Цис(Трт)-ОН, полученного в примере 22, и

0,098 мл (30,57 ммоль) К -этилдиизопропил » амина в 5 мл ДМФ. Полученную смесь переме24 шивают 1 ч при -10 С, 1 ч при О С и

О о о затем 18 ч при 25 С. Растворитель упаривают, остаток суспендируют в метаноле, суспензию по каплям добавляют в 5%-ный водный раствор лимонной кислоты. Остаток фильтруют, сушат, растирают в порошок в метаноле, сушат и получают целевое соеди- нение.

Аминокислотный анализ (окисление надмуравьиной кислотой): Лиз 2,37; Сер 0,82;

Асп 0,98; Гли 1,0; Три 2,06 фен 3,24;

Цис 2,24.

Пример 31. Циклический дисульфид . пропионипглицилцистеинйппизипаспарагинипфе нилаланилфенилаланиптриптофиллизилтроенилфенилаланилтреонилсерилцистен (СН CH -СОГли-Цус-Л из-Асн-Фен-Фен-Трп-Л из-Трн.Фен-Трн-Сер-Uис-4»Н1 .

0,800 г (0,32 ммоль) линейного тетрадекапептида формулы СН5СН1-СО-Гли-Цис (Трт) -Л иэ (Бок) -А си-Фен-Фен-Трп-Л из (Бок)—

Трн(Бут) Фен-Трн(Бут),: «-Сер(Бут)-Цис (Трт)-ОН, полученного в примере 30, растворяют в 900 мл горячего метанола, затем раствор охлаждают до комнатной температуры и вносят его по каплям в 150 мл (30 ммоль) 0,5%-ного раствора йода в метаноле, смесь перемешивают 1 ч, затем перемешивают еше 45 мин, охлаждают в ледяной бане и для устранения избытка йода добавляют 6 мл 1 н. раствора тиосульфата натрия в воде. Растворитель отгоняют, остаток растирают в порошок в иэопропило« вом эфире и получают циклический дисульфид тетрадекапептид формулы СН CH -CO-Глиз(Бокр у «c-OH, к 0,400 г (0,2 ммоль) которого в атмосфере азота при интенсивном перемешивании прибавляют 16 мл холодной концентрированной соляной кислоты, смесь охлаждают в бане с ледяной водой, затем перемешивают

10 мин, добавляют 160 мл ледяной уксусной ки«моты и раствор лиофилизируют. Остаток растворяют в воде и вновь лиофилизируют. Сухой остаток растворяют в 50 мл воды, пропускают раствор через копонку (2,5х30 см), заполненную карбсксиметилцеллюлозой (Уатман CM-23) и элюируют продукт 0Ä03 моляльным буферным раствором аммонийацетата. Очищенный материал сушат лиофилизацией и получают целевое соединение в виде белого твердого продукта в форме его кислого аддукта с уксусной кислотой, Л „(в метаноле),283 нм (6,702), 289 нм { с,6,350). Повторной лиофилизацией водного раствора про586837

25 дукта получают целевое соединение в форме свободного пептидного производного.

Аминокислотный анализ: Лиз 2,07, Асп 0,96; Трн 2,07; Сер 0,93; фен 3,14.

Гаким же образом, но с использованием вместо йода тиоцианогена в соответствии с методом Хиски и Смита, можно,получить целевое соединение.

Пример 32. фК. Q -Диметил-3,5- 10

-диметоксибензилоксикарбонилтриптофил- К трет-бутилоксикарбоииллизил- (О-трет-бутил ) -треоиилфенилалаиил- (О-epee-бутил )— треонил- (О-трвчбутил)-серии-2-(тритилтио)-этиламид (Ддз-ТрпЛиз{Бок)«Трн(Вут)-15

-фен-Трн(Бут)-Сер(Бут)- НСН СНе$-ТртД, 0,64 г (1 ммоль) соединения формулы

Ддз-Трп-Лиэ(Бок) Трн(Бут) -Фен-Трн(Бут) —

-Сер(Бут)- ЖН К Н >, полученного в примере 20А, растворяют в 10 мл сухого перег- 20 нанного ДМФ, охлаждают до -20 С. В полученный раствор вносят 0,625 ммоля 2 н. раствора хлористого водорода в этилацетате, затем 0,069 мл (0,6 ммоль) трет-бутилнитрата и перемешивают еще 15 мин при о

-15 С. Раствор 159 мг (0,5 ммоль) 2тритилтиоэтиламина в 10 мл ДМФ и

0,212 мл (1,25 ммоль) H -этилдиизопроо пиламина охлаждают до -15 С и по каплям вводят в полученную реакционную смесь, затем перемешивают при -15 С 1 ч и при

25 С в течение ночи. Смесь упаривают при пониженном давлении, остаток растирают в порошок в охлажденном льдом 1 н. растворе лимонной кислоты, фильтруют, промывают во- З дой и сушат. Остаток хроматографируют на силикагеле (75. r), элюируя. хлороформом со е с держащим 3% метилового спирта, и выделяют хроматографически чистый продукт, который далее кристаллизуют из смеси метило- О вого спирта с изопропиловым эфиром, полу„чая целевое соедвинение, т. пл. 138-.140 С, Ы р +10,8 (е 1; ДМФ).

Пример 33. Триптофил-. N -треч "бутилоксикарбониллизил-(О-трет-бутил)-треонилфенилаланил-(О-трет-бутил ) -тре онил-(О-ypev-бутил ) -серии-2 (тритилтио -этипамид Н-Трп-Л из (Бок) -Трн (Бут ) -Фен-Трн (Вут)— -Сер(Вут)- М HCH СНяS-.Трт).

400 мг (0,256 ммоль) соединения .формулы Ддз-Трт Лиз(Вок)-Трн(Вут)-фен-Трн (Вут)-Сер(Бут)- Я НСН СН З-Трт, полученного в примере 32, растворяют в 3,5 мл холодной смеси уксусная-муравьиная кислоты-вода (7:1:2) и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель упаривают, остаток растворяют в 15мл метанола. Концентрированным раствором гидрата окиси аммония доводят рН смеси до

15, растворитель отгоняют, остаток лиофи60 лиэируют и получают целевое соединение в вице твердого продукта.

Аминокислотный анализ: Лиз 1,06;

Сер 0,75; Трн 1,86; фен 1,00.

Пример 34. Трет-бутилоксикарбонилаланилглицил- Э -тритилцистеинил- K

В ч рет-бутилоксикарбониллизиласпарагинилфенилаланилфенилаланилтриптофил- 2х -yyeeе

=бутил оксикарбон иллизил-(О-тречбутил ) -тре онилфенилаланил-(О-трет-бутил ) -треонил-(0-трет-бутил ) -серии-2-(тритилтио) -этиламид (Бок-Ала-Гли-Цис (Трт) -Л из (Бок )-Аснфен-Фен-Трп-Л из (Бок) -Трн(Бут ) -Фен-Трн

-{ Бут)-Сер(Бут)-,КНСН СНкЯ-Трт .

О, 100 г (0,220 ммонь) ооеднненнн фор:мулы Бок-Ала-Гли-Цис(Трт)-Лиз(Бок)-АснФен-фен-,Я Н КНй, полученного в примере

14, растворяют в 6,25 мл сухого перегнанного ДМФ, раствор охлаждают до -20 С о и прибавляют 0,40 мл {0,80 ммоль) 2 н. раствора хлористого водорода в этилацетате и 0,44 мл (0,384 ммоль) трет-бутилнитрита, смесь перемешивают. 15 мин при-15 С .. о

Раствор 0,492 г (0,320 ммоль) соедине» ния формулы Н-Трп Лиэ(Бок)-Трн(Бут)Фен-Трн (Бут) -Сер (Бут) -ЙНСНйСНуЭ-Трт, полученное в примере 33, в 4,7 мл ДМФ и

0,136 мл (0,8 ммоль) И -этилдиизопропио ламина охлаждают до -15 C и по каплям, добавляют в полученную смесь, перемешивают 1 ч при -15 С и 18 чпри25 С, упаривают досуха при пониженном давлении, остаток растирают в порошок в охлажденном льдом 2 н. растворе лимонной кислоты, фильтруют и промывают водой, затем вновь <растирают в порошок, четыре раза промывают метанолом и сушат, получая целевое соединение.

Аминокислбтный анализ: Лиз 2,24; Сер 0,53; Асп 1,04; Гли 1,00; Трн 1,90;

Ала 1,02; фен 3,16.

Пример 35. Циклический дисульфид апанипгпиципцисстеинипйизиласпарагинипфенипаланилйфенилаланилтриптоффиллизтреоиилфенилонилсерин-2-меркаптоэтиламид Н-Ала-Глиис Лиз-А си-фен-фен-Трп Л иэ-Трн-Фен-ТрнСер- ЕНСН яСН $) .

Раствор 0,6II r {0,240 ммоль) соединения формулы Бок-Ала-Гли-Цис-(Трт)-Диэ (Бок) -Асн-Фен-Фен-Трп Лиз (Бок)-Трн (Бут)«фен-Трн(Бут)-Сер(Бут)- К НСНОСНОS-Трт. полученного в примере 34, в 30 мл сухого перегнанного ДМФ медленно добавляют в перемешиваемый раствор 0,625 г {2,46моль) йода в 122 мл метанола при комнатной тем-. пературе. Раствор перемешивают еще при

25 С 1 ч, охлаждают до 0 С и для устранения избытка йода в него вводят осторожно 1 н. раствор тиосульфата натрия в воде.

Растворитель упаривают практически до cv58683 7

28

-27 хого состояния, остаток растворяют в 10 мп метанола и добавпяют 40 мп холодной воды, Выпавший остаток отделяют, промывают водой, сушат над пятиокисью фосфора и полул чают 1 нкпи к- па- 5

-Гни-Ьис-Лиз(Бок)-Асн-Фен-Фен-Т и-Лиз(Бок)35

Трн Бут -фен-Трн(Бут -Сер(Бут -КНСН СН>

2 2 раствор которого в 19,4 мп концнетрировано ной соляной кислоты охлаждают до О C u интенсивно перемешивают в атмоСфере азо- 10 та 10 мин, затем прибавляют 195 мл ледяной уксусной киспоты и пиофилизируют. Остаток растворяют в 40 мп воды и вновь пиофипизируют. Сухой продукт растворяют в

0,01 мопяльном растворе ацетата аммония, 15 центрифугируют, собирают мутную надосадочную жидкость, которую пропускают через. колонку (2,lx35 см) с карбоксиметипцеллюлозой (Уатман СМ-23), эпюируя 0,06 мопяльным буферным раствором ацетата аммо- 20 ния. Элюат пиофилизируют и получают целевое соединение в виде твердого продукта в фОрме его кислого аддукта с уксусной киспотой, il ® „(в метаноле), нм: 273 (Я 4620), 282 (Е 4779), 289 25 (Е. 4301). Повторной пиофипизацией водного раствора этого продукта получают целевое соединение в форме свободного пептидного производного.

Аминокислотный анапиз: Лиз 1,96;

Сер 0,69; Асп 0,92; Гпи 1,00; Трн 1,83;

Фен 3,03.

Таким же образом, но с использованием вместо йода тиоцианогена в соответствии с методом Хиски и Смита, можно получить также целевое соединение.

Пример 36. Пропионипгпицип- $ тритипцистеинип- К -грет-бутипоксикарбонилпизипаспарагинипфенилапанипфеннилтриптофип- Ю -трет-бутипоксикарбониле 40 и из ил- (О-трет-бутил ) -тре онипфенипапан ип-(О-трег-бутип ) -треон ил-(0-трет-бутип )серии-2-(тритиптио) -этипам ид СН СН -СО-Гли-Цис(Трт)-JIèç(Бок)-Асн-фен-Фен-Трп-Лиз(Бок)-Трн(Бут)-Фен-Три(Бут)- Сер(Бут) — КНСН СН $ -Трт .

0,564 г (0,5 ммопь) гексапептида формулы СН5СН2-СО-Гли-Цис (Трт)-Пиз-(Бок)—

Асн-Фен-Фен- NH N Не, получерного в примере 29, растворяют в 6 мп сухого перегнанного ДМФ. Раствор охлаждают до о

-20 С и добавляют к нему раствор 0,66мл (1,25 ммоль) 1,9 н. хлористого водорода в эгипацегаге,затем 0,0685 мп (0,60ммопь) трет-бутипнитрита. Смесь перемешивают о

15 мин при -15 C и прибавляют к ней раствор 0,670 г (0,50 ммопь) соединения формулы H.-Трп-Лиз(Бок)-Трн(Бут)-фенТрн(Бут)-Сер(Бут)- ИНСН СН $-Трт, полученного в примере 33, в 5 мл ДМФ и

0,214 мп (1,25 ммопь) К -этилдиизопроопиламина, смесь перемешивают при -15 С о

1 ч и при 25 С 18 ч, растворитель отгоняют при пониженном давлении, остаток растирают в порошок в метаноле, затем в охлажденном льдом 1,н. растворе лимонной кислоты, фильтруют и промывают водой.

Твердый остаток вновь растирают четыре раза в метаноле, сушат и получают целевое соединение.

ЯМР-спектр (QM 30 — Йе) 1,05 и

1,13 (18Н), 1,38 (27Н), 7,37 (30H).

Аминокиспотный анализ: Лиз 2,20;

Асп 0,98; Трн 1,73; Сер 0,50; Гли 1,00> фен 2,96.

Пример 37. Циклический дисульфид пр опи они лгпиципцисгеинниппизи паспарагинипфенипапанипаланилтриптофипл изилтреонипфен ипаланиптреонипсерин-2-ме каптоэтипамид

HACH СН -СО-Гли-Цис-Л из-Асн-фен-Фен-Трн-Лиз-Трн-Фен-Трн-Сер-3НСН СНе $

Раствор 0,803 r (0,325 ммопь) соединения СН СН2-СО-Гли-Цис(Трт) Лиз(Бок)А си-фен-фен-Трп-Л из (Бок ) -Трн (Бут) -ФенТрн (Бут) -Сер Бут) — N НСНе CH> $ -Тр r, полученное в примере 36, в 50 мл ДМФ постепенно добавляют в перемешиваемый раствор 0,823 г (3,25 ммопь) йода в о

163 мп метанола при 25 С. Раствор пере ь мешивают еше при 25 С 1 ч, охлаждают о до 0 С и постепенно добавляют 1 и. раст° вор тиосупьфата натрия дпя удаления избыт ка, йода. Растворитепь отгоняют, остаток растворяют в 10 мп метанола и вводят в холодную воду. Выпавший осадок отфильтровывают, сушат над пятиокисью фосфора и получают циклический тет декапептид о м лы

CH СН -СО-Гпи- ис-Лиз(Бок)-Асн-Фенфен-Т пЛ из(Бок) -Трн (Бут) -фен-Трн (Бут)—

Сер(Бут)- К НСН СН $, раствор которого в 25 мл концентрированной соляной кислоты о в атмосфере азота, охлажденный до 0 С, интенсивно перемешивают 10 мин, затем добавпяют 250 мп ледяной уксусной кислоты и раствор пиофипизируют. Остаток растворяют в воде и вновь пиофилизируют. 600 мг остатка растворяют в 0,01 мопяпьном растворе ацетата аммония, центрифугируют, мутную надосадочную жидкость собирают и проФ пускают через колонку (2,1х35 см), запопиениую карбоксимегипцеппюпозой (УатманСМ-23) вымывая 0,04 мопяпьными 0,05 мопяпьным буферным раствором ацегага аммония. Эпюаг пиофипизуюг и попучаюг цепевое соединение в вице бепого твердого продукта в форме киспого аддукга с уксусной кисп отой

3. г,хк. (в меганопе),им:289 (Я 4280), 283 (4680), 267 (f. 4620). Повторной лиофипизацией водного раствора этого продук29

586837

30

Аминокислотный анализ: Лиз 1.,96>

Сер 0,77; Асп 1,01) Гли 1,00 Трн 1,7Р;

Фен,90.

Таким же образом, но с использованием вместо йода тиоцианогена, в соответствии с методом Хиски и Смита, можно также получить целевое соединение.

Пример 38.Бензилэксикарбонил-И

Трет-бутилоксикарбон иллизиласпарагилилфсв шшалаыилфенилаланинметиловый эфир 3- В

"Лиз(Бок)-Асн-фен-фен-ОМе)

К раствору 4,6 г (0,0089 ммоль) соединения формулы Н-Асн-фен-фен-ОМе W

HÑÍ5ÑOOH, полученного в примере 7, в 40 мл о

ДМФ, охлажденному до 0 С, при интенсивном перемешивании добавляют 1,15 мл H—

-этилморфолина и раствор 4,5 г (0 0089 моль соединения формулы 3-. ))-Лиз(Бок)-ON p в 20 мл ДМФ. Реакционную смесь выдеэживают при 0 С 3 дня, растворитель при пониженном давлении выпаривают, остаток кристаллизуют из метанола и получают целевое о соединение, т. пл. 198-199 С.

Вычислено, : С 63,79 Н 6,66;N10,88.

Найдено,%: С 62,56; Н 6,72; К 10,39.

Пример 39. H, S -Дитритилцистеинип — К- трет-бутипоксикарбониппизипаспарагипилфенилаланилфен илаланинметиловый эфир Трт-Цис(Трт)-Лиз(Бок)-Асн-Фен-фенОМе).

Раствор 4,5 г (0,0058 моль) тетрапептида с блокированными группами формулы

3- 9 -Лиз(Бок)-Асн-фен-фен-ОМе, полученного в примере 38, в 80 мл сухого перегнанного ДМФ и 80 мл ледяной уксусной кислоты гидрогенизируют в присутствии 0,6 г катализатора (5% Pcl IС) в течение 3 ч.

Катализатор отфильтровывают, растворитель отгоняют, остаток растворяют в метаноле, осаждают серным эфиром и получают тетрапептид без блокируюших групп формулы Н-9 -Лиз(Бок)-Асн-фен-фен-ОМе, в охлаждено ный до О.С раствор 4,1 г (0,0056 моль) которого и 0,87 мл К-этилморфолина в

30 мл ДМФ при перемешивании добавляют раствор 5,3 г (0,0068 моль) К, 3 -дитpHTHlIUHc TRIS- М вЂ”. оксисукциимидн ого эфио ра. Смесь перемешивают 4 дня при 0 С растворитель отгоняют, остаток растворяют в 400 мл этилацетата, фильтруют и фильтрат промывают 5%-ным водным раствором лимонной кислоты (Зх100 мл), 77-ным раствором бикарбоната натрия (3x100 мл) и насышенным раствором хлористого натрия (2х50 мл). Раствор сушат над безводным сульфатом магния, растворитель оттоияют, остаток кристаллизуют из смеси этита получают цепевэе соединение в формесвободного пептидного производного.

У лацетата с петролейным эфиром и получают о целевое соединение, т.пл. 169 C (разл. )

1<3 9,9 (е 1; ДМФ).

Пример 40. Трег-бутилэкснкарбэнилланилглицил- 3 -тритилцист=-ипил- М

Е

»трет-бутилэксикарбэнил- Q -лизиласпарагинилфеиилалан илфенилаланинметил эв-пй эвкр

Бок-Ала-Гли-Цис(Трт)- Q ;:ç Ьэк -Асыфен-Ф ен-ОМ е) .

В раствор 2,6 r (2,07 м:.ель, с.оедмнения формулы Трт-Цис(Трт)- Р - 1из(Ьвк)Асн-фен-фен-ОМе, полученного в примере

39, в 160мп педянойуксуснэйкисцэты покаппям при комнатной температуре добавляют 30мл о воды. Раствор перемешив тют при 45 С 2 ч, разбавляют 200 мл воды, выпавший осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают досуха, остаток растворяют в метаноле, осаждают серным эфиром и получают Н-Цис(Трт) — ))—

Лиз(Бок)-Асн-фен-фен-Оме, в охлажденный раствор 1 6 г (1 49 ммоль) которого в о

20 мл ДМФ при 0 С добавляют 0,24 мл

H -этилморфолина, раствор 0,79 г (1,86 ммоль) трет-бутилоксикарбонилаланил- глицин-2,4,5-трихлорфенилового эфира, полученного в примере 3, в 7 мл ДМФ и каталитическое кэличество (0,10 г) 1-оксибензотриазола. Раствор выдерживают при о

0 С 3 дня, растворитель отгоняют, остаток

30 растворяют в метаноле, осаждают серным эфиром и кристаллизацией осадка из метанола получают целевое соединение, т.пл.

232 С (разл.), feC)>20,6 (с 1; ДМФ). Аминокислотный анализ: Лиз 1,02;

55 Асп 1,03; Гли 1,00, Ала 1,00; Цис 0,40;

Фен 2,11.

Пример 41. Грет-бутилоксикарбонилаланилглицил- S -тритилцистеинил- И

-трет — бутилоксикарбонил- 3 -лизиласпарагинилфенилаланилфенилаланингицразид j Бок-Ала-Гл и-Цис (Трт) — 3 -Лиз (Бок )-А си-ФенФен- 5Н ИНД.

В раствор 0,95 г (0,76 ммоль) метилового эфира гептапептида формулы Бок-Ала45 Гли-Цис(Трт)- ) -Лиз(Бок)-Асн-Фен-Фен"ОМе, полученный в примере 40, в 12 мл

ДМФ, охлажденный в бане со льдом, добавляют по каплям 1,5 мл (0,0305 моль) гидэазингидрата. Смесь перемешивают при

25 С 20 ч, растворитель отгоняют, остаток растирают в порошок в воде и метаноле, фильтруют, сушат и получают целевое соединение, Аминокислотный анализ: Лиз 1,07;

Асп 1,04; Гли 1,00г Ала 1,00; Цис следы;

Фен 2,18.

Пример 42. Трат-бутилэксикарбонилаланилглицил- ф -тритилцистеинил- Н

Е, -Трет-бутилоксикарбонил- 1) -лизиласпара60 Я .гинилфенилаланилфенилаланилтриптофил- И

586837

31

-трет-бутил оксикарбоннллизил- (Огрет-бутил-серил — S -тритилцистеин Бок-А1.а-Гли-Цис- )) — Л из(Бок)-Асн-Фен-Фен-ТрпЛиз (Бок) -Трн (Бут) -Фен-Трн (Бут) -Сер(Бут)—

Цис(Трт)-ОН).

Аналогично примеру 23, но в качестве первого гептапептида берут соединение формулы Бок-Ала-Гли-Цис(Трт)- 9 -Лиз(Бок)-Асн-Фен-фен — фНЯН2, полученное в примере 41, а в качестве второго гептапептида берут соединение формулы Н-Трп-Лиз(Бок)Три (Бут)-фен-Трн (Бут) -Cep(Бут) -Цис(Трт)—

-ОН, полученное в примере 22В, синтезируют целевой тетрадекапептид,который выдепяют из реакционной смеси, выпаривая растворитель, растворяя остаток в метаноле, повторно осаждая по каплям (добавляя метанольный раствор в 5%-ный водный раствор лимонной кислоты),. отделяя осадок и высушивая конечный продукт. Продукт можетбытьис- щ пользован для дальнейшей работы.

Хминокислотный анализ Лиз 2,14;

Асп 1,09; Трн 2,13; Сер 0,71; Гли 1,00;

Ала 1,00; Цис О, 12; Фен 3,08.

Пример 43. Циклический дисульфид 25 трет-бутилоксикарбонилаланилглицилцистеинил- Х -тРет-бутилкарбонил - D -лизиласпарагинилфенилаланилфенилаланилтриптофил-К

-трет-бутилоксикарбониллизил-(О-грет-бутил)-треонилфенилаланил-(О-трет †бут)-треонил- 36 !

- О-т вт-б тил -ce илцистеин Бок-Ала-Глиис-Лиз Бок)-Асн-фен-фен-Т п-Лиз(Бок)-Три (Бут ) -фен-Трн (Бут ) -Сер (Бут) -Цис-ОН) .

0,65 г (0,25 ммоль) линейного тетрадекапептида формулы Бок-Апа-Гли-Цис(Трт)- 33

Q -Лиз(Бок)-Асн-фен-фен-Трп Лиз(Бок)-Трн-(бут) -Фен-Трн(Бут) Сер(Бут) -Цис (Трт)

-OH, полученного в примере 42, растворяют в

10 мл теплого ДМФ, раствор разбавляют

122 мп бензопа и 490 мл метанола. fIony«40 ченный раствор добавляют по каплям в 122 мл (2,5 ммоль) 0,5%-ного раствора йода в метаноле в течение 1 ч, смесь перемешивао ют еще 1 ч, охлаждают до 0 С и для компенсации избытка йода добавляют 1 н. вод- 43 ный раствор тиосульфата натрия. Растворитель отгоняют, остаток растворяют в метаноле, метанол, упаривают, остаток растирают и порошок в воде, сушат, растирают в диизопропиловом эфире и сушат, получая це50 левое соединение.

Аминокислотный анализ: Лиз 2,21;

Асп 1,02; Сер. 0,93; Цис 1,08; Трн 2,28; Гли 1,00; фен 3,30; Ала 1,00.

Пример 44 (-Лиз")-Соматостатин. 5

Цикпическийдисупьфид апанипгпиципгпиципцисгеинип — D -пизипаспарагинипфенипапанипфенип»

"* ЯЯ нипсерипцистеин Н-Апа-Гпи-Цис- D Лиз-Аснен- рп-Лиз-Трн-фея-Трн-Сер-Цис-ОН)

Аналогично примеру 25, но в качестве циклического дисульфида примера берут эквивалентное количество соединения о м лы

Бок-Ала-Гли-Цис- D -Лиз(Бок)-Асн-Фен«-.«(- "() - (Сер(Бут)-Цис-ОН, получают целевое соединение, Я óKð (в метало;1е): 290 нм (6940), 283 нм (Е 6880).

Аминокислотный анализ: Лиз 1,97;

Асп 0,98; Трн 1,87; Сер 0,86; Гли 1,00)

Ала 0,98; Цис 0,87; фен 3,03.

Пример 45. Бензилоксикарбонил-Ж -бутилоксикарбонил- 5 «пизип-(О-трез

-бутил ) -тре он илфен илалан ил- (О- грет-бутил )—

;треонип-(О-тре1бутип)-серинметиповый эфир

13-Q-Лиз(Бок)-Трн (Бут)-фен-Три (Бут)-Сер (Бут)-ОХИ.

Аналогично примеру 18А, проводят конденсацию соединения 3- }) -Лиз(Бок)-ОИр, полученного в примере 38, и Н-Трн(Бут)фен-Трн(Бут)-Сер(Бут)-ОМе с последующим хроматографическим разделением, получая целевое соединение в виде пенообразного продукта.

ЯМР-спектр (СDC (,, ), Й 1,3 (n, 42Н)

3,75 (g,ЗН), 5,17 (8 ), 7,3 и 7,38 (, 10Н).

Пример 46. aC, aC -Диметил« 3,5-диметоксибензил оксикарбон илтриптофилв И -л рет-бутилоксикарбонил — D лизин-(O"трет-бутил)-треонилфенилаланил- (О-трет-бутил-треонил-(О-трет-бутил ) -серинметил овый эфир (Ддз-Трп- Q -Лиз(Бок)-Трн(Бут)

-Фен-Трн (Бут) -Сер(Бут ) -ОМ е) .

Соединение 3- )) Лиз(Бок)-Трн(Бут)-фен-Трн(Бут)-Сер(Бут)-ОМе, полученное в примере 45, гидрогенизируют аналогично примеру 19А, и проводят конденсацию полученного продукта с соединением Ддз-Трп1

-т ОН. После хроматографической очистки и и кристаллизации из смеси серного эфира с петролейным получают целевое соединение, т.пл. 106-130 С, о ) 5,4 (с 1) ДМФ).

Вычислено,%: С 63,19; Н 7,92 Х8,79.

Найдено,%: С 63,09, Н 7,92, N 8,78.

Пример 47. (, oC, -Диметил-3,5-диметоксибензилоксикарбонилтрнптофенил- М -трет-6утил окс ика рб он ил- D -л изип(О треъ-бутип)-треонилфенипапанил-(О-трет-бутип)-треонил-(О-трет-бутип)серингидразид (Ддз-Tpn- Q Лиз(Бок)-Трн (Бут)-фен-Трн(Бут) . ер(Бут)- КП КН 3.

Раствор 5,14 r (4,04 ммоль) соединения формулы Ддз-Трп- Q Лиз(Бок)-Трн(Бут)-фен-Трн(Бут)-ОМе, полученное в примере

46, в 23 мл ДМФ смешивают с 7,53 мл

1 гидразингидрата и оставляют на 21 ч при комнатной температуре. При добавлении к рекционной смеси воды выпадает осадок, который отделяют и кристаллизуют из смеси

58683

Х)Е ианопа C ДИИЗЭ))РЭПИЛЭВЫМ Эс1)ИРЭМи ПЭЛУо чая целевое соединение, т.пл. 115-130 С, (.)2В5 9,2 (е 1; Дм ф).

Пример 48. d., * — Диметил3,5-диметоксибензил оксикарбэнилтриптофил-N -трет-бутилоксикарбонил- 9 -лизилЕ 5

-(О-трет-бутил )-треонилфенилаланил- (О-третбутил ) -треонил-(О-трет-бутил ) -серил- 3—

-тритилцистеин (Ддз-Трп- )3 Лиз{ Бок)«Трн(Бут) — фен-Трн(Бут) — Сер(Бут)- Цис(Трт)"ОН).

2,1 5 г (1,69 ммоль) соединения,Бдз-Трп2 -Лиз(Бок)-Трн(Бут)-Фен-Трн(Бут)-Сер (Бут)-К НИ Н, полученного в примере 47, растворяют в 35 мл сухого перегнанного ДМФ,, охлаждают go -20 С и прибавляют в нему

2,11 мп 2 н. раствора соляной киспогы в этилацетате, затем 0,233 мл (2,02 ммоль) трет-бутилнитрита и перемешивают 15 мин о при . -15 С, раствор 0,615 г (1,69 ммоль) >О соединения формулы Н-Цис-(Трт)-ОН в 58 мп

ЫМФ, содержащий 1,01 мл (5,92 ммоль) о диизопропилэтиламипа, охлаждают до -15 С и вводят в полученную реакционную смесь, о затем перемешивают еше при -15 С 1 ч о и при 20-25 С в течение ночи, смесь упаривают при пониженном давлении (0,2 мм о рт.ст) при 35 С, остаток растирают в порошок с охлажденным льдом 1 н. раствором лимонной кислоты, фильтруют, промывают водой, сушат и получают целевое соединениее.

ЯМР-спектр (CQiL5 ), Ь;1,13 и

1,2 (27Н), 1,47 (9Н), 1,7 (6Н} 3,78 (BH)

6,3-7,5 (29Н). 35

Пример 49. Триптофил- N -трете

-бутилоксикарбэнил- j) - лизин-(О-трет

-бутил)-треонилфенилаланил- (О-трет-бутил)Фтреэнил-(О-трет-бутип)-серип=- 8 -гритип-, )О цистеин Н-Тpп- D -Лиз(Бок)-Трн(Бут)-Фен-Три ) Б yz ) -Сер, Бут) -Бис ) Трт ) ОН) .

2,18 г (1,36 ммоль) соединения фор- мулы Ддз-Трп- J) -Лиз (Бок) -Трн (Бут)—

-фен-Трн(Бут)-Сер(Бут)-Цис(Трт)-ОН,. по- 45 лученпое в примере 48, растворяют в 18 мл смеси уксусной, муравьиной кислот и воды (7:1:2), перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, растворитель отгоняют остаток растворяют в 15 мл метанола 50 и концентрированным раствором аммиака доводят рН дол.6,5, Полученный раствор добавляют по каплям в холодную воду, осадок отделяют и сушат в эксикаторе над пятиокисью фосфора. Твердый продукт растирают в порошок несколько раз в смеси серного эфира с петролейным (1:1) и вновь сушат, получая целевой продукт.

Аминокислотный анализ: Лиз 1,0;

Трн 1,94; Сер 0,58; Uttc 0,11, Фен 0,96.

34

Пример 50. Трет-бутилэксикарбэнилаланилглицил- 3 — тритилццстеин —, К

E.

-,трег-бутипоксикарбэниппизипаспарагинил:фенилапанипфенипапанилгриптэфил-Й-тре

E бутипоксикарбонип-Р-лизип-(O-трет-бутип)-треонипфенипапанип-(О-трет-бутип)-грео, нил-(G-трет-бутип)-серип- 3-тритилцистеин

-- Бэк-Ада-Гпи-Ц«с (Трт)-Лиз (Бок (-Асн-Фен-Трп- Q-Лиз(Бок)-Трн (бут)-Фен-Трн (Бут)-Сер (Бут)-Цис (Тр т)-ОН).

Аналогично примеру 23, но в качестве первого гептапептида берут соединение фор-. мулы Бок-Ала-Гли-Цис (Трт) -Л из (Бок)-Асн-Фен-фен- Я Н N Н, полученное в примере

14, в качестве второго гептапептида берут соединение Н-Трп- D -Лиз(Бок)-Трн (Бут) — Фен-Три (Бут)-Сер(Бут)-Цис(Трт)—

-ОН, полученное в примере 49, получают целевой линейный тетрадекапептнц, который выделяют из реакционной смеси путем выпаривания растворителя, растирания в порошок остатка последовательно в метаноле, охлажденном льдом 1 н. растворе лимонной кислоты, воде, метанола и сушат. Этот продукт используют на последующих стадиях без дополнительной очистки.

Аминэкиспогный анализ: Лиз 2,01;

Асп 1,00, Трн 1,79, Сер 0,52; Гли 1,00;

Ала 1,01; Цис 0,12; Фен 2,93.

Пример 5 1. Циклический дисульфид трет-бутипэксикарбонипапанипгпициппистеин— 1(-Ypi.T-бутилоксикарбэниллизпласпарагенилфенилаланилфенилаланилтриптофил- М -трет»бутэксикарбонил- р) -лизил-(О-трет-бутил )-треэнплфенилаланил †(О-трет-бутил)-треонипвЂ(О-трет-бутил )-серилцистеин,|Бок-Ала-Гли-Цпс-Л из (Бок ) -A cH ôåí-Фен- 1 рп-Л из (Бо к )—

-Трн(Бут)-Фен-Трн(Бут)-Сер(Бут)-LIIIc-0) I) .

Аналогично примеру 43 линейный тетрадекапептид формулы Бэк-Ала-Гл1г-Цис(Трт)Лиз(E)0K) — Acti-фен-фен-Tplt- g «Лиз(Бэк)-Трн (Бут)-Фен-Трн (Бут)-Сер(Бут)-U«c

-ОН, полученный в примере 50, в растворе смеси ДМФ-метанол обрабатывают йодом, получая целевой циклический дисульфидный тетрадекапептид.

Пример 52. (f) -Лиз )-Сэматостатин. Циклический дисульфид аланилглицилстеин илл из ил а с па раг ин ил фен ила ла н ил фен ил алан илтриптофил- ) ) -л из илтре он ил фен илалан илтреонилсерилцистеин (Н-Ала-1 ли-Цис-ЛизАсн-Фен-Фен-Три- )) -)) ие-Трн-фен-Трн—

Сер-Бис-Of)) .

Аналогично примеру 25, но в качестве циютического дисульфида берут эквивалентное количество циклического дисульфида формулы Бок-Ала-Гли-Цис-Лиз(Бок)-Ac)I-фен-фенТ п- -Л из (Бок)-Трн (Бут) -Фен-Три (Бут)—

Сер(Бут)-Цис-ОН, получают целевое соеди586837

Составитель В. Волкова

Редактор В, Мирзаджанова ТехредН,Андройчук Корректор.A. Лакида

Заказ 4652/716 Тираж 553 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений «и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 филиал Г(ПП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 - MQ«(Е 4420), 282 нм (B 4750).

Аминэкислэтный анализ; Лиз 1,94;

Асп 0,77; Трн 1,84; 1/2 Цис 1,36, Сер

0,86; Гли 1,00; Ала 0,97; Фен 2,97. ф о р м у л а и з о б р е т «i ii

Способ получения производных самотоста- «о тина общей формулы(СН СНК -СО-Гли-Цис- Лиз-Асн-Фен-Фен-Трп-Лиз-Трн-Фен-Трн-Сер- ЯНСН(й -СН $ где Ц -водород или аминогруппа;

К вЂ” водород или карбоксил, если Я вЂ” 1

2 4 аминогру «па, К -карбоксил, то символ

Лиз в полэжении 4,9 может также представлять О -Лиз, с использованием конденса- . ции соответствующих аминокислот и удалением блокирующих гру»п, о т л и ч а ю «ц и и — 20 с я тем, что, с целью повышения качества продукта, проводят реакцию сочетания азидным методом гептапептида обшей формулы ц

CHICHI -CÎ-Гли-Цис(А )-Лиз(Бок)"Ас»-Фен-Фен — К Н К (( а

25 где -водород или Бок г(Н, с(. -Ацм или

Трт с гептапептидом общей фэрмулы1П

Н-Трп-Лиз(Бок)-Тр»(t()-фен-Тр»()«" )"

-Сер() — ЫН -С(-«ЬР-СН 8 = 8 л, зо где К имеет указа»ные значения;

y, y. «и р -водород или группа Бут,,4 — группа Ацм или Трт, :,э;.у «с«,:;эi: лш;ен««эе -с "(«дека««е;«тцц««эe

У

««рэи; Вод«! э«обшей формулы («t

С t>CHE -СО-Гли-Цис(d. )-Лиз(Бэк)—

-Асн-Ф««««-Фен-Тр i-Лиз(Бок)-Тр»(P )-Фе«.:—

-Tp«(P )-С р(у )- Иj(— CH(4 -CH@S-A где (-„ (,, M, /э, p P ii J име«от указанные з»ачения, окиспяют йодом илп тиоцианогеном H соответствующее ««и«ц«««ческээ дисульфид»ое производное обшей формулы V

CH СНК -СО-Гли-Цис-Л из (Бок) -АснФен-Фен — Трп-Лиз (Бок) -Tp» () ) — Фен-Трн (" )-Сер(у-й)- К,(-(— CHR -C((>S с последующим удапе»ием всех оставшихся блокирующих групп в кислых условиях и вы-делением производных соматостатина общей формулы

Источники ннфомациии, при»ятью Во в»и= л«а««««е ««р««эксперт««зе:

1. Стюард Дж„Я««г Д«к, Твердофазный с«н«тез пептидов. М„ М««р", 197 1, с. 77.

2. Йл.«« е Заоп Е. P. Somatastatin.

Tutus p(«э.ее s«.Ы.1 ей (в.— "д. Х«««еР Chl«««

3«э,»,1974, 96 (9 ), 2486-2492.

3.((!редер 3,, У(юбке К, (ептины. М., "М««р", 1969, т. Т; с. 1 16-190.

Приоритет по при=«накам; от 10.12. 73 — К -ам««««эгру««««а; карбэксиль»ая груп»а, от 01.08.74 — Д« — водород, (-во— дород, (- -Н, Я -COO(; (1 (Н ц=)(;

"Л Hg(R OOH Лиз ««л«» Лиз

-1.> -Л из.