Способ получения иммунной сыворотки

о и и ы.

Союз Советских

Соааиапистических

Респубпик

И 3 О Б Р Е Т й.: п

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬС (61) Дополнительное к авт. саид-ву (22) Заявлено 28.04.75(21) 2130245/1 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 251077. Бюллетен (45) Дата опубликования описания (51) М. Кл.

61 К 35/16

Гоондаратеонный номнтет

Совета Мнннетран СССР

Ilo делам нзобретоннй н открытий (5З) УДК 615. 373. 3 (088. 8) (72) Авторы изобретения

К.Л. Шаханина, Л.A. Малкина, Р.Л. Панурина и Б. В. Клеев

Научно-исследовательский ордена Трудового Красного Знамени институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи и Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного

Знамени химико-технологический инстит т им. И.Мен ел .вц (71) Заявители (54) споСОВ пОлучЕНия иммуннай cbIBOPOTKH

Изобретение относится к медицине, а именно к получению диагностических препаратов.

Известен способ получения имунной сыворотки, заключающийся в имму": ниэации животного иммуносорбентами, представляющими собой белково-целлюлоз ные компл ек сы (1 1

Однако известный способ не обеспечивает получения высокоактивной иммунной сыворотки.

С целью повышения активности сыворотки по предлагаемому способу иммунизацию проводят белком-поликонденсатом.

Материалом для приготовления сшитого антигена служит любой антиген белковой природы.

Концентрация белка антигена (гамма-глобулины человека или живот-ных, иммуйоглобулины G, М и А ) перед его сшивкой должна быть в пределах 20-40мг/л. Сшивку белкового антигена проводят в течение 1 ч при 37 С.

К глобулину, помещенному на магнитную мешалку, постепенно добавляют 2,5Ъ глутаровый альдегид в фи зиологическом растворе. Объем глутарового альдегида 3/10 от первоначального объема раствора. Через 1 ч смесь снимают с магнитной мешалки и оставляют стоять 10 ч при комнатной температуре. Перед добавлением глутарового альдегида !устанавливают рН бел-.. кового раствора 4,4, используя 1 М

HCP . Образовавшийся полимер раэмельчают в стеклянном гомогенизаторе Поттера или в ступке в 0,1 N фосфатном

)0 буфере рН 7,?-7,4, а затем центрифугируют и удаляют надосадочную жидкость. Далее повторяют растирание иммуносорбента последовательно в 0,1 М глицин- НСЕ буфере рН 2,0-3,0, в 0,1 М

15- глицин — NaOH буфере рН 8,0 и 0,01 М фосфатном буфере, содержащем 0,15 М

NaC(. рН 7,6. После каждого растирания суспензию центрифугируют и надосадочную жидкость выбрасывают.

20 Последним раствором промывают полимер до тех пор, пока надосадочная жидкость будет содержать меньше чем 0,040 мкг белка/мл при анализе на» спектрофотометре (при 280 нм) .

25 Приготовленный таким образом иммуносорбент хранят при 4 С в виде суспензии в 0,01 М фосфатном буфере, приготовленном на физиологическом растворе рН 7,6. Перед употреблением иммун осор бент промывают свежим Фи557527

Формула - из о бр ет ени я

Составитель С.Малютина

Редактор Л.Гончарова Техред С. Веца. Корректор С. Ямалова

Заказ 3389/7 Тираж 677 П одпи сн ое

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва Ж-35 Раушская наб. д. 4 5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 зиологическим раствором. Содержание белка в 1 мл суспенэии определяют по сухому весу. Для этого 1 мл взвеси высушивают при 104 С до постоянного веса. По разнице веса 1 мл раствора (в котором находится иммуносорбент) и веса сухого остатка после высушивания буфера судят о содержании белка в 1 мл иммуносорбента.

Получение высокоактивной иммуи- lð вой сыворотки проводят при использовании следующей схемы иммунизации.

Пример 1. Иммунизация 10 кроликов сшитым :гамма-глобулином человека. 15

1 день. Первая иммунизация 3 мг сшитого белка в 2 мл физиологического раствора внутримышечно в область лимфоуэлов двух задних лап.

l5 день. Вторая иммунизация 5мг сшитого " белка в 2 мл физиологического раствора внутримышечно в область лимфоузлов двух задних лап.

30 день. Третья иммунизация 8мг сшитого белка в 2 мл физиологического раствора внутримышечно в об25 ласть лимфоузлов двух задних лап. 30 дней отдыха. реиммунизация — 1,2,3 день—

3,5,7 мг растворимого белка s 7 мл физиологического раствора вводят внутривенно. На 8-9 день кровопускание, затем 30 дней отдыха.

П,HI, и lV реиммунизации аналогичны 1.

Получают антисыворотки от 8 zpo» ликов с титром 1:32 и выше и от двух кроликов — 1: 16 (после всех реиммуниэаций одинакового качества).

Пример 2. Иммунизация 10 кроликов сшитым гамма-глобулином морской свинки.

1 день. Первая иммунизация 5 мг сшитого белка в 2 мл физиологического раствора внутримнаечно в область лимфоуэлов двух задних лап, 15 день. Вторая иммунизация

10 мг сшитого белка внутримышечно в область лимфоуэлов двух задних лай, Отдых 30 дней.

1 реиммунизация — 1,2,3 день—

3,5, 7.мг раствора гамма-глобулина морской свинки внутривенно. На 8-9 дейь последней инъекции — кровопускание.

Отдых 30 дней.

П,1П и 1Ч реиммуниэации как и I .

Получают антисыворотки, одинаковые по качеству как после 1 реиммуниэации, так и последующих от 8 кроЛиков с титром 1:32, от одного кролиКа 1:16 и от одного кролика 1:8.

Способ получения иммунной сыворотки путем иммунизации животных иммуносорбентом, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повышения активности сыворотки, иммунизацию проводят белком-поликонденсатом.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1.Х." Nature ", 209, 1966, р.417.