Способ получения поливалентной агглютинирующей о-сыворотки для идентификации нехолерных вибрионов

(П)512767

coIo3 coesrc x 0 Д И С А Н И Е циалистических

Республик

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ASTOPCKOMY СВИДЕтИЛЬСТВ (61) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 08.05,73(21) 1934655/28-13 й, (51) М. Кл

А 61 К 35/16 с присоединением заявки №Государственный комитет

Севвтв Мнннстрав СССР во делам изобретений н еткрытий (23) Приоритет(43) Опубликовано05.05.76.Бюллетень № 17 (45) Дата опубликования описания14 05.76 (53) УДК 615,373.34 (088.8) (72) Авторы изобретения

A. К. Адамов и И. И. Шуркина, (71) Заявитель (5 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИВАЛЕНТНОЙ АГГЛЮТИНИРУЮШЕЙ

0-СЫВОРОТКИ llJIH ИДЕНТИФИКАЦИИ НЕХОЛЕРНЫХ

ВИ БР ИОНОВ

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в медицине для

1диагностики холеры.

Известен способ получения поливалентных

О-сывороток, например, против различных представителей семейства Утрет о оас1еИоссос путем иммунизации кроликов одной из типовых культур, прогретой в течение 2 час при 100оС, с последующим взятием крови, отделением сыворотки и смешиванием полу- 1р ченных типовых 0-сывороток в определенном соотношении или в зависимости от их титров.

Однако известный способ не обеспечивает высокой активности и специфичности препара-та та.

С целью повышения активности и специфичности препарата смешивают два объема сывороток серотипов 2,5,6,25 с одним объемом сывороток серотипов 3,4,7,8,9,10,11, 2р

12в 13е14в15в16в17е18е19в20е21е22в23 °

24,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36>

37,38,39,40, причем сыворотки серотипов

;17,18,19,30 имеют титр антител 1:400, сыворотки серотипов 6,24,25,27,32,34- И

,1:800, сыворотки серотипов 2,11,14,15 21,23,28,40-1;1600 и сыворотки сероти пов 3,4,5,7,8,9,10,12,13,16,20,22,26, 29,31,33«35,36,37 38,39,-1:3200.

Для приготовления поливалентной вибрион ной агглютинируюшей 0-сыворотки использу ют агглютинируюшие 0-сыворотки против 39 серотипов патогенных вибрионов (группы Саказаки ) .

Способ получения 0-антигенов осуществ

) ляют следукяцим образом.

Культуры 39 серотипов вибрионов выра шивают на 1%-ной пептонной воде (рН 7,6) (в течение 4 час при 37оС, затем пересева ют на агар, содержащий перевар из сердеч ной мышцы (рН 7,6). Через 18 час инкуба ции при 37 С культуры с агара смывают физиологическим раствором (рН,2), затем полученные микробные .суспензйи кипятят

2 час на водяной бане при 100оС. Кипяче ные суспензии отмывают дважды физиоло

,гическим раствором (рН 7,2), суспендируют

la небольшом количестве физиологического раствора и после контроля на стерильность, используют для иммунизации животных.

512767

Кроликов иммунизируют по следующей схеме. Первую и вторую инъекцию проводят подкожно по 20 млрд. м. т., третью - внуч ривеиио по 5млрд,,м.т. Между инъекциями г вйдерживают интервал, равный 3 суткам.

На седьмые сутки после третьей инъекции животных обескровлив&юте Иэ полученных сывороток после определения титра по гомологичной культуре готовят поливалентную вибрионную сыворотку.

Препарат представляет собой смесь 0 сывороток против вибрионов 39 серотипов.

Сыворотку против серотипов 3,4,7,8,9,10, 11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22, 23,24,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35, 136,37,38,39,40 берут по 0,1 мл, а против серотипов 2,5,6,25 - по 0,2 мл. При смешивании Ос:ывороток в других соотношениях отмечают или утрату свойотв агглютинировать отдельные серотипы, или отмечают появление неспецифических реакций.

Препарат применяют в реакции агглютинации на стекле по обычной для этой реакции методике. Перед постановкой реакции сыворотку разводят 1:5 физиологическим раствором, рН-7,2.

26

В качестве контроля рекомендуют постановку реакции исследуемой культуры с физиологическим раств ором.

Культура, относящаяся к одному серотиI пу, должна давать положительную реакцию агглютинации с поливалентной вибрионной сывороткой и не давать реакции с физиологичеокнм,раствором.

Поливщц.нтная вибрионная О-агглютинирующая сыворотка была испытана с 39 серо типами. патопенных нехолерных" вибрионов и в практических,, условиях,,4

Результаты проверки чувствительности и специфичности реакции с 39 серотипами патогенных вибрионов показывают, что все штаммы патогенных вибрионов 39 серотипов дают положительную реакцию агглютинации ! с поливалентной вибрионной сывороткой

Результаты практического применения пс, ливалентной вибрионной 0-агглютинируюшей сыворотки показывают, что штаммы, идентифицированные с помощью поливалентной вибрионной 0-агглютинируюшей сыворотки, ar глютинируются соответствующими тип оспецифическими, за исключением штаммов вибрионов, которые агглютинируются поливаленч ной вибрионной (> сывороткой и физиологичес ким раствором на стекле. Эти штаммы в развернутой агглютинации не типируются. а

Формула изобретения

Способ получения полнвалентной агглютинирующей 0-сыворотки для идентификации нехолерных вибрионов путем смешивания типовых О-сывороток, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения активности и специфичности препарата,смешивают два объема сывороток серотипов

2,5,6,25 с одним объемом сывороток серотипов Зю4ю7ю8е9е10ю1 111 2е13114в1 5е16в

17, 18,19,20,21,22,23,24,26,27,28,29, ! 30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40, причем сыворотки серотипов 17,18,19,30 имеют титр антител 1:400, сывороткисеротипов 6,24,25,27,32,34-1:800, сыворотки серотипов 2,11,14,15,21,23,28,401:1600 и сыворотки серотипов 3,4,5,7, 8,9,10,12,13,16,20,22,26,29,31,33,35, 36,37,38,39» 1:3200.

Составитель С. Малютина

РедактоР P., ГончаРова ТехРед H. АндРейчУк КоРРектоР Т Кравчеик, Заказ 243/13 -- Тираж 629 Подписное

0}ЯИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж35, Раушская наб., д, 4/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Гагар.на, 101