Способ получения антиостеобластической остеогенной сыворотки

ОП ИСАН И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Соввтоиив

Социалиотичеокив

Республив

Зависимое от авт. свидетельства ¹

Заявлено 12 11.1966 (№ 1054884/31-16) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 26.1.1973. Бюллетень ¹ 9

М. Кл. А 61k 23 02 иомитет ло аелам из".áf -òåíëé и откочтио оои Совете Миниотров

СССР

УДК 615,373(088.8) Дата опубликования описания 30.III.!О13

Авторы изобретения

П. М. Мажуга и И. Ф. Батюк

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИОСТЕОБЛАСТИЧЕСКОИ

ОСТЕОГЕННОЙ СЫВОРОТКИ

Изобретение относится к медицине, точнее к иммунологии.

Известен способ получения сьввороток путем

ИММуНИЗацИИ КРОЛИКОВ ЭКСтрахтаМИ ТКаечЕй с последующим забором крови и отделением сыворотии.

Цель изобретения — получение а нтиостеобластической остеотенной сыворотки, стнм1 пирующейй зажива ние поврежденной кости.

Для этого животных иммунизируют водносолевым экстрактом из гомогепата очага окостенения трубчатой кости крупного рогатого скота. Экстракт вводят внутривенно в дозе

0,5 — 0,1 — 1,5 — 2,0 лл с и нтервалом в 4 — 5 д|ней.

Пример. Исходный материал для получения антигена — жи|вой плод, крупного рогатого скота, трубчатые кости которого содержат очапп окостенения — острым скальпелем измельчают, промывают стерильным физиологическим раствором, переносят в гомогенизатор или стерильную ступку со стерильным промытым песком и тщательно растирают. В гомогенизатор добавляют пятикратное количество 0,85 о/о-ного физиологического раствора хлористого натрия, гомогенизируют 5 мин при 5000 об мин останавли вают на 10 мин и снова включают на 5 мин. В той же лропорции физиологический раствор добавляют в ступку после растирания ткани. После гомогениза цип гомогенат переносят в стерильную колбу и помещают в рефрпжсратор прп

2 — 4 С на 18 — 20 час. Суапензию после экстрагирования в холодильнике взбалтывают и центрнфугируют 5 лшн при 3000 оо, лтин.

Прозрачную часть all T»l e»a сливают в стерильныи фильтр Зейца. Полученный фильтрат — антиген проверяют на стерильность Il) тем посева на питательные среды.

10 АнтигeH вводят кроликам BII три венно (n ушную вену), начиная с 1 лтл и увеличивая последующую дозу на 0,5 мл. Всего на цикл пм.;1унпзацни треоуется 4 нн ьекции антнгена с промежутками в 4 — 5 дней.

Пробное кровопускание для определения титра сыворотки производят через 3 — 4 дня после последнего введения антигена. Если титр антител не ниже 1: 256, то у кролнков— продуцентов берут по 40 — -15 мл крови, à «с20 рез месяц начинают, второй цикл иммунизации (ре1лммунизация), соблюдая те же условия, что и в первом цикле. При титре сыворотки

1: 256 и выше, после репммунизацин кровопускание производят двухкратно не позже 7 дней

25 T!oc Ie ITnc. IegHci IIII el;II:III 1llTIII она. В первый день берут 50 — 60 мл крови и подкожво вводят кроликам подогретый до 37 С физиологический раствор в дозе, соответствующей количеству взятой крови. Второе тоталь1 ое кроЗ0 вопуска(ние производят через 5 дней после пер 367867

Сил авнгель С. 1ценеыа

Редактор Г. Иыченкова Тскред 1;. Борисова Корректор Л. Новожилова

Заказ 6681 12 !1ад. ¹ 211 Тираж 467 Подписное

Ljlll1111!È КG I!I ла IIG делан изобретений и открыл нй llpH Совете Министров Ci"(Ð 1осква, 7К-З5, Раушская наб., д. 4/5

Типограф и, пр. Сапунова, 2 вого путем вскрытия сонной артерии. Забор крови производят в стерильные цилиндры. Цилиндры с кровью после кровопускания ставят в термостат с температурой 37" С на 30 мин, затем оставляют при комнатной температуре на 18 — 24 час, после чего сыворотку декантируют с помощью сифона в колбы емкостью

200 мл. Сыворотку отстаивают 48 час при

2 — 6 С, отсасывают большой стерильной пипеткой Мора и фильтруют через асбестовый фильтр. Для консервации к получаемой сыворотке добавляют мертиолат 1: 5000, После фильтрации производят контроль сыворотки на стерильность, токсичность и активность.

Для проверки стерильности сыворотку .высевают на питальные среды и выдерживают

8 дней в термостате при 37 С.

Проверку токсичности производят на морских свинках и белых мышах. Пяти мышам весом 15 — 20 г подкожно вводят по 1 мл сыворотки, трем иорским свинкам весом 350 г вводят подкожно по 10 мл. В течение 7 дней свинки должны оставаться aäîðîâûìè и не иметь местной реакции к концу наблюдения.

Мыши должны оставаться здоровыми в течение 4 — 5 суток наблюдения.

Сыворотка должна быть стерильной, прозрачной, строго специфичной с достаточно высоким титром (приблизительно 1: 256 по

РСК) и нетоксичной.

Для оценки активности получен ной сыворотки против репаративного остеогенеза in vivo ставят 11 серий опытов на 120 (собак 21, кроликов 99) животных различного возраста.

Постановлены опыты с полными закрытыми

5 переломами трубчатых костей и опыты с резекцией участка диафиза трубчатой кости вместе с надкостницей (5 — 10 мм).

Проведенные опыты показывают, что малые дозы (0,1 — 0,2 мл) антиостеобластической

10 сыворотки стимулируют остеогенез и ускоряют заживле1ние переломов костей. Напротив, применение больших доз (0,6 мл) этой сыворотки, особенно у молодых животных, приводит к угнетению регенеративного процесса

15 в кости на продолжительное время.

Предмет изобретения

1. Способ получения антиостеобластической остеогенной сыворотки путем иммунизации ла20 боратор1ных животных экстрактом ткани с последующим забором крови и отделением сыворотки, отличающийся тем, что, с целью получения антиостеобластической остеогенной сыворотки, стимулирующей заживление по25 в режденной кости, животных иммунизируют водно-солевым экстрактом из гомогената очага окостенения трубчатой кости крупного рогатого окота.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что

30 экстракт вводят животным внутривенно вдозе

0,5 — 0,1 — 1,5 — 2,0 мл с интервалом в 4 — 5дней.