Способ получения постоянных цитохимических препаратов микроорганизмовэукариот

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

G01N1/36 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

и» 5l5964

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ьеюз йаеетских

Социалистических

Республик

Д (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 08.08.73 (21) 1955150/13 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет

Опубликовано 30.05.76. Бюллетень № 20

Дата опубликования описания 18.06.76 (51) М. Кл 2 6 01N 1/28

Гоеулврстввнный комитет

Мелете йвлнистров i;.Ñ"ÑÐ по делам необретеннй и открытий (53) УДК 578.085.1 (088.8) (72) Автор изобретения (71) Заявитель

Ю. Г. Симаков

Московский ордена Трудового Красного Знамени инженерно-строительный институт им. В. В. Куйбышева (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ

ПОСТОЯ Н НЪ1Х ЦИТОХИМИЧ ЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ

МИКРООРГАНИЗМОВ вЂ” ЭУКАРИОТ

Изобретение относится к области микротехники и может быть применено при морфологическом и цитохимическом анализе в эмбриологии, цитологии и паразитологии.

Известен способ получения тотальных, nocToBHHbIx цитологических и цитохимических препаратов микроорганизмов-эукариот путем фиксации проводки через промежуточные среды, окраски и последующего заключения в твердую среду.

Однако такой способ не обеспечивает сохранения структуры микроорганизмов размером от 50 до 300 мкм.

С целью сохранения структуры микроорганизмов размером от 50 до 300 мкм по предлагаемому способу микроорганизмы прижимают к предметному стеклу с помощью покровного стекла, замораживают, затем снимают покровное стекло и мгновенно переносят в водоотнимающий фиксатор.

Способ осуществляют следующим образом, Исследуемые микроорганизмы помещают на предметное стекло в капле воды. Затем тонко оттянутой Пастеровской пипеткой воду из капли отсасывают до уровня, при котором микроорганизмы начинают касаться поверхности предметного стекла. Для получения давленых препаратов необходимо более глубокое отсасывание воды. Затем микроорганизмы придавливают покровным стеклом. Стекло только опускается на каплю с микроорганизмами и своей тяжестью сплющивает исследуемые микрообьекты, оставляя их при этом живыми.

Изготовляемый препарат переносят па термоэлектрический замораживающий столик

ТОЗ вЂ” 11. Микроорганизмы при полном замораживании становятся видимы невооруженным глазом как маленькие белые точки.

Скальпелем поддевают край покровного стекла и срывают его движением вверх. Замороженные микроорганизмы при этом остаются на предметном стекле. Сразу же после срыва покровного стекла предметное стекло с замороженным материалом помещают для фиксации в 96 -пый этиловый или метиловый спирт, можно также фиксировать в смеси спирт вЂ” ацетон (1: 1). Оттаивание препарата сопровождают быстрым удалением воды и сохранением той структуры, которая была при замораживании. Микроорганизмы после фиксации остаются прикрепленными к предметному стеклу и распластаны на нем. Время фиксации от 5 до 10 мин, в зависимости от величины обьектов. Затем следует обычная обра25 ботка и проведение препарата до воды по спиртам понижающейся концентрации (в проводке должны быть обязательно после 70 -ного спирта 50 и 30 -ные спирты). Дальнейшую операцию проводят по прописям требуемых

30 реакций, препарат окрашивают на цитохимию

515964

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор Н. Спиридонова

Техред М. Семенов

Корректор E. Хмелева

Заказ 1324713 Изд. М 1374 Тираж 1029 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 или морфологию, доводят по возрастающим концентрациям спиртов до ксилола и заключают в канадский бальзам или в другие синтетические смолы.

Полученные этим способом препараты позволяют выявить точную локализацию химических компонентов клетки, придавить до монослоя и изучить все клетки у многоклеточных организмов, провести реакции на выявление химических компонентов, при которых требуется спиртовая фиксация. Способ сокращает время изготовления одного препарата по сравнению с другими способами.

Способ получения постоянных цитохимических препаратов микроорганизмов-эукариот

5 путем фиксации, проводки, окраски, заливки в твердую среду, отлич а ющийс я тем, что, с целью сохранения структуры микроорганизмов размером от 50,до 300 мкм, микроорганизмы прижимают к предметному стеклу с

10 помощью покровного стекла, замораживают, затем снимают покровное стекло и мгновенно переносят в водоотнимающий фиксатор.