Способ определения количества клеток в растительных тканях

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН N SI

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (i) 510195

Союз Советских

Социалистических

Республик (б1) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 17.04.74 (21) 2017291!15 с присоединением заявки Ке (23) Приоритет

Опубликовано 15.04.76. Бюллетень Ме 14

Дата опубликования описания 09.09.76 (51) М. Кл.- А 01G 7/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР. по делам изобретений и открытий (53) УДК 58.002 (088.8) (72) Авторы изобретения

В. С. Радцев, М. С. Осокин и H. П. Чист (71) Заявитель

Уфимский филиал Всесоюзного научно-исследов института химических средств защиты растений (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА КЛЕТОК

В РАСТИТЕЛЬНЫХ ТКАНЯХ

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к физиологии растений, а именно к способу определения количества клеток в растительных тканях.

Известен способ мацерации ткани клеток, заключающийся в том, что кусочек ткани, например кончики корней, погружают в

5 /О-ную хромовую кислоту и выдерживают в течение 17 — 24 ч, затем количество клеток в мацеранте подсчитывают в счетных камерах под микроскопом.

Недостатками известного способа являются длительность и сложность его проведения; неполное разделение ткани на клетки, и, вследствие этого, присутствие определяемой взвеси агломератов, содержащих по нескольку десятков клеток в них; трудоемкий подсчет числа клеток под микроскопом в счетных камерах.

С целью упрощения анализа и сокращения времени на его проведение предлагают,в раствор хромовой кислоты добавлять минеральную соль, например хлористый кальций, в количестве 1 — 2 вес. %, а мацерацию проводить под вакуумом.

Подсчет клеток предлагают осуществлять путем замера оптической плотности взвеси.

Предлагаемый способ осуществляют приведенным ниже образом.

Кусочки ткани, подлежащие мацерации, отрезают острым скальпелем на листе темной бумаги под микроскопом МБС-1. В тубус микроскопа вкладывают измерительный окуляр для точного измерения размеров образцов, что необходимо для дальнейшего пересчета количества клеток в ткани на единицу объема. Далее образцы переносят в пробирки с 1,5 /О-;ным раствором хлористого кальция в 5 /О-ной хромовой кислоте, послед10 ние помещают в вакуум-термостат на 3,5—

4 ч, где поддерживают вакуум 120 мм рт. ст. и температуру 35 С. Концентрацию хромо,вой кислоты берут в зависимости от объекта.

Ткани корня и гипокотиля проростков горо15 ха мацерируют в 5%-ной, ткани листа — в

7%-ной хромовой кислоте, 2 — 3 мл мацеранта в пробирке достаточно для мацерирования

10 — 20 мм" ткани, например 5 — 10 кончиков корней по 5,5 мм, при увеличении объема

20 мацерируемой ткани количество мацеранта соответственно необходимо увеличить.

В течение непродолжительного времени (3,5 — 4 ч) за счет инфильтрации вакуумом и температуры 35 С хромовая кислота про25 никает;в межклетники ткани и растворяет пектиновые вещества, связывающие клетки.

Введенный в раствор хлористый кальций, вызывая плазмолиз и разрушая плазменные тяжи между клетками в межклеточном проЗО странстве, способствует более полному раз510195

Таблица 2

Корни, мацерированные в 1,50;-ном растворе хлористого кальция в 5%-ной хромовой кислоте при обычных условиях в течение 20 ч

Корни, мацерированные в 5 -ной хромовой кислоте при обычных условиях в течение

20 ч (по Брауну) Х,— Х, .(Xi — Xi) (Х,— Хв) х,— х, 12

Х2 х, Примечание: Х,, Х вЂ” количество клеток в агрегате;

f,, f — количество соответствующих агрегатов;

Х,— Х,— отклонение от среднего значения.

Весь процесс определения количества клеток в исследуемых образцах занимает всего

4 — 4,5 ч, что в 3 — 5 раз быстрее определения по сравнению с,известным способом определения количества клеток в растительных тканях. рацию последних раствором хромовой кислоты и подсчет их во взвеси, о т л и ч а ю щ,и йс я тем, что, с целью упрощения анализа и сокращения времени на его проведение, в раствор хромовой кислоты добавляют минеральную соль, например хлористый кальций, в количестве 1 — 2 вес. в в, а мацерацию проводят под вакуумом.

2. Способ по п, 1, отл ич а ющийс я тем, что подсчет клеток осуществляют путем замера оптической плотности взвеси.

Формула изобретения

1. Способ определения количества клеток в растительных тканях, включающий мацеСоставитель Л. Плащика

Техред Т. Зимина

Корректор О. Тюрина

Редактор Л. Новожилова

Заказ 1829/21 Изд. № 1437 Тираж 764 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

2

4

6

8

11

14

107

29

17

11

8

4

2,5 — 1,5 — 0,5

+0,5

-1- 1, 5

+2,5

+3,5 —,4,5

+5,5

+7,5

+10,5

+16,5

+31,5

6,25

2,25

0,25

0,25

2,25

6,25

12,25

20,25

30,25

56,25

110,30

272,30

992,30

2

4

6

21

4

2 — 1,6 — 0,6 — 0,4

+1,4

+2,4

+3,4 .+4,4

+7,4

+10,4

2,56

0,36

0,16

1,96

5,76

11,56

19,36

54,76

108,20