Способ получения окси- -пропина или -ацетилокси- -пропина из гидролизованного желатина

Воеоо.ознатт . = . 9k

::;:;: а тон.т:. -.", 1= А оп 46I489

ОЛИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Сокналистических

Рссо",банк (61) Зависимый от патента (22) Заявлено 08.01.73 (21) 1866734/23-4 (51 ) М. Кл. С 07с 101/08 (32) Приоритет 19.01.72 (31) 47815-А/72 (33) Италия

Государственный комитет

Совета Министров СССР ;: по делам изобретений и открытий

Опубликовано 25.0"..75. В:оллстснь № 7 (53) УДК 547.466.07 (088,8) Дата опубликования описания 10.07.75 (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Онофрио Леонардо. Жиакомо Джиорджио и Франческо Эспозито (Италия) Иностранная фирма «Ричардсон-Мерелл СПА» (Италия) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОКСИ-L-ПРОЛИНА

ИЛИ N-АЦЕТИЛОКСИ-L-HPGJlHHA ИЗ ГИДРОЛИЗОВАННОГО

ЖЕЛАТИНА

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения окси-L-пролина или

N-ацетилокси-L-пролина, обладающих биологической активностью.

Известен способ получения окси-L-пролина из гидролизованного желатина с отделением от продуктов гидролиза аргинина, что значительно усложняет процесс.

В соответствии с предлагаемым способом при выделении окси-L-пр олин а количество стадий уменьшается, причем исключается отделение аргинина и целевые продукты получаются с большими выходами.

Предлагаемый способ получения окси-Lпролина состоит из следующих основных стадий: гидролиз животного желатина, ацетилирование продуктов гидролиза, бензоилирование ацетилированного раствора и кислотный или щелочной гидролиз полученного N-ацетилО-бензоилокси-L-пролина.

Реакцию ацетилирования проводят в нейтральной среде, бензоилирование проводят в присутствии или отсутствии растворителя, смешивающегося с водой, например ацетона.

Кислотный гидролиз N-ацетил-О-бензоилокси1 -пролина проводят в присутствии сильных кислот, таких как соляная, щелочной — любым сильным основанием, таким как едкии натр, едкое кали и др.

Пример 1. Гидролиз желатина.

Смесь 34 кг технического желатина (3,4 по

Энглеру), 20,5 л воды 47,5 л 34%-ной коммерческой соляной кислоты кипятят с обратным холодильником 6 час в реакторе типа Пфаудлер емкостью 100 л. Реакционную смесь, охлажденную 20 С, обесцвечивают с помощью

1,2 кг угля, который затем удаляют фильтрованием. Раствор упаривают досуха в вакууме.

К маслянистому остатку добавляют 15 л воды и концентрируют досуха и остаток растворяют в воде до объема 46 л. Выход окси-L-пролина составляет 96% по сравнению с количеством, присутствующим в исходном желатине.

П р и мер 2. Ацетилирование окси-L-пролина.

11 л гидролизованного продукта, полученного в примере 1, нейтрализуют 45%-ной гид20 роокисью натрия в количестве 4,9 л при температуре от 5 до 10 С. Реакционную смесь охлаждают до 0 С при перемешивании, добавляют 9 л уксусного ангидрида и 29,9 л 8н. гидроокиси натрия, поддерживая температуру рс25 акции в пределах 0 — 1 С. Добавление проводят в 10 приемов, каждое через 20 мин, поддерживая рН раствора нейтральным в течение всего времени реакции. Выход после ацетилирования 98 — 100% (определяют нингидрид30 ным методом) .

461489

Предмет изобретения

Составитель А. Фрегер

Редактор Т. Загребельная Техред О. Гуменюк

Корректор Л. Котова

Заказ 1924/8 Изд Хе 386 Тираж 529 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Сапунова, 2

Типография, пр.

Пример 3. Бензоилирование N-ацетил-L. оксипролина.

4. Ацетилированный раствор 8 л продукта, полученного в примере 2, разбавленный в 16 л воды, охлаждают до 0 С. Добавляют 1,05 л бензоилхлорида и 8 л 2 н. гидроокиси натрия через 30 мин при перемешивании, поддерживая температуру 0 — 3 С. Когда добавление заканчивают, реакционную смесь оставляют (при перемешивании) еще в течение 2 час при 0 — 3 С и нейтральной реакции среды. Затем эту смесь подкисляют до рН 1 добавлением 5 л 34%-ной HCI, некоторое время размешивают при 0 С. После экстракции хлороформом органическую фазу промывают водой и концентрируют в вакууме. Остаток размешивают с этиловым эфиром (4 — 5 л) в течение

30 мин и оставляют отстаиваться на 40 мин при 4 С. Затем фильтруют, осаждают N-ацетил-О-бензоилокси-L-пролин и высушивают его в вакууме. Выход 160 г; т. пл. 175 С; (а) = — 40,4 . Образец кристаллизуют хлороформом, этиловым эфиром; т. пл. 183—

184 С.

В. 2,8 л ацетилированного раствора соединения, полученного в примере 2, растворяют в

280 см ацетона, добавляют, размешивая, 8 см бензоилхлорида и 80 см 2 н. гидроокси натрия так, чтобы температура не превышала

0 С. Затем размешивают еще 30 мин, контролируют рН раствора, поддерживая нейтральную среду добавлением 2 н. NaOH или уксусной кислоты. Такое же количество бензоилхлорида добавляют при тех же условиях реакции, чтобы получить 80 см бензоилхлорида и 800 смз 2 í. NaOH. Смесь перемешивают в течение 90 мин при 0 С. Ацетон удаляют испарением в вакууме. Остаток разбавляют

250 смз воды, подкисляют 600 см концентрированной НСI, экстрагируют хлороформом, органическую фазу промывают водой, концентрируют в вакууме и остаток кристаллизуют пз

1 л этилового эфира. Выход — 12 г N-ацетилО-бензоилокси-L-пролина; т. пл. 170 †1 С без депрессии с образцами, приготовленными различным путем; (а)ф = — 35 .

П р и м ер 4. N-ацетилокси-L-пролин.

150 r N-ацетил-О-бензоилокси-L-пролина и

600 смз 2 í. NaOH размешивают и выдерживают при комнатной температуре в течение

5 час. Добавляют 750 смз IR 120 (Н+) амберлитовой смолы и смесь перемешивают еще

30 мин. Большее количество полученного осадка является бензойной кислотой. Ее отфильтровывают и остаток несколько раз промывают водой до тех пор, пока фильтрат не достиг5

Зо

4 нет окончательного объема — 4 л. Этот раствор пропускают через колонну IR 120 (Н+) амберлитовой смолы. Элюат концентрируют при 40 С и в вакууме до объема 450 см, затем экстрагируют 200 см хлороформа. Водный раствор обесцвечивают 6 r животного угля, фильтруют и насыщают. Остаток размешивают в 270 смз ацетона и оставляют для кристаллизации на 30 мин. Затем его фильтруют и осажденное соединение высушивают в вакууме. Получают 84,5 г моногидрата Х-ацетилокси-L-пролина; т. пл. 74 — 76 С. Это соединение, выдержанное в вакууме при 55 С в течение 10 час, теряет молекулы воды, так что получается 76 г безводного N-ацетилоксиL-пролина. Из кристаллизационной воды в дальнейшем получают 6,5 г безводного продукта. Общий выход 82,5 г; т. пл. 126 — 128 С; (а) в = 119,5 (Н20; с= 3,75) .

Пример 5. Окси-L-пролин, Смесь из 50 r N-ацетил-О-бензоилокси-Lпролина, 300 см 34/о-ной HCI и 200 смз воды нагревают с обратным холодильником 18 час.

Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и экстрагируют дважды 100 смз хлороформа. Водный раствор концентрируют в вакууме, добавляют к воде, а затем концентрируют еще раз. Эта операция повторяется несколько раз для удаления избытка НС1. Окончательный остаток растворяют в 500 см воды и обрабатывают 165 см IRA 68 амберлитовой смолы (свободное основание). Затем фильтруют, смолу промывают водой, водные растворы собирают и обеспечивают углем, фильтруют и концентрируют досуха. К концентрированному соединению добавляют 250 смз метанола; кристаллизуется окси-L-пролин, который отфильтровывают и высушивают. Выход 22,95 r; (a) 2 =75 (Н О; с=2,37).

Вычислено, /о. С 45,79; Н 6,91; N 10,68.

СаН9ХОз.

Найдено, /о. С 45,58; Н 6,87; N 10,44.

Способ получения окси-L-пролина или

N-ацетилокси-L-пролина из гидролизованного желатина, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и упрощения процесса, продукты гидролиза желатина ацетилируют уксусным ангидридом, полученный продукт бензоилируют бензоилхлоридом, выделяют из этого раствора N-ацетил-О-бензоилокси-L-пролин, последний гидролизуют в щелочной или кислой среде.