Питательная среда для культивирования aspergillus foetidus — продуцента ферментов
. *сч4 Е,,;,;
ОПИСАЙЙЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ (i i) 436О79
Союз СоветскиХ
Социапистичесюп
Республик
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 10.04.72 (21) 1770061/28-13 с присоединением заявки № (32) Приоритет
Опубликовано 15.07.74. Бюллетень № 26
Дата опубликования описания 18.12.74 (51) М. Кл. С 12Ь 3/00
С 12d 13/10
Государственный комитет
Совета 1иинистрав СССР па делам изобретений и открытий (53) УДК 577.15.07 (088.8) (72) Авторы изобретения Л. С. Лосякова, К. А. Калунянц, T. М. Малышева и Л. Н. Мушникова (71) Заявитель
Всесоюзный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ
ASPERGILLUS FOETIDUS — ПРОДУЦЕНТА ФЕРМЕНТОВ
Изобретение относится к микробиологической промышленности.
Известна питательная среда для культивирования Aspergillus foetidus — продуцента ферментов, содержащая пшеничные отруби, свекловичный жом и минеральные соли.
С целью интенсификации биосинтеза протеолитических ферментов, в частности кислой протеиназы, в предлагаемой среде пшеничные отруби и свекловичный жом содержатся в количествах соответственно равных, 87 — 74 и 10 — 20, из минеральных солей используют нитрат натрия в количестве 3 — 6%.
Сущность изобретения заключается в следующем.
Выращивание плесневого гриба Aspergillus
foetidus проводят на питательной среде, содержащей пшеничные отруби 87 — 74%, свекловичный жом 10 — 20% и нитратные соли щелочных металлов 3 — 6%, в течение 48 час при 32 — 36 С. Выросшая культура гриба представляет собой остатки питательной среды, проросшей мицелием.
Готовую культуру гриба измельчают и за5 ливают водой в соотношении 1: 2,5 — 1: 3,5 к весу абс. сухой культуры. Экстракцию ведут в течение 40 — 60 мин, после чего массу отжимают до влажности 60 — 62%, фильтрат собирают и используют для дальнейшего вы10 деления ферментного препарата кислой протеин азы.
Выделение препарата проводят осаждением этиловым спиртом при концентрации в смеси 70 — 72%.
15 Полученный осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин.
Ниже приведена таблица активности пектолитических и протеолитических ферментов, полученных с применением предложенной пи20 тательной среды и известных, 436079
Активность кислой протеиназы
Пектолитическая активность
Состав среды,,, ед/г ед/г от контроля от контроля
10 — 20 свекловичного жома
86 — 76 пшеничных отрубей
4 ИаИО, 10 — 20 свекловичного жома
86 — 76 пшеничных отрубей
4 КИОЗ
9 — 21 свекловичного жома
91 — 79 пшеничных отрубей
9 — 21 свекловичного жома
91 — 79 пшеничных отрубей
6 ИаХО, 300
90000
37,2
3,08
288
86240
35,6
2,96
54200
180
75,0
6,04
70000
230,3
33,8
2,72
При изменении состава питательной среды (среда Мя 3) подавляется биосинтез пектолитических ферментов и усиливается биосинтез кислой протеиназы, активность которой увеличивается на 80О/о. При оптимизации питательной среды (среды 1, 2), т. е. добавлении нитратных солей щелочных металлов в количестве 3 — 5%, резко увеличивается активность кислой протеинозы (96240 — 100000 ед/г, т. е. на 288 — 300%) и резко снижается активность пектолитических ферментов. При увеличении концентрации нитратных солей щелочных металлов до 6 /о, активность кислой протениозы снижается до 70000 ед/г.
Пример (контроль) . 25 г свекловичного жома, 74 г пшеничных отрубей и 1 г сернокислого аммония смешивают, увлажняют
120 мл воды до влажности 60%. Увлажненную питательную среду помещают в колбу на
1 л и стерилизуют в течение 60 мин, при
1 атм. Простерилизованную питательную среду охлаждают до 37 С и засевают 10 мл водной суспензии конидий гриба. Засеянную питательную среду перемешивают и раскладывают в кюветы по 200 г (толщина слоя 3 см).
Выращивание проводят в течение 38 — 40 час при 28 — 32 С.
Готовую культуру гриба измельчают и заливают водой в количестве 320 мл, экстрагируют в течение 60 мин. По окончании экстракции массу отжимают до влажности
62%, фильтр ат собирают. Выделение ферментного препарата проводят этиловым спиртом при концентрации в смеси 73,5%. Полученный осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин.
Активность кислой протеиназы в культуре составляет 30000 ед/г, а ферментном препар ате — 290000 ед/г.
Пример 2. 15 г свекловичного жома, 81 r пшеничных отрубей и 4 г NaNOq смешивают, увлажняют 120 мл воды до влажности 60 /о. Увлажненную питательную среду помещают в колбу на 1 л и стерилизуют в течение 60 мин при 1 атм. Затем среду охлаждают до 37 С и засевают 10 мл водной суспензией конидий гриба.
Засеянную питательную среду перемеши10 вают и раскладывают в кюветы по 200 r (толщина слоя 3 см). Выращивание проводят в течение 48 час при 32 — 36 С. Готовую культуру гриба измельчают и заливают водой в количестве 210 мл. Экстракцию про15 должают в течение 60 мин, после чего отжимают до влажности 62%, фильтрат собирают и используют для выделения препарата.
Выделение ферментного препарата проводят этиловым спиртом при концентрации в
20 смеси 71 /о. Полученный осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин.
Активность кислой протеиназы в культуре составляет 90000 ед/г, ферментном препарате — 93 8000 ед/г.
Предмет изобретения
Питательная среда для культивирования
30 Aspergillus foetidus — продуцента ферментов содержащая пшеничные отруби, свекловичный жом и минеральные соли, о т л и ч а ющ а я с я тем, что, с целью интенсификации оиосинтеза протеолитических ферментов—
35 кислой протеиназы, пшеничные отруби и свекловичный жом содержатся в количествах соответственно равных, вес. : 74 — 87 и
10 — 20, из минеральных солей используют нитрат натрия в количестве 3 — 6.
