Патент ссср 427993
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ (ii) 427993
Союз Советских
Социалистических
Реслублин (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 07.02.72 (21) 1748728/28-13 (51) M. Кл. С 12k 3/00
А 231 1/18 с присоединением заявки №
Гасударственный комитет
Совета Миниатрав СССР па делам изааратаний и открытий (32) Приоритет
Опубликовано 15.05.74. Бюллетень № 18
Дата опубликования описания 29.10.74 (53) УДК 576,8(088.8) (72) Авторы изобретения Н. М. Пидопличко, А. С. Бухало„Л. П, Пархоменко и М, H. Марченко (71) Заявитель Институт микробиологии и вирусологии им. акад. Д. К. Заболотного
ШТАММ ГРИБА PLEUROTUS OSTREATUS (Fr) KUMMEB
HMBF — 1300 — П РОДУЦЕНТ БИОМАССЫ
Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к штаммам гриба Pleurotus ostreatus (Fr) Кшпгпег.
Известны грибы типа Pleurotus ostreatus (Fr) Кйпппег.
Однако они не обладают грибным ароматом.
Предлагаемый штамм является более продуктивным, а выращенная биомасса обладает специфическим грибным ароматом.
Предлагаемый штамм выделен из плодовых тел Pleurotus ostreatus (вишенки обыкновенной), которые были собраны на пнях лиственных пород в окрестностях r. Киева. Выделение производили на суслоагаровую среду с антибиотиками, Культура хранится на нейтральном сусло-агаре при температуре +4
+5 С в коллекции отдела экспериментальной микологии института микробиологии и вирусологии АН УССР им. Д. К. Заболотного, ши фр штамма ИМВР 1300.
Гриб выращивался глубинным методом на следующих средах: а) среда с пептоном и отваром красного клевера содержит сахарозы 30 r, пептона 3 г, НК2Р04 2 r, КС1 1,2 r, MgSO4 0,25 r, воды водопроводной 900 мл, отвар красного клевера
100 мл, рН 60; б) среда с мочевиной и дрожжевым автолизатом содержит сахарозы 30 г, мочевины 2 г, КН2РО 2 r, КС1 1,2 г, MgSO4 0,25 г, дрожжевого автолизата 2 мл, воды водопроводной
l л,рН60; в) минеральная среда содержит сахарозы
5 30 г, аммония виннокислого 6 г, КН2РО4 2 г, КСl 1,2 г, MgSO4 0,25 r, воды водопроводной
l л,рН6,0; г) сусло пивное (4 по Баллингу) агар
001%; рН 6,0.
10 Предлагаемый гриб культивировался в лабораторных условиях поверхностно в колбах
Эрленмейера различной емкости и матрацах, глубинно в пробирках на пробирочной качалке при 200 об/мин, и в колбах Эрленмейера
15 на 250 †5 мл на круговой качалке при
120 †1 об/мин. Температура инкубации
26 — 28 С. Посевной материал выращивался в колбах Эрленмейера на 250 †5 мл с 50—
100 мл среды. На дно колб насыпались фар20 форовые бусы, с помощью которых при интенсивном встряхивании измельчалась мицелиальная пленка перед посевом. Среда инокулировалась такой мицелиальной взвесью в количестве 10 — 20% по объему.
25 Изучалось влияние на рост гриба рН среды (табл. 1), различных источников углерода (табл. 2), азота (табл. 3, 4) и их концентрации в среде (табл. 5, 6 и 7) наличие и концентрации в среде солей Р, К, Mg (табл. 8), 30 витамина В и различных стимуляторов
427993
Рост Pleurotus ostreatus на синтетической минеральной среде при разных исходных значениях рН среды, г/л сухого мицелия, приведен ниже. (табл. 9), количества посевного мицелия (табл. 10) возраста и температурного режима его выращивания, добавок агара и СаСОз (табл 11).
Таблица 1 рН 60 рН 7,0 рН 5,0 рН 8,0 рН 4,0 рН 9,0 рН 10,0 рН 1,0 рН 2,0 рН 3,0
2,0
6,0
6,5 — 7,0
2,9
4,3
6 — 6,5
5,5 — 6,0
4 — 4,5
3,9
4,5
3,6
4 — 4,5
7,0
3,5
6,1
1,2
3,5
0,1 углерода, % к весу мицелия на среде с глгокозой, приведен в табл. 2.
Табли ца 2
Рост Pleurotus ostreatus на минеральной синтетической среде с разными источниками
Ксилоза Галактоза Сахароза
Лактоза
Мальтоза
Раффиноза
Крахмал
Маинит
Глюкоза
44
74
107
100
Рост Pleurotus ostreatus на синтетической среде с разными источниками азота и без азота, г/л сухого мицелия, показан в табл. 4
Таблица 4
Рост Pleurotus ostreatus на минеральной синтетической среде с разными источниками азота, % к росту на среде NANO>, приведен в табл. 3.
Таблица 3
Аммоний виннокислый
Без азота
Мочевина
Пептон
NH4Cj
Мочевина
Аспарагин
NaNO3
3,0
2,6
6,5
7,5
1516
591 роста нет
Рост и использование сахаров грибом
Pleurotus ostreatus при глубинном культивировании на среде с разным содержанием сахарозы приведен в табл. 5.
Таблица 5
Исходное содержание сахара в среде, о
Продолжительность опыта, сутки
Вес сухого мицелия, г/л
Использование сахаров, о, 8,8
8,2
15,0
12,0
17,9
18,9
7,8
22,0
63
89
79,6
84
Рост Pleurotus ostreatus в глубинной культуре при разном содержании пептона в среде приведен в табл. 6.
Таблица 6
Рост Pleurotus ostreatus в глубинной культуре при разном содержании мочевины в среде приведен в табл. 7.
Таблица 7
Вес сухого мицелия, г/л
Вес Сухого мицелия, г/л
Содержание пептона в среде, г/л
Содержание мочевины в среде, г/л
7, сутки
3, сутки
3, сутки
5, сутки
7, сутки
5, сутки
Х
G4
Х
1,5
6
Х с4
Х
О
Х
С4
О
14,2
16,7
13,6
20,5
Х
Р.
Х
О
17,9
19,2
23,0
20,7
Х
Х
О
15,4
36,2
24,7
22,5 ж
М о
Х
Х
О
0,35
0,7
1,05
1,4
Р»
Х
О
Х
С4
Х
М
17,7
17,4
16,9
12,9
21,4
17,4
17,9
18,5
Х
Сй
Х
О
20,7
16,8
15,1
27,6
Х
44
Х
427993
Р, К, Mg, % к сухому весу мицелия в контроле, приведен в табл. 8.
Таблица 8
Рост Pleurotus ostreatus на минеральной синтетической среде с разным содержанием
MgSO4 7Н О г/л
HCl, г/л
ИаН,РО„г/л
Контроль без
МдЮ, Контроль без
KCI
Контроль без
ИаН,РО„
0,4 0,8
0,75 1,0
0,25 0,5
1,2
1,6
1,5 2,0
1,0
0,5
125 75
100
150
200
75 125
150 100
100
150 200
150
100 100
Таблица 9
Отвары
Контроль (без витамина и сти мулятора) Сусло пивное 4 по
Баллингу
Витамин В1 фасоль люцерна горох люпин вика кукуруза овес клевер
182
282
288
165
241
147
159
188
208
100
Рост Pleurotus ostreatus на пивном сусле при различном соотношении объемов среды и суспензии посевного мицелия, г/л сухого мицелия на пятые сутки роста, приведен в табл. 10.
Алании 3,04
Фенил-алании 3,10
Валин 5,06
Метионин 2,46
Лейцин 3,45
Изолейцин 5,88.
В результате исследований, проведенных авторами по подбору оптимальных условий культивирования Pleurotus ostreatus при глу15 билонном выращивании,,на вышеуказанных средах получен следующий максимальный выход сухого культурального мицелия: на третьи сутки роста до 20,5 г/л, на пятые сутки до
23 г/л, на седьмые сутки до 36,2 г/л. На среде
20 с сахарозой, мочевиной и отваром красного клевера до 17,7 г/л сухого мицелия на третьи сутки роста; до 21,7 г/л на пятые сутки и до
27,6 г/л на седьмые сутки. На пивном сусле с 0,1% СаСОз до 27,2 г/л сухого мицелия на
25 5 сутки роста. При поверхностном выращивании на пептонно-глюкозной среде гриб образовывал до 12,8 г/л сухого мицелия, на автолизате сине-зеленых водорослей до 8 г/л, на барде до 7,5 г/л. Сырая мицелиальная
30 масса, выращенная глубинно и поверхностно на данных средах, обладает "ильным грибным ароматом. Мицелий, высушенный при температуре +40 С, сохраняет аромат в течение нескольких месяцев (при хранении как в хо35 лодильнике, так и при комнатной температуре).
Колонии гриба на сусло-агаре белые, войлочные, при старении мицелий местами становится рыжевато-буроватым, иногда наблю40 дается образование зачатков плодовых тел в виде бугорков и небольших выростков, сильный грибной аромат. Гифы бесцветные, раз ветвленные с перегородками, с многочисленными пряжками. Толщина гиф 2,5 — 5,4 мк.
Таблица 10
5:5
7:3
6:4
8:1
;9: 1
16,9
20,1
24,8
22,2
19,5
Примечание. Среда — инокулюм.
Влияние механических добавок (CaCO3 и агара) на рост в глубинной культуре Pleurotus ostreatus, % к контролю (без добавок), приведен в табл. 11.
Таблица 11
Агар
СаСО
Без
Без
СаСО, 0,1 %
0,01 %
0,01 % 0,1 % агара
134
100
137
126 147
Мицелий гриба, выращенный поверхностно на пивном сусле (4 по Баллингу) содержит
24,7% общего белка и следующие аминокислоты, % к общему белку:
Лизин 5,3 4
Гистидин 2,34
Аргинин 6,09
Серии 3,65
Глици н 1 1,7
Глутаминовая кислота 8,62
Треонин 4,30
Рост Pleurotus ostreatus на синтетической целия на среде без витаминов и стимуляторов, минеральной среде с витамином В1 и отвара- приведен в табл. 9. ми кормовых растений, % к сухому весу ми- 5
4,27993
Составитель Б, Дунье
Редактор В. Блохина
Техред Т. Курилко
Корректор Т. Хворова
Заказ 2866/8 Изд. № 1687 Тираж 456 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
Москва, K-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2
При старении колонии встречаются участки гиф, наполненные капельками жира, При поверхностном выращивании на пивном сусле и других благоприятных для роста средах образуется плотная мицелиальная пленка, при старении мицелий в некоторых местах, приобретает рыжевато-бурый оттенок, появляются зачатки плодовых тел. Культуральный мицелий обладает сильным грибным ароматом. Гифы с многочисленными пряжками. Толщина гиф 2,5 — 5,4 мк. При глубинном выращивании описываемый штамм гриба растет в виде мицелиальных шариков, размер которых значительно варьирует в зависимости от количества посевного материала и состава питательной среды. Гифы 2,5 — 3 мк толщины с многочисленными пряжками. Культуральный мицелий обладает отчетливым грибным ароматом.
Предмет изобретения
Штамм гриба Pleurotus ostreatus (Fr)
Кшптег ИМВ F-1300-продуцент биомассы.
Сусло-агар. Колонии белые, войлочные, с ,грибным запахом. При старении мицелий местами приобретает рыжевато-бурый оттенок, иногда наблюдается образование зачатков плодовых тел в виде выростов и бугорков. Ги6 фы бесцветные, разветвленные с перегородками и многочисленными пряжками. Толщина гиф 2,5 — 5,4 мк. При старении встречаются участки гиф, наполненные капельками жира.
5 Жидкое пивное сусло (4 Баллинга) и агар — 0,01 .
На поверхности образуется плотная войлочная белая мицелиальная пленка, которая с возрастом в некоторых участках приобретает
10 буроватый оттеиок И зачаток плодовых тел.
Гифы имеют многочисленные пряжки. Мицелий обладает грибным запахом.
При глубинном выращивании, например, на средах с пептоном и отваром клевера, с моче15 виной и дрожжевым автолизатом, растет в виде мицелиальных шариков. Толщина гиф
2,5 — 3,0 мк с многочисленными пряжками.
Мицелий обладает грибным запахом.
Растет при рН среды 3,0 10,0.
20 Опношение к источнику углерода: ассимилирует,глюкозу, .ксилозу, галактозу, сахарову, лактозу, мальтозу, .раффинозу, крахмах, маннит.
Отношение к источнику азота: из неоргани25 ческих соединений усваивает натрий азотнокислый, аммоний хлористый, аммоний виннокислый, из оргацических соединений — мочеви ну, пептон. Не усваивает аспарагин.
