Способ получения литических ферментов
ОЛИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ ( Союз Советских Социалистических Республик К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 18.10.72 (21) 1838505/28-13 с присоединением заявки № (32) Приоритет Опубликовано 15.06.74. Бюллетень № 22 Дат", опубликования описания 05.11.74 (51) М. Кл. С 12d 13/10 Государственный комитет Совета Министров СССР па делам изобретений и открытий (53) УДК 577.15.08 (088.8) (72) Авторы изобретения С. П. Воротило и С. А. Коновалов Всесоюзный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ ЛА = 1" Х100>С Изобретение относится к микробиологической промышленности. Известен способ получения литических ферментов путем культивирования актиномицетов на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли. С целью повышения активности литических ферментов по предлагаемому способу используют актиномицеты, относящиеся к виду griseinus, а культивирование осуществляют при 43 — 45 С. При этом из актиномицетов griseinus используют штамм 11. В 30-литровый ферментер заливают 16 л водопроводной воды с солями, г: К2НР04 32 MgSO4 7Н О 0,8 (NHg) gSOg 16 СаСОз 16 Дрожжи 64 Дрожжевой автолизат 160. Отдельно заваривают 160 г растворимого крахмала в 1 л воды и заливают в ферментер. Затем среду стерилизуют в течение 30 мин при 120+5 С, после чего простерилизованную среду охлаждают до 45+3 Ñ; рН среды составляет 6,0+-0,1; объем среды 16 л. Среду засевают суспензией культуры Actinomyces griseinus — 11, выращивают в течение суток при 43 — 45 С на этой же среде. Ферментацию ведут в течение 18 час при 44+1 С с постоянным перемешиванием 300 об/мип и подачей воздуха 1,5 объема на 1 объем среды в 1 мин. По окончании ферментации активность ферментов, растворяющих клеточную оболочку 5 дрожжей в культуральной жидкости, составляет 8000 ед/мл. Активность литических ферментов в культуральной жидкости проводят по способу Tabata 10 где ЛА — литическая активность; f — степень разбавления ферментного пре15 парата; do — начальная оптическая плотность; 4 — оптическая плотность через некоторое время; dE — разница оптических плотностей конт20 рольного образца (до и после реакции), t — время инкубации = 60 мин. Данный штамм выделен из краснодарских почв и имеет следующие признаки. М о р ф о л î r и я. Спороносцы неспиральные, 25 короткие, расположены метелками, споры палочковидные. Культура бесцветная, пигментов и бурого вещества не образует. Воздушный мицелий темно-серый. С и н т е т и ч е с к а я с р е д а. На нитратной 30 среде с сахарозой рост хороший, колонии и 432189 Составитель М. Ларина Техред Л. Акимова Корректор А. Сгепанова Редактор В. Блохина Заказ 2956/11 Изд. Мв 1768 Тираж 456 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Я-35, Раушская наб., д. 4 5 Типография, пр. Сапунова, 2 среда бесцветные. Воздушный мицелий темносерый. На нитратной среде с сахарозой рост хороший, колонии и среда бесцветные, воздушный мицелий серый. О р г а н и ч е с к а я с р е д а. На крахмальном агаре рост обильный, колонии и среда не окрашены. Воздушный мицелий серо-оливковый. На ломтиках картофеля колонии бесцветные с желтоватым оттенком. Среда окрашена и не буреет. 5Келатину разжижает быстро, молоко свертывает и пептонизирует, крахмал гидролизует быстро. Восстанавливает нитраты. Тирозиназа положительная. Среда Треснера-Данга чернеет. Отношение к углеводам, Ассимилирует глюкозу, глицерин, сахарозу, ксилозу, арабинозу, рамнозу. Антагонизм проявляет к грамположительным и грамотрицательным бактериям. Подавляет рост некоторых грибов и дрожжей. Предложенный штамм Actinomyces griseinus в отличие от известных обладает повышенной способностью к биосинтезу литических ферментов, обладающих широким спектром действия, а именно на клеточные стенки 5 дрожжей, выращиваемых как HB углеводной, так и на углеводородной среде. Кроме того, комплекс литических ферментов актиномицета состоит из активных манноназ и глюканаз, определяющих его каталитические свойства. Предмет изобретения 1. Способ получения литических ферментов путем культивирования актиномицетов на питательной среде, содержащей источники угле15 рода, азота и минеральные соли, о тл и ч а юшийся тем, что, с целью повышения активности ферментов, используют актиномицеты, относящиеся к виду griseinus, а культивирование осуществляют при 43 — 45 С. 20 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что из актиномицетов вида griseinus используют штамм 11.
