Патент ссср 358360

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

358360

Союз Советскиз

Социалистические республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 09.Х!1.1970 (№ 1494264/28-13) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано ОЗ.Xl.1972. Бюллетень № 34

Дата опубликования описания 19.1.1973

М. Кл, С 12d 13/10

Комитет по делам изсеоетеиий и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 577,15.07(088 8) P. В. Фениксова, Н. А. Тиунова, Н. Я. Кобзева, Л. И. Костычева и В. Д. Кузнецов

Ордена Ленина институт биохимии имени А. Н. Баха

Авторы п-,обретения

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ

Изобретение относится к производству ферментных препаратов, в частности к способу получения литических ферментов.

Известен способ получения литических ферментов путем выращивания их продуцентов на питательной среде.

В предлагаемом способе используют Actinomyces cellulosae, что повышает активность ферментов.

Для получения литических ферментов це- 10 лесообразно использовать штамм Actinomyces

cell ulosae № 41.

В качестве питательной среды можно использовать питательную среду следующего состава (в %): глюкоза 0,25; крахмал 0,7; отруби пшеничные 0,7; дрожжи пекарские (по сухому весу) 1,0; кукурузный экстракт (по сухому весу) 0,5; мел 0,5; двузамещенный сернокислый аммоний 0,3 при рН равном 7,0.

Способ заключается в следующем. 20

Пример. Посевной материал выращивают в колбах емкостью 750 мл на качалке в течение 1 — 2 суток. Посевной материал вносят в среду в количестве 4% от общего объема среды. Состав посевной среды и среды для 25 культивирования актиномицета следу.ющий (в %): глюкоза 0,25; крахмал 0,7; отруби пшеничные (измельченные) 0,7; дрожжи пекарские (по сухому весу) 1,0; двузамещенный сернокислый аммоний (NH4) 2$0 0,3, куку- ЗО рузный экстракт (по сухому весу) 0 5, мел

0,5, рН после стерилизации должен быть равен 7,0, температура выращивания 27 — 28, аэрация 1 — 2 объема воздуха на 1 объем среды в минуту, скорость вращения мешалки

300 — 400 об)мин. длительность культивирования 4 суток.

Культуральная жидкость, полученная после отделения мицелия, способна полностью растворять вещества клеточных стенок дрожжей, в том числе трудногидролизуемый дрожжевой глюкан клеточных стенок с образованием восстанавливающих сахаров, среди которых преобладает глюкоза.

1 мл культуральной жидкости, разведенной в 15 раз, за 1 час при 40 С, рН 7,5 — 8,0 в

1,5 мл инкубационной смеси способен лизировать 20% прогретых при 100 в течение

10 .кин дрожжей Saccharomyces cerevisiae, когда их концентрация в инкубационной смеси составляет 0,20% (по весу сухого вещества). Дрожжи выращивают на сусле 7,5 Балл в течение 17 час.

1 мл неразведенной культуральной жидкости за то же время и в тех же условиях лизирует прогретые дрожжи S. cerevisiae npu Candida guiIliermondii аа 2 час на 90%.

l,мл неразведенной культуральной жидкости предлагаемого актиномицета способен в тех же условиях pac:.ùånèòü 25% клеток жи358360

Составитель М, Ларина

Корректоры: Т. Медведева и Л. Бадылама

Техред Л. Богданова

Редактор С. Титова

Заказ 4420/6 Изд. № 1720 Тираж 406 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 вых дрожжей за 4 час и 90% клеток живых дрожжей за 1 сутки.

Сухой препарат лизирующих ферментов может быть получен путем осаждения ферментов четырьмя объемами этилового спирта, двумя объемами ацетона или сернокислым аммонием при 80о/о насыщения.

В процессе получения сухого препарата наименьшая инактивация (на 10 — 15%) наблюдается в случае осаждения сернокислым аммонием.

Культурно-морфологическая характеристика Actinomyces cellulosae штамма 41 на 10-е сутки роста.

На агаре Ваксмана и на синтетической среде CP 1 с глюкозой. Воздушный мицелий очень скудный, белесый (д ) — обозначения окраски — по «Шкале цветов» Вондарцева, 1954, собственный мицелий светло-оливково-серый (н1), пигмента нет, колонии округлые, уплощенные, слегка фестончатые.

На синтетической среде CP 1 с к р а х м а л о м, Воздушный мицелий мучнистый бледно-розоватый (a5), субстратный мицелий палевый (о4), пигмента нет.

Н а кукурузный ср еде № 2. Воздушный мицелий палевый (о4), субстратный мицелий оливковый (нl), пигмент буроватый.

Н а о вся ной ср еде. Воздушный мицелий скудный, белесый (д1), субстратный мицелий сливковый (пl), пигмент буроватый.

Н а среде Г аузе № 2. Воздушный мицелий отсутствует, субстратный мицелий коричневый (в7), пигмент светло-буроватый.

Спороносцы прямые, искривленные, споры круглые и овальные.

Физиолого-биохимические свойства А. cellulosae штамма 41. Не образует меланоидного пигмента, Гидролизует крахмал (зоны гидролиза — 19 мм), Использует в качестве единственных источников углерода: глюкозу, кси10 лозу, арабинозу, маннит и фруктозу. Не потребляет: рамнозу, сахарозу, рафинозу и инозит.

Штамм синтезирует в глубинных условиях систему ферментов, состоящую из P — 1,3—

15 глюканазы, протеиназы и хитиназы.

Предмет изобретения

1. Способ получения литических ферментов путем выращивания их продуцентов на пита20 тельной среде, отличающийся тем, что, с целью повышения активности ферментов, в качестве продуцентов используют Actinomyces сеl 1u1osae.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что

25 используют штамм Actinomyces cellulosae № 41

3. Способ по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что используют питательную среду следующего состава (в %): глюкоза 0,25; крахмал 0,7;

З0 отруби пшеничные 0,7; дрожжи пекарские (по сухому весу) 1,0; кукурузный экстракт (по сухому весу) 0,5; мел 0,5; двузамещенный сернокислый аммоний 0,3 при рН равном 7,0.